HPLC法測(cè)定多西他賽不同配制方法殘留量

付恩桃， 劉修樹(shù)， 胥振國(guó)， 方麗波， 李 民， 李會(huì)婷*(．合肥職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物應(yīng)用技術(shù)系，安徽 合肥 38000；．安徽省立醫(yī)院 藥劑科，安徽 合肥 3000)

近年來(lái)，為了保證配制藥品的潔凈要求，提高藥品應(yīng)用合理性和靜脈輸液的安全性，更好的發(fā)揮藥師的作用，同時(shí)也加強(qiáng)職業(yè)防護(hù)[1]，越來(lái)越多的醫(yī)院已建立了靜脈用藥調(diào)配中心(PIVAS)。安徽省立醫(yī)院PIVAS服務(wù)于臨床23個(gè)科室，每日配制量極大，多西他賽作為重要抗腫瘤藥物之一，主要用于治療乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌及前列腺癌[2]，臨床使用頻率較高，每日在PIVAS中調(diào)配較多，但在調(diào)配過(guò)程中發(fā)現(xiàn)多西他賽注射液較難配制，極易造成藥物殘留。

多西他賽為粘稠液體，不易溶于一般溶劑，雖然現(xiàn)用多西他賽注射液有專(zhuān)用溶劑，但仍受溫度、操作方法、時(shí)間等因素影響較大，有些廠(chǎng)家并未注明標(biāo)準(zhǔn)調(diào)配方法，如配制不當(dāng)，極易造成多西他賽在溶解過(guò)程中析出，且不易再次溶于專(zhuān)用溶劑，造成多西他賽注射液較大殘留，致使實(shí)際治療量少于醫(yī)囑量，影響了多西他賽臨床治療藥物濃度，直接影響治療效果[3]。本文比較PIVAS中不同配制方法多西他賽殘留量，為多西他賽的合理配制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Shimadzu LC-10AD高效液相色譜儀，多西他賽注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，規(guī)格：0.5 mL:20 mg)，專(zhuān)用溶媒(13%乙醇，1.5 mL)，多西他賽對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)： 100666-201403)，水為純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 多西他賽對(duì)照溶液的配制 取多西他賽對(duì)照品適量，加入微量乙醇溶解，并加入流動(dòng)相溶解制成濃度約1 mg/mL的對(duì)照品溶液[4]。

1.2.2 色譜條件 色譜柱：Diamond-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:乙腈∶水=75∶25，檢測(cè)波長(zhǎng)232 nm，柱溫25℃，流速0.9 mL/min，進(jìn)樣量20 μL。在此色譜條件下分離得到多西他賽對(duì)照品色譜圖分離度好，出峰時(shí)間較短，見(jiàn)圖1。

圖1 多西他賽對(duì)照品HPLC色譜圖Fig.1 Docetaxel reference substance HPLC chromatogram

1.2.3 多西他賽幾種配制方法殘留量的比較 A組：多西他賽注射液從冰箱中取出，去除外包裝，室溫放置0 min、5 min、10 min后，略?xún)A斜多西他賽注射液西林瓶，將多西他賽專(zhuān)用溶劑全部移取至對(duì)應(yīng)的多西他賽注射液中，手動(dòng)搖勻，直立放于生物安全柜內(nèi)，20 min后，抽取全部藥液至相應(yīng)輸液中。

B組：多西他賽注射液從冰箱中取出，去除外包裝，室溫放置0 min、5 min、10 min，略?xún)A斜多西他賽注射液西林瓶，將多西他賽專(zhuān)用溶劑全部移取至對(duì)應(yīng)的多西他賽注射液中，上下顛倒輕輕混勻45 s，直立放于生物安全柜內(nèi)，20 min后，抽取全部藥液至相應(yīng)輸液中。

1.2.4 多西他賽注射液殘留溶液的收集與測(cè)定 取配制完成的多西他賽注射液西林瓶，每組6支，加入1 mL 13%乙醇，上下顛倒西林瓶，再次完全溶解，加入流動(dòng)相4 mL 進(jìn)行沖洗，沖洗兩次，將全部沖洗液轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中，定容至刻度。移取1 mL洗滌液至10 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度?；旌暇鶆?，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后，20 μL注入HPLC[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密移取多西他賽對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL至10 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻[5]。HPLC測(cè)定，以峰面積A對(duì)濃度C進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到方程A=31 874C+10 449，r=0.999 9。結(jié)果表明：在10.24～256 μg/mL濃度范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

吸取多西他賽對(duì)照品溶液20 μL，2.1.2色譜條件下測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)量峰面積[6]，其RSD為0.87%，精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

吸取多西他賽樣品溶液20 μL，2.1.2色譜條件下測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)量峰面積，其RSD為0.34%，重復(fù)性良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份樣品，分別于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣，1.2.2色譜條件下測(cè)定，計(jì)算其RSD為0.62%，表明該樣品至少在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密移取含量為標(biāo)示量的99.6%的多西他賽樣品50 μL，置于9個(gè)10 mL量瓶中，然后，分別加入多西他賽對(duì)照品溶液0.4、0.5、0.6 mL至上述量瓶中，制成低、中、高3種濃度溶液各三份，按照上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Table 1 Recovery test results

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用單因素方差分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.7 不同配制方法殘留藥量

由表2可知，放置0 min、5 min、10 min時(shí)，B組多西他賽注射液殘留量均小于A組(P<0.05)，A、B兩組組內(nèi)比較，放置5 min、10 min藥物殘留量均小于0 min(P<0.05)，放置10 min藥物殘留量均小于放置5 min(P<0.05；P<0.01)。

Table 2 Residual amount of docetaxel in different operation methods

組別Group藥物殘留量(mg)Drugresidues0min5min10minA組4．74±0．542．92±0．32#1．61±0．19&#B組3．16±0．32?2．22±0．18?#1．03±0．11?#

注：與A組比較，*P<0.05；同組內(nèi)比較，與放置0 min相比，#P<0.01，與放置5 min相比，&P<0.05，#P<0.01。

Note:Compared with group A,*P<0.05；Compared with the same group,compared with 0 min,#P<0.01，Compared with place 5 min,&P<0.05，#P<0.01.

3 結(jié)論與討論

多西他賽是目前治療乳腺癌的常用藥物之一，同時(shí)也與其他藥物合并用于治療非小細(xì)胞肺癌[7]、頭頸癌、胃癌等，在臨床上應(yīng)用廣泛。其作用機(jī)制主要通過(guò)促進(jìn)小管聚合成穩(wěn)定的微管并抑制其解聚從而使游離的小管數(shù)量減少，使細(xì)胞增殖停止在G2/M期。

多西他賽注射液于冰箱保存，為油狀液體，不易溶解，若操作中不注意會(huì)產(chǎn)生大量泡沫并不易消除，使大量藥物殘留至瓶中。目前，每天有大量多西他賽注射液需在PIVAS中配制，如何快速高效的配制多西他賽注射液已成為亟待解決的問(wèn)題。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)及查閱資料發(fā)現(xiàn)，多西他賽注射液的配制與室溫放置時(shí)間、藥物濃度、溶劑量、振搖方式、振搖時(shí)間、稀釋后放置時(shí)間等多種因素密切相關(guān)[8]。因此在多西他賽配制過(guò)程中需要注意以下方面：

3.1 室溫放置時(shí)間

多西他賽注射液保存在冰箱中，在配制之前，必須將其置于室溫，使其逐漸恢復(fù)至室溫，否則，多西他賽注射液難以溶解在專(zhuān)用溶劑中。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可知，A、B兩組室溫放置一段時(shí)間后多西他賽殘留量均明顯少于直接配制時(shí)多西他賽殘留量，且放置10 min后殘留量明顯少于放置5 min殘留量。因此多西他賽注射液從冰箱中取出后需首先放置于室溫至少5 min，以提高其在溶劑中的溶解度。

3.2 混勻方式與時(shí)間

多西他賽注射液為澄明油狀液體，溶解較為緩慢，輔料中有吐溫-80，在混勻過(guò)程中容易產(chǎn)生泡沫[9-10]，在前期研究中發(fā)現(xiàn)，多西他賽注射液不能使用振蕩器進(jìn)行震蕩混勻，容易出現(xiàn)大量泡沫，實(shí)驗(yàn)A組手動(dòng)搖勻，B組按照標(biāo)準(zhǔn)上下顛倒輕輕混勻45 s，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，室溫下放置0 min、5 min、10 min，B組多西他賽殘留量均明顯小于A組。由此可知，手動(dòng)搖勻也可能會(huì)產(chǎn)生一定量的泡沫，且難以保證混合均勻，同時(shí)，西林瓶中藥液難以完全溶于溶劑中，容易造成較大殘留。因此，調(diào)配人員在配制過(guò)程中，不能急于完成配制任務(wù)，而應(yīng)該按照說(shuō)明書(shū)要求上下顛倒45 s輕輕混勻進(jìn)行配制，以保證患者用藥足量。

3.3 藥物濃度與溶解度

藥物濃度越高，越不易溶解，因此在配制時(shí)需將專(zhuān)用溶劑全部轉(zhuǎn)移至多西他賽注射液西林瓶中，并沿西林瓶壁慢慢注入，以免引起大量泡沫。配制前將多西他賽注射液室溫放置一段時(shí)間可使西林瓶?jī)?nèi)全部藥液落回底部，避免西林瓶頸部藥液不能被稀釋溶解，同時(shí)減少溶劑在西林瓶頸部和瓶壁的殘留。

3.4 其它影響因素

在配制過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，若多西他賽注射液溶解不夠充分，會(huì)有油狀液體留于西林瓶中，若此時(shí)抽吸，難以抽吸干凈，并有藥液吸附于注射器上，造成藥物損失。因此，在抽吸液體之前，需進(jìn)行觀(guān)察，確定多西他賽的溶解程度。同時(shí)，由于多西他賽注射液為黏稠狀注射液，在抽吸過(guò)程中，易產(chǎn)生澀感，針筒與針?biāo)ǜ菀装l(fā)生脫離現(xiàn)象，因此，在抽吸液體前，應(yīng)將針?biāo)ü潭◣状巍?/p>

綜上所述，在配制過(guò)程中，盡量減少泡沫的產(chǎn)生，盡可能的將多西他賽注射液輕搖混勻，并放置足夠的時(shí)間使其泡沫消除，在抽吸轉(zhuǎn)移時(shí)，減少針?biāo)撀?，在配制之前，使多西他賽注射液逐漸恢復(fù)室溫的操作可能尤其關(guān)鍵。在日常工作中，需加強(qiáng)業(yè)務(wù)知識(shí)的學(xué)習(xí)，規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)操作，以保證患者安全、足量的用藥。

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