siRNA沉默F(xiàn)oxO1對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜IL- 1β的影響及其作用機(jī)制

廖洪霞，魏艷麗，朱曉燕，葉劍，周琦，呂紅彬

(1.第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所 眼科，重慶 400042； 2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 眼科，四川 瀘州 646000)

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，也是工業(yè)化國(guó)家人民致盲的首要病因[1- 2]。盡管激光光凝、玻璃體切除術(shù)等眼科治療技術(shù)明顯改善了患者的預(yù)后，但是血糖精準(zhǔn)控制的難度、部分患者對(duì)治療不敏感等原因?qū)е翫R患者數(shù)量依然居高不下。因此，探討DR的發(fā)生機(jī)制對(duì)提高治療效果、改善患者預(yù)后具有重要意義。白細(xì)胞介素- 1β(interleukin- 1β, IL- 1β)參與早期的炎癥反應(yīng)，并調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡、變性等過(guò)程。有研究[3]顯示,DR大鼠模型的血漿、玻璃體和視網(wǎng)膜IL- 1β表達(dá)明顯增加，IL- 1β持續(xù)升高又會(huì)反饋性誘導(dǎo)視網(wǎng)膜炎癥擴(kuò)大。叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子O1(forkhead transcription factor O1, FoxO1)是叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子O家族蛋白中最早被發(fā)現(xiàn)的成員，既往研究[4]稱(chēng)DM大鼠視網(wǎng)膜組織中FoxO1表達(dá)增加，且FoxO1表達(dá)與炎癥反應(yīng)和凋亡的增加呈正相關(guān)。但是在DR的發(fā)生和進(jìn)展中，F(xiàn)oxO1、IL- 1β之間的調(diào)控機(jī)制依然不清楚。本研究利用小干擾RNA(small interfering RNA, siRNA)技術(shù)干擾DM大鼠視網(wǎng)膜和人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中的FoxO1表達(dá)，旨在探討FoxO1對(duì)IL- 1β的影響及可能的調(diào)控機(jī)制，現(xiàn)將研究成果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與動(dòng)物來(lái)源

原代人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HRCECs)購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心(ATCC)，細(xì)胞加入內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)箱中37 ℃、5%CO2培養(yǎng)，隔日更換1次培養(yǎng)基。

60只SPF級(jí)Sprague- Dawley大鼠購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，大鼠8周齡，均為雄性，體重(200±20)g。大鼠于12 h光照/12 h黑暗條件下飼養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。本研究大鼠的使用、喂養(yǎng)和操作均嚴(yán)格遵守科技部《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》的相關(guān)要求。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)完全培養(yǎng)基(Gibco公司，美國(guó))，鏈脲佐菌素(STZ，Sigma公司，美國(guó))，SYBR Green master mix(Exiqon公司，丹麥)，BCA蛋白定量試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，F(xiàn)oxO1 miRNA慢病毒載體及陰性對(duì)照組(si- FoxO1，上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司)，胰蛋白酶(北京索萊寶科技有限公司)，Total RNA提取試劑(日本TaKaRa公司)，PCR引物(上海生工生物工程有限公司)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(Earthox公司，美國(guó))，4,6- 二脒基- 2- 苯基吲哚(DAPI，羅氏公司，瑞士)，鼠抗大鼠GAPDH抗體(Sigma公司，美國(guó))，鼠抗人IL- 1β抗體(Sigma公司，美國(guó))，鼠抗人P38、p- P38抗體(Cell Signaling Technology公司，美國(guó))，鼠抗人JNK、p- JNK抗體(Cell Signaling Technology公司，美國(guó))，鼠抗人ERK、p- ERK抗體(Cell Signaling Technology公司，美國(guó))，鼠抗人FoxO1抗體(Sigma公司，美國(guó))。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

流式細(xì)胞儀(BD公司，美國(guó))，倒置熒光顯微鏡(奧林巴斯公司，日本)，Real time- PCR儀(ABI公司，美國(guó))，電泳儀(北京市六一儀器廠)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 細(xì)胞分組與處理 本研究前期委托上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成si- FoxO1及相應(yīng)的陰性對(duì)照(NC- FoxO1)，并構(gòu)建至pGLV3- GFP慢病毒穿梭質(zhì)粒中，si- FoxO1序列為5′- TCTGTCCGTACACAGVAAG- 3′，NC- FoxO1序列為5′- TTCTCGGAAGCTGTCACGT- 3′。HRCECs按照處理方式分為空白對(duì)照組(Mock組)、陰性對(duì)照組(NC- FoxO1組)和si- FoxO1組(si- FoxO1組)3組。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HRCECs細(xì)胞，以1×104個(gè)·孔-1接種于96孔板，用全培養(yǎng)基將轉(zhuǎn)染腺病毒稀釋為6×108TU·ml-1，分別向每孔加入100 μl上述稀釋病毒，置于CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，72 h后倒置顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)情況。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞70%融合后分別加入含5、15、25、35 mmol·L-1葡萄糖的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h，采用RT- PCR和Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞FoxO1、IL- 1β表達(dá)。

1.4.2 DM大鼠分組及模型建立 60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(Control組)、DM組、si- FoxO1轉(zhuǎn)染組(LV- si- FoxO1組)和空病毒轉(zhuǎn)染組(LV- NC組)4組，每組15只。DM組、LV- si- FoxO1組、LV- NC組建立DM大鼠模型。造模前大鼠禁食12 h，自由飲水，分別向大鼠腹腔注射60 mg·kg-11%STZ溶液，Control組大鼠注射等體積生理鹽水，72 h后取尾靜脈血檢測(cè)血糖，以連續(xù)3次尾部血糖≥16.7 mmol·L-1作為DM大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后腹腔注射戊巴比妥鈉3 ml·kg-1麻醉大鼠，滴加托比卡胺滴眼液擴(kuò)瞳，用29 G針頭抽取10 μl 慢病毒載體溶液(Control組、DM組不注射，LV- si- FoxO1組注射si- FoxO1溶液，LV- NC組注射空載體病毒溶液)，以45°從角鞏膜緣進(jìn)針，注射完畢后局部涂抹左氧氟沙星預(yù)防感染。

1.4.3 標(biāo)本采集 腺病毒注射12周后腹腔注射戊巴比妥鈉3 ml·kg-1麻醉，完全麻醉后仰臥位固定于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)。將大鼠眼球完整剝離后分為兩部分，一部分用4%多聚甲醛固定48 h，梯度乙醇洗脫，石蠟包埋，用于免疫組化染色。另外一部分新鮮眼球組織用手術(shù)剪剪成2 mm×2 mm小塊狀后立即置于液氮保存，用于后續(xù)RT- PCR和Western blot檢測(cè)。

1.4.4 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)樣本FoxO1、IL- 1β表達(dá) 取組織切片，脫蠟和水化后PBS沖洗3次，高壓鍋水浴法修復(fù)組織抗原，滴加3%H2O2室溫孵育10 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗3次。滴加100 μl FoxO1或IL- 1β抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，第2天PBS沖洗3次，再滴加1～2滴二抗，室溫孵育40 min，PBS沖洗后滴加DAB染液，蘇木精復(fù)染，HCl分化，自來(lái)水反復(fù)沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固，鏡下觀察。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4.5 RT- PCR檢測(cè)FoxO1、IL- 1β mRNA表達(dá) 取處理后的細(xì)胞，棄去培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶消化，PBS沖洗，加入1 ml Total RNA提取試劑提取總RNA。取40 mg 眼球組織置于EP管中，加入Total RNA提取試劑振蕩提取總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑說(shuō)明書(shū)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，F(xiàn)oxO1上游為5′- GGCTGAGGGTTAGTGAGCA- 3′，下游為5′- AGGGAGTTGGTGAAAGACATC- 3′；IL- 1β上游為5′- AGGGCAGAATCATGAGCAAGT- 3′，下游為5′- AGGGTCTGCATTGGATGGCA- 3′；GAPDH上游為5′- CACCATTGGCAATGAGGGGTTC- 3′，下游為5′- AGGTCTTTGCGGATGTCCACGT- 3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 2 min，總計(jì)40個(gè)循環(huán)。定量分析結(jié)果以Ct值表示，以GAPDH作為內(nèi)參，2-ΔΔCt計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。

1.4.6 Western blot檢測(cè)FoxO1、IL- 1β、p- P38、p- JNK、p- ERK蛋白表達(dá) 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，或?qū)⒀矍蚪M織切片研磨粉碎，加入1 ml RIPA裂解液提取總蛋白，BCA蛋白濃度試劑盒檢測(cè)蛋白純度。將50 μg蛋白提取液置于10% SDS- PAGE電泳分離，常規(guī)濕法轉(zhuǎn)膜，加入5%脫脂牛奶孵育封閉2 h。分別加入相應(yīng)一抗：FoxO1(1∶200)、IL- 1β(1∶200)、P38(1∶100)、p- P38(1∶100)、JNK(1∶500)、p- JNK(1∶500)、ERK(1∶200)、p- ERK(1∶200)、GAPDH(1∶100)，4 ℃孵育24 h。再滴加二抗37 ℃孵育2 h。PBS沖洗3次，用ECL化學(xué)發(fā)光顯影試劑盒顯影，以GAPDH作為內(nèi)參照，掃描目的條帶和內(nèi)參條帶，使用Image J軟件對(duì)條帶進(jìn)行分析，計(jì)算目的條帶相對(duì)表達(dá)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件和GraphPad Prism 7.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 高糖環(huán)境誘導(dǎo)HRCECs FoxO1、IL- 1β表達(dá)增加

與5 mmol·L-1葡萄糖濃度組比較，15 mmol·L-1濃度組FoxO1、IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，25 mmol·L-1濃度組FoxO1、IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)明顯高于5 mmol·L-1濃度組，而35 mmol·L-1濃度組FoxO1、IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)增加的更明顯，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明葡萄糖以濃度依賴(lài)性的方式誘導(dǎo)HRCECs FoxO1、IL- 1β表達(dá)增加，見(jiàn)圖1。

與5 mmol·L-1濃度組比較，*P<0.05，**P<0.05

A.RT- PCR檢測(cè)HRMECs FoxO1、IL- 1β mRNA表達(dá)；B.Western blot檢測(cè)HRMECs FoxO1、IL- 1β蛋白表達(dá)

圖1高糖誘導(dǎo)HRCECsFoxO1、IL-1β表達(dá)

2.2 si- FoxO1抑制HRCECs IL- 1β表達(dá)

NC- FoxO1、si- FoxO1轉(zhuǎn)染72 h后倒置熒光顯微鏡下觀察，NC- FoxO1、si- FoxO1組可見(jiàn)大量GFP表達(dá)，而Mock組僅見(jiàn)少量GFP表達(dá)(圖2A)，說(shuō)明慢病毒載體呈穩(wěn)定、高效轉(zhuǎn)染。RT- PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，si- FoxO1組FoxO1 mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于NC- FoxO1組和Mock組(P<0.05)，證實(shí)si- FoxO1轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型建立成功。與NC- FoxO1組比較，si- FoxO1組IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)，NC- FoxO1組和Mock組IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖2B～C。

與NC- FoxO1組比較，**P<0.05

A．倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞GFP表達(dá)；B.RT- PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞FoxO1、IL- 1β mRNA表達(dá)；C.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞FoxO1、IL- 1β蛋白表達(dá)

圖2si-FoxO1慢病毒轉(zhuǎn)染后對(duì)FoxO1、IL-1β表達(dá)的影響

2.3 免疫組化染色檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜FoxO1、IL- 1β表達(dá)

免疫組化染色結(jié)果顯示，DM組大鼠FoxO1陽(yáng)性染色主要分布于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)狀層，IL- 1β陽(yáng)性染色細(xì)胞分布于視網(wǎng)膜全層。與Control組和LV- si- FoxO1組比較，DM、LV- NC組FoxO1、IL- 1β表達(dá)明顯增加(P<0.05)；LV- NC組與Control組FoxO1、IL- 1β表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，DM組和LV- NC組FoxO1、IL- 1β表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖3。

2.4 si- FoxO1抑制大鼠視網(wǎng)膜IL- 1β表達(dá)

DM組和LV- NC組FoxO1、IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)明顯高于Control組和LV- si- FoxO1組(P<0.05)，LV- NC組與Control組FoxO1、IL- 1β表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，DM組和LV- NC組FoxO1、IL- 1β表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

2.5 FoxO1通過(guò)MARK信號(hào)通路調(diào)節(jié)IL- 1β表達(dá)

si- FoxO1組p- P38、p- JNK、p- ERK蛋白表達(dá)明顯低于NC- FoxO1組和Mock組(P<0.05)，NC- FoxO1組和Mock組p- P38、p- JNK、p- ERK蛋白表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖5。

圖3免疫組化染色檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜FoxO1、IL-1β表達(dá)×200

與Control組比較，**P<0.05；與LV- NC組比較，##P<0.05

A.RT- PCR檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜FoxO1、IL- 1β mRNA表達(dá)；B.Western blot檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜FoxO1、IL- 1β蛋白表達(dá)

圖4si-FoxO1抑制大鼠視網(wǎng)膜IL-1β表達(dá)

3 討 論

DR是DM最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥，目前研究[5- 6]證實(shí)黏附分子、炎癥因子和趨化因子等與DR的發(fā)病和進(jìn)展密切相關(guān)。在DM患者和DR大鼠模型的視網(wǎng)膜、玻璃體及血漿中，促炎因子IL- 1β及下游靶基因Caspase- 1表達(dá)明顯上調(diào)[7]，提示IL- 1β可能參與了DR的發(fā)病。本研究顯示葡萄糖以濃度依賴(lài)性的方式誘導(dǎo)HRCECs IL- 1β表達(dá)增加，提示高血糖能夠誘導(dǎo)IL- 1β表達(dá)升高，進(jìn)而參與視網(wǎng)膜病變的進(jìn)程。與TNF- α不同，IL- 1β雖然不能殺死細(xì)胞，但是可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[8]。有研究[9]顯示，向大鼠玻璃體內(nèi)注射IL- 1β可以引起視網(wǎng)膜微血管細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致視網(wǎng)膜出現(xiàn)組織病理改變。FoxO1可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞分化、增殖、自噬和氧化應(yīng)激，也是DR早期炎癥激活的主要誘導(dǎo)因素。Battiprolu等[10]報(bào)道稱(chēng)1型和2型DM大鼠視網(wǎng)膜中FoxO1活性增加，同時(shí)伴有炎癥反應(yīng)增強(qiáng)和視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡增加。本研究在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著葡萄糖濃度升高HRMECs FoxO1表達(dá)逐漸增加，說(shuō)明高血糖環(huán)境也可以激活FoxO1的活性。

與NC- FoxO1組比較，**P<0.05

A.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞MAPK通路相關(guān)蛋白電泳圖；B.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞p- P38蛋白表達(dá)；C.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞p- JNK蛋白表達(dá)；D.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞p- ERK蛋白表達(dá)

圖5si-FoxO1慢病毒轉(zhuǎn)染后對(duì)MAPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

既往有報(bào)道[11]證實(shí)FoxO1可以調(diào)控IL- 1β表達(dá)，但是在視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞中是否存在相似情況依然未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用siRNA技術(shù)干擾HRMECs FoxO1表達(dá)，結(jié)果顯示si- FoxO1組IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于NC- FoxO1組和Mock組，說(shuō)明抑制FoxO1可以降低視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞IL- 1β表達(dá)，從而降低視網(wǎng)膜微血管炎癥反應(yīng)。Wang等[12]也證實(shí),FoxO1與靶基因的輔阻遏物或共活化劑直接結(jié)合調(diào)節(jié)IL- 1β的轉(zhuǎn)錄。國(guó)外一項(xiàng)最新研究[13]顯示，F(xiàn)oxO1與IL- 1β啟動(dòng)子結(jié)合促進(jìn)IL- 1β受體表達(dá)增加和炎癥反應(yīng)的放大。另外一項(xiàng)研究[14]稱(chēng)，在大鼠肝細(xì)胞中IL- 1β與相應(yīng)的受體結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)FoxO1過(guò)表達(dá)，提示FoxO1調(diào)控IL- 1β表達(dá)可能起到類(lèi)似正反饋的作用。本研究進(jìn)一步建立DM大鼠模型，通過(guò)動(dòng)物模型驗(yàn)證FoxO1在體內(nèi)對(duì)IL- 1β的調(diào)控作用。首先根據(jù)Huang等[15]報(bào)道的方法，向DM大鼠模型的玻璃體腔注射LV- si- FoxO1下調(diào)FoxO1的表達(dá)，免疫組化顯示FoxO1陽(yáng)性染色主要分布于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)狀層，IL- 1β陽(yáng)性染色細(xì)胞分布于視網(wǎng)膜全層，這與Xu等[16]報(bào)道結(jié)論一致。RT- PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，LV- si- FoxO1組FoxO1、IL- 1β mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于DM組和LV- NC組，說(shuō)明在DM大鼠視網(wǎng)膜中FoxO1亦參與了IL- 1β的表達(dá)。

雖然通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了抑制FoxO1可以下調(diào)IL- 1β的表達(dá)，但是FoxO1調(diào)控IL- 1β的機(jī)制依然少見(jiàn)報(bào)道。絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)[17]屬于絲蛋白/蘇氨酸激酶，也是調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞增殖和凋亡的重要信號(hào)通路。P38、JNK、ERK是MAPK家族重要成員，其中P38、JNK可被氧化應(yīng)激、高糖環(huán)境等誘導(dǎo)活化，而ERK則主要參與細(xì)胞的凋亡。李永浩等[18]證實(shí)MAPK、晚期糖基化終末產(chǎn)物均參與了DM視網(wǎng)膜血管功能的損傷。刁雪紅等[19]對(duì)2型DM小鼠模型動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行研究，結(jié)果顯示模型組、陰性對(duì)照組P38、JNK、ERK蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是模型組p- P38、p- JNK、p- ERK蛋白表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組，提示MAPK磷酸化改變參與了DM所致血管內(nèi)皮功能失調(diào)。本研究顯示si- FoxO1組p- P38、p- JNK、p- ERK蛋白表達(dá)明顯低于NC- FoxO1組和Mock組，提示抑制FoxO1表達(dá)可能是通過(guò)降低MAPK磷酸化下調(diào)IL- 1β表達(dá)。Khan等[20]報(bào)道稱(chēng),高糖干預(yù)視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞，MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白(P38、JNK、ERK)磷酸化表達(dá)增加，抑制MAPK信號(hào)通路可以抑制DR和其他DM并發(fā)癥的早期病變。

綜上所述，高糖能夠誘導(dǎo)HRCECs FoxO1、IL- 1β表達(dá)增加，抑制FoxO1表達(dá)可能是通過(guò)降低MAPK磷酸化下調(diào)IL- 1β表達(dá)，F(xiàn)oxO1有望成為DR治療的潛在分子靶點(diǎn)之一。

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