口腔潰瘍系列制劑中冰片的定量檢測和揮發(fā)性成分分析

吳 芳，羅定強，樊寶娟，李 霞，劉海靜（陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，陜西 西安 710061）

口腔潰瘍散（含片）由青黛、枯礬（白礬）、冰片3味中藥組方，具有清熱、消腫、止痛功效，常用于火熱內蘊所致的口舌生瘡、黏膜破潰、紅腫灼痛及復發(fā)性口瘡和急性口炎等?？谇粷兩藴适蛰d于2015年版《中國藥典（一部）》，口腔潰瘍含片收載于《國家藥品標準·新藥轉正標準(第80冊)》。口腔潰瘍散（含片）組方中的冰片，氣清香，味辛、涼，具揮發(fā)性?，F(xiàn)行質量標準中，口腔潰瘍散有冰片的薄層色譜鑒別，口腔潰瘍含片有冰片的理化鑒別和薄層色譜鑒別，但均未控制冰片的含量。有文獻報道了散劑中冰片或其他藥材的含量測定和薄層色譜鑒別方法[1-3]，含片中其他組分的含量測定及薄層色譜鑒別方法[4-5]，但未見對2個劑型中冰片質量進行系統(tǒng)對比研究的報道。由于冰片具有易揮發(fā)性以及摻偽的現(xiàn)象，且質量標準亟待統(tǒng)一和提高，故本研究中建立了該系列制劑中冰片的含量測定方法，同時為揭示揮發(fā)性物質的化學成分組成，使用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯(lián)用儀和頂空進樣器對樣品進行了分析?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

AE 240型電子分析天平（梅特勒公司）；AG ME 235S型電子分析天平（賽多利斯公司）；Agilent 7890A型氣相色譜儀(安捷倫公司)；QP2010型氣相色譜質譜聯(lián)用儀（日本島津公司）。

1．2 試藥

龍腦對照品（批號為 110881-200504），異龍腦對照品（批號為1512-200201），水楊酸甲酯對照品（批號為110707-200710），均由中國食品藥品檢定研究院提供；無水乙醇為色譜純；試驗用樣品購自市場，分別來企業(yè)Ⅰ～Ⅳ），每家企業(yè)各3批樣品；陰性樣品(自制)。

2 方法與結果

2．1 冰片含量測定

2．1．1 色譜條件[6-7]

色譜柱：HP-FFAP毛細管氣相色譜柱（30 m×0．25 mm，0．25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度為 65 ℃，保持1 min，以5℃ ／min升溫至230℃，保持5 min；柱溫：250 ℃；分流比：5 ∶1；載氣：氮氣；流速為 1．2 mL ／min。

2．1．2 溶液制備

內標溶液：取水楊酸甲酯對照品79．76 mg，精密稱定，加無水乙醇 100 mL，溶解，即得(質量濃度為0．797 6 g ／L)。

對照品溶液：取龍腦對照品16．51 mg，異龍腦對照品10．64 mg，精密稱定，置同一錐形瓶中，精密加入內標溶液15 mL使溶解即得，質量濃度分別為1．101 g／L，0．709 g ／L，0．466 g ／L。

供試品溶液：取口腔潰瘍含片適量，研細，取約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入內標溶液15 mL，振搖10 min，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，即得。取口腔潰瘍散適量，混勻，取約0．2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入內標溶液15 mL，振搖10 min，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，即得。

2．1．3 方法學考察

干擾試驗：按處方的比例制備缺冰片的陰性樣品，按照2．1．2項下方法制備陰性對照品溶液。取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液進行測定，結果陰性樣品溶液對測定冰片的含量無干擾。色譜圖見圖1。

線性關系考察：取異龍腦、龍腦對照品適量，精密稱定，加內標溶液配置成異龍腦含量為 0．709 0，0．354 5，0．177 25，0．088 625，0．044 3，0．022 2，0．011 1，0．005 54 g ／L 的溶液，龍腦含量為 1．101 0，0．55 05，0．275 25，0．137 6，0．068 8，0．034 4，0．017 2，0．008 602 g ／L 的溶液，進樣測定峰面積，以異龍腦和龍腦的質量濃度（X）為橫坐標、峰面積與內標物質的峰面積比值（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝1．967 X+0．002（r＝1．000，n＝8）， Y＝1．992 X+0．004（r＝1．000， n＝8）。結果表明，異龍腦進樣量在 0．011 1 ～ 1．418 0 μg范圍內，龍腦進樣量在 0．017 2 ～2．202 0 μg范圍內與峰面積線性關系均良好。

精密度試驗：取線性關系考察項下第3份對照品溶液，連續(xù)進樣7次，測定峰面積。結果異龍腦、龍腦與內標溶液峰面積比值的 RSD值分別為0．28%和0．25%（n＝7），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取口腔潰瘍散（批號為3100002），按照供試品溶液制備方法制備溶液，自制備后每隔3 h進樣1次，測定24 h內異龍腦和龍腦峰面積與內標峰面積的比 。結 果 的 平均 值 為 0．535（RSD＝1．7% ）和 0．980（RSD＝1．9%），表明供試品溶液制備后24 h內基本穩(wěn)定。

重復性試驗：取口腔潰瘍散（批號為3100002），稱取6份，按照供試品溶液制備方法制備溶液。結果樣品中異龍腦和龍腦的含量平均值分別為15．272 mg／g和28．018 mg／g，RSD 分別為 0．96% 和 0．69% （n ＝ 6），表明方法重復性較好。

圖1 龍腦含量測定氣相色譜圖

加樣回收試驗：取異龍腦對照品13．78 mg和龍腦對照品23．06 mg，加無水乙醇溶解并定容至10 mL容量瓶中（質量濃度分別為 1．378 g ／L，2．306 g ／L）。精密量取1 mL，置錐形瓶中，揮干溶劑。取口腔潰瘍散（批號為 3100002）0．1 g，稱取 6 份，精密稱定，分別置上述同一錐形瓶中，照供試品溶液處理方法制備供試液。結果見表1。

表1 龍腦含量測定加樣回收試驗結果（n＝6）

2．1．4 樣品含量測定

取水楊酸甲酯、龍腦對照品、異龍腦對照品及不同企業(yè)生產(chǎn)的3批樣品適量，按照2．1．2項下的方法制備供試品溶液，分別吸取2 μL注入氣相色譜儀，測定峰面積，按內標法計算。以龍腦和異龍腦含量之和作為冰片的含量。企業(yè)Ⅰ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量分別占處方量的96．0%，96．2%和97．5%，企業(yè)Ⅱ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量為82．8%，83．1%和86．8%，企業(yè)Ⅲ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍含片冰片含量為 75．9%，59．2%和49．8%，企業(yè)Ⅳ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量為 42．0% ，33．5% 和 43．4% 。

2．2 揮發(fā)性成分分析

2．2．1 色譜條件[8]

MS條件：電子轟擊離子源（EI）離子源，離子源溫度230℃；掃描質量范圍50～540 amu；接口溫度280℃；開始時間2．0 min。GC條件：HP-5MS毛細管氣相色譜柱（30 m × 0．25 mm，0．25 μm）；柱溫為程序升溫，初始溫度40℃，保持5 min后，以5℃ ／min升溫至220℃，保持 3 min；進樣口溫度 210℃；柱流量為 1．0 mL／min；分流比為10∶1；頂空瓶加熱溫度85℃，定量環(huán)溫度90℃，傳輸線溫度105℃[9]。

2．2．2 溶液制備

取樣品適量，研勻，精密稱取1 g，置25 mL頂空進樣瓶中，精密加水10 mL，搖勻，即得。

2．2．3 分析結果

對來自不同生產(chǎn)企業(yè)的4批供試品溶液進行檢測。以面積歸一化法計算各化學成分的相對百分含量，通過NIST11譜庫進行檢索。

企業(yè)Ⅰ：口腔潰瘍散離子流圖見圖2 A。通過鑒定，確定了6個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的99．1%。揮發(fā)性物質化學成分及相對百分含量見表2。

企業(yè)Ⅱ：口腔潰瘍散離子流圖見圖2 B。通過鑒定，確定了7個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的97．8%。揮發(fā)性物質化學成分及相對百分含量見表3。

企業(yè)Ⅲ：口腔潰瘍含片離子流圖見圖2 C。通過鑒定，確定了18個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的97．1%。揮發(fā)性物質化學成分及相對百分含量見表4。

表2 企業(yè)Ⅰ的口腔潰瘍散化學成分相對含量

圖2 企業(yè)Ⅰ～Ⅳ生產(chǎn)的口腔潰瘍系列離子流圖

企業(yè)Ⅳ：口腔潰瘍含片離子流圖見圖2 D。通過鑒定，確定了5個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的99．0%。揮發(fā)性物質化學成分及相對百分含量見表5。

表3 企業(yè)Ⅱ的口腔潰瘍散化學成分相對含量

表4 企業(yè)Ⅲ的口腔潰瘍含片化學成分相對含量

3 討論

由表2至表5可見，散劑的冰片含量明顯高于含片的含量，不同企業(yè)生產(chǎn)樣品的冰片含量差異較大，故該系列制劑的標準應增加冰片的含量測定項以進行標準的完善和提高?？谇粷兒涂谇粷兩⒌奶幏搅考肮に嚥煌?，規(guī)格及服用量不同，為進行標準統(tǒng)一和對比研究，可規(guī)定樣品每1 g中冰片的含量不得少于處方量的 80．0% 。

分別鑒定了4家生產(chǎn)企業(yè)樣品中的了6，7，18，5個化學成分，其中龍腦和異龍腦的相對含量分別為97%，93%，53%和98%。異龍腦、龍腦、葑醇及樟腦為4批樣品的共有成分，除此之外，與其他3批樣品不同的是，企業(yè)Ⅲ生產(chǎn)的口腔潰瘍含片樣品鑒定出胡薄荷酮（相對含量為 6．22% ）、薄荷醇（相對含量 14．62%）、[1 R-(1α，2β，5α)]-乙酸 -5-甲基 -2-(1-甲基乙基)環(huán)己酯（相對含量為 2．96% ）、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯等成分，這些化學成分在薄荷揮發(fā)油的相關研究中有報道[10-13]。但制劑處方中不含有薄荷揮發(fā)油或提取物，國家食品藥品監(jiān)督管理總局網(wǎng)站未查詢到該藥品注冊補充申請更改有關處方制法等的備案情況。

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[1]黃秋妹，黃艷萍，曹智啟，等．GC法測定口腔潰瘍散中冰片含量[J]．河南中醫(yī)，2011，31(6)：672-673．

[2]付麗芳，劉金發(fā)，蔡鈴英．口腔潰瘍散中冰片的薄層色譜鑒別[J]．光明中醫(yī)，2008，23(12)：1909．

[3]閆 瑋，張 楠，劉建利．HPLC測定口腔潰瘍散中色胺酮、靛藍、靛玉紅的含量[J]．中成藥，2009，31(5)：743-745．

[4]閆占社，郭 瑞，黃 飆．口腔潰瘍含片中青黛的薄層色譜鑒別方法研究[J]．中國現(xiàn)代藥物應用，2011，5(17)：75-76．

[5]蔡長虹，遲 強．HPLC法測定口腔潰瘍含片中胸腺五肽的含量[J]．醫(yī)學研究雜志，2011，40(12)：132-134．

[6]尤立華，楊秉呼，葉 萌，等．氣相色譜法同時測定大活絡膠囊多組分含量[J]．中國藥業(yè)，2014，23(19)：38-40．

[7]李彥超，李宜鮮，姚令文，等．GC法同時測定通絡祛痛膏中樟腦、薄荷腦和冰片的含量[J]．藥物分析雜志，2012，32(4)：672-675．

[8]姜家書，謝其亮，李敦明，等．氣相色譜法測定通絡祛痛膏中樟腦、薄荷腦和冰片含量[J]．中國藥業(yè)，2014，23(7)：31-32．

[9]韓海紅．氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中龍腦含量[J]．中國藥業(yè)，2007，16(14)：37．

[10]孫亞棟，阿布力米提·阿布都卡德爾．薄荷葉揮發(fā)油成分的GC-MS 分析[J]．新疆大學學報(自然科學版)，2017，34(1)：61-63．

[11]靳有才，慶易薇，郭 珍．青海野生薄荷揮發(fā)油成分GC-MS分析[J]．中國實驗方劑學雜志，2013，19(23)：143-146．

[12]閻 博，吳 芳，劉海靜，等．陜西野生薄荷揮發(fā)油化學成分的氣相色譜 -質譜分析[J]．中國藥業(yè)，2015，24(8)：12-14．

[13]魏興國，董 巖，高朝明．春、秋季德州野生薄荷揮發(fā)油化學成分比較[J]．江蘇中醫(yī)藥，2006，27(2)：48-50．