沸玉菁茶清咽功能的實驗研究

劉炘，於洪建，李文德，謝景欣，*

（1.江蘇省疾病預防控制中心，江蘇南京210009；2.浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金華321000）

沸玉菁茶主要由鐵觀音茶、鮮白茅根、桔梗、胖大 海、青果、百合等組成，其中多種成分具有清肺利咽等功效，但配伍產(chǎn)品的相關功能未見報道[1-6]。我們根據(jù)原衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）[7]及國家食藥監(jiān)局《關于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9個保健功能評價方法的通知》（國食藥監(jiān)?；痆2012]107號）[8]的規(guī)定，通過對大小鼠采用不同劑量的沸玉菁茶水溶液進行干預，進一步觀察沸玉菁茶的清咽效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 沸玉菁茶

沸玉菁茶（批號：20150326）濃縮提取物，為原茶葉經(jīng)飲用水重復提取3次，提取液合并減壓濃縮，真空干燥，濃縮倍數(shù)為1 g粉末相當于10 g茶葉。性狀為黃褐色粉末，由浙江尖峰健康科技有限公司提供。

1.1.2 實驗動物

SD 大鼠 150 g～220 g，ICR 小鼠 18.0 g～22.0 g，上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，清潔級，合格證號：2015000533737；生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012－0002號；實驗動物屏障環(huán)境設施使用許可證號：SYXK（蘇）2012-0037號。全部動物均給予滅菌鼠飼料和滅菌水，滅菌鼠飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，飼料合格證號：SCXK（京）2014-0010。

1.1.3 主要儀器和試劑

TE412-L電子天平：德國Sartorius公司；YLS－7A足趾容積測量儀：濟南益延科技設備有限公司；HPX-9052MBE電熱恒溫干燥箱：上海博訊醫(yī)療設備實業(yè)有限公司；葡聚糖4萬（右旋糖酐40）、二甲苯（分析純AR）：美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及處理

選用健康雄性SD大鼠及ICR小鼠，分批按體重隨機各分為4組（即對照組和低、中、高劑量組），每組10只，共分3批分別進行大鼠棉球植入實驗、大鼠足趾腫脹實驗及小鼠耳腫脹實驗。經(jīng)口灌胃，按照低、中、高劑量每天給予大鼠或小鼠41.6、83.3、249.9mg/kg（分別相當于成人每日每千克體重推薦攝入量的5倍、10倍和30倍）沸玉菁茶，大、小鼠灌胃容積分別為10、20 mL/kg·bw，溶劑對照組以等容積純凈水灌胃。各組大小鼠均給以普通飼料，自由進食和飲水，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30天后檢測各項指標。

1.2.2 大鼠棉球植入實驗

實驗結束前8天，用脫毛器脫去大鼠兩側腹股溝處的毛，乙醚淺麻醉，碘伏消毒，在無菌條件下切開大鼠兩側腹股溝皮膚，植入備用的棉球，縫合切口，繼續(xù)給予受試物。實驗結束當天，給受試物1 h后，斷頸處死大鼠，在原縫合處剪開皮膚，剝離并取出棉球肉芽組織，置于已稱重潔凈平皿中，恒溫干燥箱60℃開蓋干燥1 h后稱重，計算肉芽腫凈重。

肉芽腫凈重/mg=干燥后棉球肉芽腫質量-原棉球質量

1.2.3 大鼠足趾腫脹實驗

實驗結束當天再給受試樣品一次。1小時后，用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0小時足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1%葡聚糖4萬0.1mL/只，分別于1、2、4、6 h測量大鼠足趾的容積，同一部位測量3次，取平均值。以不同時間所測足趾容積與致炎劑作用前的足趾容積之差為腫脹值，計算各個時間段的足趾腫脹率。

1.2.4 小鼠耳腫脹實驗

汲取二甲苯20μL，滴加在小鼠右耳外側面耳廓的中央，讓其自由擴散，30min后，將小鼠脫頸椎處死，剪下雙耳，用9mm直徑打孔器在兩耳相同部位打下耳片稱重，以兩耳重量之差為耳廓腫脹值，計算耳廓腫脹率。

耳廓腫脹率/%=耳廓腫脹值/對照耳片質量×100

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS20.0軟件進行單因素方差分析（AnalysisofVariance，ANOVA），對 P＜0.05 的數(shù)據(jù)用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理。方差不齊時先進行變量轉換，仍不齊則改用秩和檢驗分析。

2 結果

2.1 一般狀況

實驗期間各組大鼠一般狀況良好，無異常癥狀和體征，也無死亡和行為異常。

2.2 對實驗前后動物體重的影響

各項實驗前后動物生長情況良好，受試物各劑量組與溶劑對照組動物體重和增重差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表 1～3。

表1 各組動物的初始體重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

表1 各組動物的初始體重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物初始體重經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 164±3 164±3 20.6±0.5低劑量組 166±2 163±4 20.6±0.2中劑量組 166±3 164±5 20.5±0.2高劑量組 165±3 165±5 20.4±0.6

2.3 大鼠棉球植入實驗

沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗的結果如表4所示。

表2 各組動物的終末體重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

表2 各組動物的終末體重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物終末體重經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 358±8 360±8 25.7±0.4低劑量組 362±10 361±11 26.1±0.5中劑量組 361±8 361±9 26.3±0.9高劑量組 362±10 363±9 26.4±0.9

表3 樣品對動物體重增加的影響（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

表3 樣品對動物體重增加的影響（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物體重增加經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 194±7 196±6 5.2±0.5低劑量組 196±11 198±10 5.4±0.6中劑量組 195±6 197±8 5.8±1.0高劑量組 196±11 198±10 6.0±1.2

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗結果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗結果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

組別 動物數(shù) 肉芽腫凈重/g P值對照組 10 0.052±0.008低劑量組 10 0.042±0.010 0.008中劑量組 10 0.039±0.007 0.001高劑量組 10 0.038±0.007 0.001

受試物各劑量組肉芽腫凈重均低于溶劑對照組，方差分析及兩兩比較最小顯著性差異法（Least-SignificantDifference，LSD）顯示各劑量組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），該項實驗結果陽性。

2.4 大鼠足趾腫脹實驗

沸玉菁茶大鼠足趾腫脹實驗的結果如表5～表7所示。

表5 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹1 h實驗結果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

表5 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹1 h實驗結果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

組別 動物數(shù)致炎前足趾容積/mL 1 h足趾容積/mL 1 h腫脹率/% P值對照組 10 0.998±0.112 1.334±0.144 33.78±6.92低劑量組 10 0.998±0.075 1.369±0.122 37.20±6.30 0.387中劑量組 10 0.916±0.121 1.228±0.117 34.81±7.52 0.793高劑量組 10 0.983±0.094 1.196±0.155 21.96±12.71 0.005

表6 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹2、4 h實驗結果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

表6 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹2、4 h實驗結果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

注：受試物各劑量組與溶劑對照組大鼠足趾腫脹率經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

30.24±8.41低劑量組 10 1.477±0.151 4 h腫脹率/%對照組 10 1.420±0.148組別 動物數(shù) 2 h足趾容積/mL 2 h腫脹率/%4 h足趾容積/mL 42.45±8.09 1.296±0.116 37.44±13.91中劑量組 10 1.323±0.107 48.13±11.05 1.370±0.164 36.61±17.55高劑量組 10 1.330±0.156 46.02±16.07 1.234±0.082 36.03±16.62 1.218±0.114 24.47±11.28

表7 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹6 h實驗結果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

表7 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹6 h實驗結果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

注：受試物各劑量組與溶劑對照組大鼠足趾腫脹率經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 動物數(shù) 6 h足趾容積/mL 6 h腫脹率/%對照組 10 1.206±0.120 21.06±7.89低劑量組 10 1.286±0.153 29.03±12.88中劑量組 10 1.136±0.089 25.55±14.37高劑量組 10 1.116±0.094 13.98±8.65

經(jīng)方差分析及兩兩比較（LSD檢驗）顯示，受試物高劑量組與溶劑對照組1 h足腫脹率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），該項實驗結果陽性。

2.5 小鼠耳腫脹實驗

沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗的結果如表8所示。

表8 沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗結果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

表8 沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗結果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

組別 動物數(shù) 耳廓腫脹值/mg 耳廓腫脹率/% P值對照組 10 11.65±4.47 46.00±19.15低劑量組 10 6.65±3.12 28.32±13.03 0.033中劑量組 10 6.32±3.72 29.34±17.94 0.043高劑量組 10 10.23±5.04 44.88±20.20 0.889

經(jīng)方差分析及兩兩比較（LSD檢驗）顯示，受試物低、中劑量組耳廓腫脹率均低于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），該項實驗結果陽性。

3 討論

沸玉菁茶是一種全新的保健飲品資源，結合中醫(yī)君、臣、佐、使的配伍理論，引用中醫(yī)喉科經(jīng)典《重樓玉鑰》古方為依據(jù)[9]，采用現(xiàn)代細胞篩選技術精研改良配方，運用現(xiàn)代制劑技術將有效成分濃集，配以茶葉，制成功效明確、質量可控的袋泡茶，對咽喉及呼吸道具有調理養(yǎng)護作用，適合粉塵危害嚴重的行業(yè)人員以及在霧霾環(huán)境下出行或作業(yè)的群體[10-12]。沸玉菁茶中的主要成分鐵觀音茶、鮮白茅根、胖大海、青果等均為藥食同源，是常見的健康飲用材料，該配伍產(chǎn)品的安全性也已得到了相關實驗驗證[13-14]。

清咽作用的機制為干預咽部炎癥反應[15-16]。炎癥反應分為急性炎癥和慢性炎癥，當受試物經(jīng)實驗證實具有干預急性炎癥和慢性炎癥的作用后才能確定受試物是否具有清咽的作用[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用沸玉菁茶干預后，與空白對照組相比，SD大鼠各劑量組棉球肉芽腫凈重及高劑量組1 h足趾腫脹率顯著減?。籌CR小鼠低、中劑量組耳廓腫脹率低于溶劑對照組。說明沸玉菁茶具有干預大鼠肉芽腫形成、足趾腫脹以及抑制小鼠耳廓腫脹的作用。以上3個實驗結果均為陽性，可判定沸玉菁茶清咽功能實驗結果陽性，說明沸玉菁茶具有清咽的作用，這為以后沸玉菁茶的開發(fā)及應用提供了有力的依據(jù)[19-20]。但其干預炎癥反應的機制仍有待今后進一步研究探討。

參考文獻：

[1]袁杰.鐵觀音香氣化學成分及活性研究[D].廈門:華僑大學,2015:1-5

[2]王眠龍.鮮白茅根的臨床應用體會[J].海峽醫(yī)學,2001,13(4):23-25

[3]金欣,陳勤.桔梗的藥理作用研究新進展[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,2015,33(2):79-82

[4]程玉江,唐海皇,吳曉霞,等.胖大海金銀花羅漢果復合保健飲料研制[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·綜合刊,2015,35(3):18-21

[5]杜宜涵,李孟雅,李生茂,等.青果化學成分和藥理作用研究概述[J].實用中醫(yī)藥雜志,2016,27(2):190-191

[6]安立,李林.養(yǎng)陰清肺湯聯(lián)合西藥治療慢性咽炎隨機平行對照研究[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2016,32(3):61-63

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術規(guī)范[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:75-77

[8]國家食品藥品監(jiān)督管理總局.關于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9個保健功能評價方法的通知[EB/OL],http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1136/71257.htm l

[9]劉玉瑋.中醫(yī)喉科文獻《重樓玉鑰》考[J].中醫(yī)文獻雜志,2010,28(6):1-3

[10]張禮仲.清咽涼茶的提取工藝研究[J].江西醫(yī)藥,2015,16(6):579-581

[11]萬麗娟,盧金清,梁歡.雅香茶的研制及抗氧化活性研究[J].食品工業(yè),2016,20(12):25-28

[12]Zagu?a G,Bajcar,Saletnik B,etal.Comparison of the Effectiveness ofWater-Based Extraction of Substances from Dry Tea Leaveswith the Use of Magnetic Field Assisted Extraction Techniques[J].Molecules,2017,22(10):E1656

[13]劉炘,於洪建,李文德,等.沸玉菁茶的安全性毒理學評價[J].江蘇預防醫(yī)學,2017,28(5):123-125

[14]Burana-Osot J,Pattanapanyasat K,Soonthornchareonnon N,et al.Characterisation and immuno-stimulating activity of polysaccharides from Thaimedicinal plants[J].Nat Prod Res,2010,24(15):1403-1412

[15]張國強,高丹,杜曉映.藏青果利咽口香糖加工工藝研究[J].食品研究與開發(fā),2016,37(24):63-66

[16]楊紹蘭,范小紅,張新富,等.柿葉復合茶的開發(fā)研究[J].食品研究與開發(fā),2014(17):21-24

[17]鐘禮云,林蔚,林健,等.石斛清咽功能實驗研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(6):814-815

[18]陳啟賀,劉睿,任金威,等.吉林人參低聚肽清咽功能的實驗研究[J].職業(yè)與健康,2017,33(6):750-752

[19]鄒禮根,趙蕓,邱靜,等.蜜梨NFC果汁清咽功能評價的動物試驗研究[J].核農(nóng)學報,2016,30(4):728-733

[20]呂辰鵬,何泉泉,王麗斐,等.清咽功能保健食品的研究進展[J].食品工業(yè),2015,18(9):215-220