一種罌粟果提取物中勞丹寧成分的分離方法

趙松福 司朗云 苗慶柱

摘 要：勞丹寧（Laudanine）是鴉片中含有的一類痕量生物堿，分子式為C20H25NO4，其在天然鴉片中的含量很低，大約0.4%左右。目前市場很難買到勞丹寧的對照品或標(biāo)準(zhǔn)品，本文改進(jìn)嗎啡的分離技術(shù)，通過使用工業(yè)高壓制備色譜技術(shù)，將罌粟果提取物粉中的嗎啡，可待因分別進(jìn)行分離。將剩余副產(chǎn)物收集，并通過乙酸乙酯的提取，將其中部分有效成分分離，然后通過重結(jié)晶將產(chǎn)物進(jìn)行純化，純化后產(chǎn)物可以作為勞丹寧的對照品使用。

關(guān)鍵詞：勞丹寧；工業(yè)高壓制備色譜；分離；結(jié)晶

毒品問題一直嚴(yán)重困擾著世界各國，其對社會造成極大的危害。鴉片是用來制備毒品的原材料，其中含有多種常量和痕量生物堿，這些生物堿是區(qū)分不同地域的鴉片樣品的主要手段之一。

勞丹寧（Laudanine）是鴉片中含有的一類痕量生物堿，分子式為C20H25NO4，其在天然鴉片中的含量很低，大約0.4%左右。目前市場很難買到勞丹寧的對照品或標(biāo)準(zhǔn)品，因而很難在復(fù)雜的鴉片生物堿中確定其位置。確定勞丹寧在高效液相色譜上的保留時間，以及實現(xiàn)不同地域鴉片樣品的區(qū)分具有十分重要的意義。

1 材料與方法

1.1 物料與設(shè)備

提取用原料：提取原料采用人工提取的CPS-Ⅰ粉（罌粟果提取物粉），由甘肅藥物堿廠生產(chǎn)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)嗎啡含量不低于10%，其中勞丹寧作為附屬成分，含量約是嗎啡的3%左右。

提取設(shè)備：工業(yè)高壓制備色譜系統(tǒng)（DAC300）。

1.2 方法

1.2.1樣品前處理

先配置5%的乙醇溶液，向5.0Kg CPS中加入5%乙醇水溶液15L，室溫下浸泡30min。在浸泡過的溶液體系中加入硅藻土0.5Kg，開啟攪拌至最大，攪拌1分鐘；

提取完成，將提取液轉(zhuǎn)移到過濾器中進(jìn)行過濾，收集濾液；將濾餅重新加入5%的乙醇溶液，重復(fù)上述操作2次。將三次過濾后液體混合，最終獲得約40L左右濾液。

減壓濃縮濾液至20L左右，所得濃縮液以30L/min流速通過預(yù)柱過濾，去除油脂及小顆粒雜質(zhì)。收集濾液，濾液即為前處理所得上樣液。多次進(jìn)行以上操作，將所有批次上樣液混合，進(jìn)行下步操作。

1.2.2色譜條件

制備柱規(guī)格：300mm×1200mm（有效裝填柱高約300mm至400mm）；

填料種類：200-300目球形硅膠，C18填料；

填料裝填量：15Kg；

流動相流速：10L/min；

流速程序見下表。

1.2.3樣品分離方法

制備柱安裝完成，使用0.75%磷酸水沖洗制備柱10min，平衡制備柱；

10L/min的速度，向制備柱中抽入約30L上述提取液。上樣完畢，用10%乙醇和0.75%磷酸水為流動相沖洗約10min，每1min分別收集一次餾分，每份餾分體積約為10L，將所得餾分按照順序標(biāo)記F1-F10；改用30%乙醇和0.75%磷酸水為流動相，繼續(xù)沖洗16min，收集餾分，參照上述方法將所得餾分標(biāo)記為F11-F26，再用50%乙醇和0.75%磷酸水為流動相，沖洗10min，收集餾分，所得餾分標(biāo)記為F27-F36，最后用60%乙醇和0.25%磷酸水為流動相沖洗制備柱約10min，沖洗完畢，備用。

以上餾分中，F(xiàn)3-F7共計50L為嗎啡餾分，將嗎啡餾分合并，濃縮后結(jié)晶可獲得嗎啡，共獲得嗎啡690g；餾分F10-F15共計60L為可待因餾分，將餾分合并，通過濃縮、提取及重結(jié)晶得可待因39.16g；餾分F18-F23，共計60L為其余餾分，用于獲得勞丹寧成分。

1.2.4勞丹寧的制備

合并上述F18-F23成分，減壓濃縮至1.5L左右，將所得濃縮物加入反應(yīng)釜中，加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH=10-12；將調(diào)節(jié)好pH的液體加3L乙酸乙酯進(jìn)行攪拌提取，分離乙酸乙酯層，并且減壓濃縮干；

將濃縮干的油狀固體加入100L甲醇攪拌回流，回流30min；將回流液體降溫至60℃保溫過濾，收集漏斗中的白色固體，母液收集，進(jìn)行蒂巴因的提??；

將白色固體加甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，加入150L甲醇回流溶解固體，回流30分鐘，回流過程固體溶清。產(chǎn)物逐漸降溫析晶，溫度逐步降低過程中晶體緩慢析出，0℃以下攪拌析晶4h以上，過濾獲得白色固體，白色固體干燥，獲得勞丹寧固體15.42g，純度96.8%。

2 結(jié)果討論

分離效果及討論：根據(jù)分離出的勞丹寧固體及結(jié)晶確證結(jié)果，確認(rèn)勞丹寧可以實現(xiàn)有效分離，分離過程中使用制備色譜技術(shù)，將原天然產(chǎn)物中的嗎啡、可待因及其他堿類進(jìn)行分離。在通過提取及結(jié)晶，將其中主要的成分勞丹寧分離出。而母液中還含有大量蒂巴因成分，可以繼續(xù)進(jìn)行提取。

目前勞丹寧重結(jié)晶主要是為了出去蒂巴因，去除蒂巴因的效果較好，目前最終得到的產(chǎn)品純度為96.8%。產(chǎn)品可以作為雜質(zhì)對照品使用，并且還可以繼續(xù)優(yōu)化，進(jìn)行產(chǎn)品的純化。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉翠梅，花鎮(zhèn)東，白燕平.UPLC/Q-TOF-MS和PLS-DA在鴉片生物堿檢測及分類判別中的應(yīng)用[J].中國司法鑒定，2014，73（2）：25-38.

[2]劉翠梅，白燕平.一種合成勞丹寧的方法[P].CN103965108B.

[3]Frydman B，Bendisch R and Deulofeu V.A SYNTHESIS OF LAUDANINE AND（&）-PSEUDOCODAMINE：RESOLUTION IN-TO THE OPTICAL ISOMERS.1958，（4）：342-350.