液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法測定牛奶中128種農(nóng)藥殘留

杜曉萌

摘 要 目的：采用液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法測定牛奶中128種農(nóng)藥殘留。方法：將乙腈20ml加入到牛奶10ml中， 振蕩提取兩次，上清液濃縮后經(jīng)C18固相萃取柱凈化將干擾雜質(zhì)去除，洗脫液濃縮到4.5m后放置在45攝氏度下采用氮氣將其吹干，然后加入1ml乙腈-水進行定容，進行為期30秒的超時溶解，過濾時采用0.2um微孔濾膜。結(jié)果：在三次平行實驗中農(nóng)藥品種（80%）的平均回收率均超過70%。結(jié)論：這種方面在測定農(nóng)藥殘留方面應用價值高，具有很強的通用性、較高的靈敏度和良好的選擇性。

關(guān)鍵詞 液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法；牛奶；農(nóng)藥殘留

牛奶中殘留農(nóng)藥的途徑有很多，如動物、直接驅(qū)殺害蟲等。奶牛在食物營養(yǎng)鏈中的等級比較高，相應的會提高農(nóng)藥殘留量。目前，奶及其制品富含營養(yǎng)，與完善的健康食品日十分接近，深受廣大消費者的歡迎。同時，各國越來越重視牛奶中的農(nóng)藥殘留，如法國Bordet、意大利的Alfonso。但是，國內(nèi)研究仍然停留在對一類品種的檢測方面，關(guān)于不同種類同時測定的報道少之又少。

1 實驗部分

1.1 試劑

從奶牛飼養(yǎng)場中直接取牛奶，沒有經(jīng)過任何的加工處理。

1.2 方法

1.2.1 配制標準溶液

稱取農(nóng)藥各標準物5到10mg，在10ml的容量瓶中分別放置，按照其本身的溶解度來選擇相應的物品進行溶解，然后定容到刻度。

以農(nóng)藥保留時間、相關(guān)化學性質(zhì)為依據(jù)，將128種農(nóng)藥分為兩組，即A組、B組，按照儀器中每種農(nóng)藥的相應靈敏度，將其混合標準溶液中的濃度確定下來。

以每種農(nóng)藥的分組、混合標準溶液和儲備液的濃度為依據(jù)，稱取一定量單個農(nóng)藥的標準儲備溶液，并在100ml的容量瓶中放置，定容時采用甲醇至刻度[1]。

1.2.2 配制基質(zhì)混合標準工作溶液

該方法LOD（檢出限）的確定，依據(jù)標準為信噪比大于等于5時的添加濃度。農(nóng)藥基質(zhì)采用樣品空白溶液可以配置出添加濃度不同的混合標準工作溶液，即1LOD、2LOD、5LOD、8LOD、12LOD，本著現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，這些主要用來完成對標準工作曲線的繪制。

1.2.3 處理樣品

在50ml離心管中放置10ml牛奶，依次加入乙腈20ml、硫酸鎂4g和氯化鈉1g，放置在振動器中進行為期10分鐘的劇烈振蕩，然后在每分鐘4200r的速度下進行為期8分鐘的離心處理，在100ml的雞心瓶中完成對上清液的收集，然后采用20ml的乙腈對殘夜進行重復提取。將兩側(cè)提取液合并起來，在40攝氏度的水浴中放置并進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)一直剩大約1ml為止。采用乙腈10ml對ENVITM-18固相萃取柱進行活化，提取液經(jīng)濃縮后需要向該柱中轉(zhuǎn)移，樣品瓶的洗滌需要借助5ml乙腈，同樣在固相萃取柱中并入洗滌液，如此重復性操作兩次。在100ml的雞心瓶中將流出液收集起來，固相萃取柱的洗脫借助10ml乙腈，然后合并流出液，蒸發(fā)旋轉(zhuǎn)至0.5ml（在40攝氏度的水浴中），然后用氮氣在45攝氏度的條件下吹干，定容時加入乙腈-水1ml，進行30秒的超聲溶解，過濾時借助0.2um的微孔濾膜，采用LC-MS/MS進行科學測定[2]。

同時，選取沒有農(nóng)藥的牛奶樣品，根據(jù)上述操作完成對樣品空白提取液的制備。

2 結(jié)果與討論

2.1 優(yōu)化實驗方法

通過深入研究國內(nèi)外有關(guān)文獻法，本文共設(shè)計不同的實驗方案四種，如采用2乘以20ml正己烷-丙酮對10ml的牛奶進行兩次振蕩提取，將上層有機相合并，然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1ml，采用2乘以5ml的乙酸乙酯-環(huán)己烷進行交換，采用GPC凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)流出液至0.5ml，吹干時借助氮氣，之后采用乙腈-水對殘余物進行溶解定容，測定時采用LC-MS/MS）、超聲波提取、均質(zhì)提取。其中本文采取的方法為液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法，其具有顯著優(yōu)勢，不僅農(nóng)藥品種多且能夠取得良好的凈化效果，在三次平行實驗中農(nóng)藥品種（80%）的平均回收率均超過70%[3]。

同時，對實驗本文所采取的實驗方案進行了有效的改進：通過提取溶劑體積的增加，可以使提取更加充分；同時將全部的上清液收集起來進行凈化，可以保證實驗操作的合理性與代表性；最后采用C18固相萃取柱，可以簡化凈c化過程，提高操作性。

2.2 優(yōu)化提取方式

本文在液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法的基礎(chǔ)上對其他三種提取方式進行了科學的比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種方式在農(nóng)藥的添加回收率數(shù)據(jù)方面 ，差距不顯著，處于對牛奶獨特性質(zhì)的考慮和實驗室自身條件的結(jié)合，本文最終將振動提取的方式確定下來，效果非常理想[4]。

早提取溶劑、方式和步驟均確定的基礎(chǔ)上，對不同提取次數(shù)對農(nóng)藥添加回收率的影響進行了科學的分析與對比，得知：每次振動提取時采用20ml乙腈，2次回收率高于1次，大約高5～20%，3次則沒有顯著增加，在確保能夠取得良好添加回收率的基礎(chǔ)上，站在節(jié)省試劑與時間的角度上，建議采用乙腈進行2次振蕩提取。

3 結(jié)語

本文關(guān)于牛奶樣品中128中農(nóng)藥殘留量的測定，采取乙腈提取、SPE柱凈化、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的方法，憑借其簡便的操作和超高的靈敏度，可以廣泛的應用到日常檢測中去。

參考文獻：

[1]郭春景，王建忠，郝曉莉.利用QuEChERS法測定甘藍、草莓中7種農(nóng)藥殘留的實驗條件優(yōu)化探索[J].質(zhì)譜學報，2013，02（34）：121-127.

[2]M Mezcua，A Agüera，JL Lliberia，MA Cortés，B Bagó. Application of ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry to the analysis o f p r i o r i t y p e s t i c i d e s i n groundwater[J].E.Flammarion，2006，1109（02）：222-7.

[3] 林維宣，孫興權(quán)，田苗，等.動物組織中粘桿菌素、桿菌肽及維吉尼霉素殘留量的液相色譜——串聯(lián)質(zhì)譜[J].分析測試學報，2009，22（02）：212-215.

[4] 黃何何，張縉，徐敦明，等.QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定水果中21種植物生長調(diào)節(jié)劑的殘留量[J].色譜，2014，22（07）：707-716.