利用室間質評數據評估血站ALT測量不確定度

郭咚 張鋼 蔣義 陳靜 彭文雯

[摘要] 目的 通過對測量不確定度分析，更好地保證速率法測定無償獻血者血清中ALT的檢測結果準確性。方法? 利用實驗室開展的室內質控數據，以及2016年能力驗證檢測的室間質評數據，來計算評估實驗室無償獻血標本ALT項目的測量合成不確定度及擴展不確定。結果 包含因子k=2時，包含概率P=95.45%，ALT=36 U/L時，擴展不確定度為16.38%，ALT=123 U/L時，擴展不確定度為13.46%。結論 該實驗室利用ALT室間質評數據得出的擴展不確定度在可控范圍內。ALT室間質評回報數據結果，適用于血站實驗室評價ALT檢測測量不確定度分析。

[關鍵詞] ALT檢測;血站;室間質評;測量不確定度

[中圖分類號] R446.11 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）08（b）-0003-03

測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性與測量結果相聯(lián)系的參數， 可用來表示檢測結果是否可靠[1]。血站實驗室ALT檢測的主要任務就是對無償獻血標本的特性進行賦值。所賦的值，其準確性、可靠性以及其分散性都會直接影響到對獻血者的篩查[2]。ISO15189《醫(yī)學實驗室質量與能力的專用要求》指出“與實際測量過程相關聯(lián)的不確定度分量從接收樣本品啟動測量程序開始，至輸出測量結果終止”[3]。而室間質評回報結果綜合了檢測方法和程序、設備因素等，對測量不確定度的影響。因此，可以利用室間質評的回報數據，評估血站實驗室ALT檢測項目的測量不確定度。

1? 材料與方法

1.1? 儀器

OLYMPUS? AU640全自動生化分析儀。

1.2? 試劑

深圳邁瑞生物醫(yī)療丙氨酸氨基轉移酶（ALT）檢測試劑、校準品，英國朗道實驗診斷有限公司常規(guī)生化質控血清。

1.3? 樣本

湖南省血液中心無償獻血血篩標本。

1.4? 方法

采用連續(xù)監(jiān)測法檢測ALT。

1.5? 測量不確定度的引入

該中心實驗室確認構成測量不確定度的主要分量為：與偏倚相關的標準不確定度分量，實驗室內復現條件下引入的不確定度分量。

①通過室間質評數據評定由偏移引入的測量不確定度ucrel（bias）偏移引入的測量不確定度包括方法和實驗室相對偏移RMSrel（bias），及多次測量復現性引入的相對測量不確定度urel（Cref）。根據2016年衛(wèi)生部臨檢中心實驗室室間質評ALT回報數據，計算方法和實驗室相對偏移。公式：

式中birel為該實驗室室間質評ALT樣本檢測結果與靶值的相對偏移，n為室間質評次數。而多次測量復現性引入的相對測量不確定度，可將此值看成標準物質（CRM）方法評定偏移引入的測量不確定中的重復測量標準物質的測量不確定度[4]。該次將室間質評每個樣本檢測數據進行分組，±3SD剔除以外的實驗室檢測數據，計算每個室間質評樣本的測量復現性引入的相對測量不確定度urel（cons，i）。依據公式：

得出所有組相對測量不確定度，其中m為參加測量的實驗室數。此時，可以計算多次測量復現性引入的相對測量不確定度urel（Cref）。公式：

式中，n為室間質評樣本的個數。合成計算由偏移引入的測量不確定度

②通過室內質控引入的不確定度分量uprec 實驗室內復現性不確定度主要是由精密度引入的。本實驗室用高、低濃度2種質控品（批號為944 UE，濃度為123 U/L、697 UE，濃度為36 U/L），每天隨獻血者標本一同檢測，其檢測的結果作為當天室內質控結果。該實驗室采取對2016年4—12月共計10個月的室內質控數據進行統(tǒng)計分析，分別計算兩個濃度質控品的變異系數CV。由于質控品隨獻血者標本同時檢測，并有著完整的檢測過程，故從室內質控數據計算出來的變異系數就是實驗室復現性不確定度分量uprec。

③計算合成不確定度（uc）的計算公式：

④加上擴展不確定度（U）的計算公式：取95%的置信區(qū)間k=2，U=kuc。

2? 結果

2.1? 計算RMSrel（bias）

2016年該實驗室參加衛(wèi)生部臨檢中心ALT室間質評3次，每次檢測樣本5個，共計檢測樣本15個。取相對偏移絕對值的平方代入公式計算，

2.2? 計算urel（Cref）

查詢2016年國家衛(wèi)生計生委室間質評原始數據，剔除離群值，計算每個樣本的所屬組變異系數的平方根代入公式計算，urel（Cref）=46.25/15=3.08%，見表2。

2.3? 計算擴展不確定度

通過室間質評數據、室內質控數據計算出RMSrel（bias）、urel（Cref）各值（表3），最終合成相對測量不確定度、合成不確定度和擴展不確定度（表4）。

3? 討論

測量不確定度可以使用自上而下的Nordtest準則和自下而上的GUM模型兩種方法評定檢測結果的測量不確定度[5]。GUM模型是基于在全面而系統(tǒng)的測量分析之后，去識別并估計每種可能來源的不確定度。Nordtest準則是基于不確定度來源的控制程序下，對測量不確定度的評價，并直接利用統(tǒng)計原理評估一個特定的測量系統(tǒng)受控結果的測量不確定度[5-6]。依據特定的正確度評估的試驗數據、實驗室室間質評數據進行評定，正確度和精密度是兩個主要的分量。醫(yī)學檢測實驗室常將這兩者與誤差相聯(lián)系。

血站ALT檢測針對的是無償獻血者的血液樣本，影響其測量不確定度的因素包括獻血者樣本的采集與運輸、處理與保存，檢測環(huán)境與人員，檢測方法與設備，檢測試劑與校準品等。但是，在評估測量不確定度時考慮所有因素比較復雜且不切實際[7]。該文通過室間質評結果數據及實驗室室內質控數據，以Nordtest準則計算測量不確定度。室間質評結果數據反映了實驗室檢測系統(tǒng)的總體分析性能，而室內質控反映的是實驗室日間檢測的變異情況，其包括了測量程序過程中盡可能多但又合理的常規(guī)變化，例如：儀器設備運行狀況和定期維護、檢測環(huán)境條件、不同批次試劑、不同操作者等。

該次ALT測量不確定度評估結果顯示，濃度2（36 U/L）擴展不確定U=16.38%，與《WS/T 403-2012臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質量指標》中ALT總誤差TE<16%相比，超出《指標》要求，即測量結果=36 U/L，擴增不確定度=16.38%×36=6 U/L，即測量結果=（36±6）U/L。通過對各測量不確定度分量的占比分析，其RMSrel（bias）占比最大?；仡櫾搶嶒炇?016年室間質評檢測結果相對偏移，發(fā)現靶值在70 I/U以下的該實驗室檢測結果相對偏移較大，而靶值在70 I/U以上的檢測結果相對偏移較小。同時，通過對高、低兩種濃度ALT質控品進行擴展不確定度（uprec：1.39%、4.87%，U：13.46%、16.38%）的評估。結果表明，高、低2種濃度下的樣品測量不確定度是有差異的，即測量的不確定度與質控品濃度檢測值是有關聯(lián)的。值得注意的是，何成濤等[8]指出校準品不確定度在ALT檢測合成不確定度中占的比重較大，在評估過程中應充分考慮該因素的影響。而復溶校準品所引入的不確定度很小，而實驗室檢測環(huán)境引入的不確定度和精密度較高移液槍引入的不確定度可忽略不計[9]。該實驗室使用的校準品靶值為98.9 U/L（邁瑞常規(guī)生化符合校驗品，批號150115010），較2015版《血站技術操作規(guī)程》4.12.1血液檢測合格判定標準中ALT≤50 U/L的臨界值濃度高，也是導致低濃度擴增不確定度不符合《標準》原因之一。因此，選擇校準品同時應考慮更接近臨界值的濃度。在血站實驗室ALT結果判定過程中，應充分考慮臨界值范圍的不確定度，可以保證血液ALT檢測的準確性，避免造成檢測結果變化過大，避免血液的浪費。

近幾年越來越多的血站檢測實驗室開始開展或準備開展實驗室15189能力認可，ALT作為血站檢測項目中唯一的定量檢測項目，實驗室對ALT檢測不確定度的評估是必不可少的，利用實驗室室內質控數據和室間質評數據對其進行評估，既減輕實驗室工作量，也節(jié)約了試驗所需資源，而且可操作性強。

[參考文獻]

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[9]? 鄔旭群，程曦，李雪梅，等.速率法檢測獻血者丙氨酸轉氨酶的測量不確定度評定[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35（4）：470-471，474.

（收稿日期：2018-05-12）