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    灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵條件研究

    2018-05-10 08:20:35李炳功耿偉濤趙琰明王金菊王艷萍
    中國釀造 2018年4期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵罐樹花菌絲體

    李炳功,耿偉濤,趙琰明,王金菊,王艷萍*

    (1.天津科技大學(xué) 新農(nóng)村發(fā)展研究院,天津 300457;2.河南中沃實(shí)業(yè)有限公司,河南 濟(jì)源 459000)

    灰樹花(Grifolafrondasa),又稱貝葉多孔菌,栗子蘑,蓮花菇,千佛菌,日本稱之為舞蘑,美國稱之為林雞,隸屬于擔(dān)子菌亞門層菌綱多孔菌科樹花菌屬。其外觀為灰白色,其形如卷心菜,婀娜如云,其肉質(zhì)脆嫩,其味如雞絲,且芬芳誘人,具有獨(dú)特香氣,被譽(yù)為“食用菌王子”[1]。子實(shí)體呈蓮花形,其分支形似菜花,重疊叢生,菌蓋為扇形,菌肉呈軟木質(zhì),孢子呈卵白色[2]。中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng)等研究機(jī)構(gòu)分析得出,灰樹花干品中蛋白質(zhì)含量31.5%,包含18種氨基酸,占總蛋白含量的23.53%,其中8種氨基酸必需氨基酸占總氨基酸的38.5%,所以灰樹花可以與其他食物進(jìn)行蛋白質(zhì)互補(bǔ)[3];脂肪3.2%;膳食纖維33.7%;碳水化合物21.4%;灰分5.1%;富含鋅、鐵、鈣等多種人體所需元素;維生素含量豐富,其中維生素B11.47 mg/100 mg、維生素B20.72 mg/100 mg、維生素E 109.7 mg/100 mg、維生素C 17.0 mg/100 mg,胡蘿卜素4.5 mg/100 mg[4]。此外,灰樹花還含有多酚[5]和多糖[6]等活性物質(zhì),其中灰樹花多糖被實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證具有抗腫瘤[7]、提高免疫力[8-9]、抗病毒[10]、降低血壓[11]等生理活性功能。

    長期以來,灰樹花都是通過固體栽培生產(chǎn),但是固體栽培生產(chǎn)存在生長周期長,占地面積大,易受季候影響[12]等問題,大大制約了灰樹花的開發(fā)利用。而采用液體深層培養(yǎng)灰樹花的方法,可以在短時間內(nèi)生產(chǎn)大量菌絲體和代謝產(chǎn)物,且易于控制培養(yǎng)環(huán)境的理化條件,便于工業(yè)化生產(chǎn)。因此,國內(nèi)外的研究人員對液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)灰樹花的條件進(jìn)行了研究,如季宏更等[13]發(fā)現(xiàn)灰樹花最佳培養(yǎng)條件為接種量10%,攪拌速度140 r/min,培養(yǎng)溫度26℃;LEEB C等[14]發(fā)現(xiàn)灰樹花最佳培養(yǎng)條件為通氣量1.16 L/min,攪拌速度166 r/min。此外,研究人員發(fā)現(xiàn)其他條件也可以影響灰樹花的生長,如李心怡等[15]研究發(fā)現(xiàn)交變磁場可以促進(jìn)灰樹花的生長。本研究以灰樹花菌絲體生物量和多糖含量為評價指標(biāo),優(yōu)化灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵條件,探討發(fā)酵類型對灰樹花生長的影響,并實(shí)現(xiàn)擴(kuò)大培養(yǎng),以期為灰樹花的綜合開發(fā)應(yīng)用和工業(yè)化奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 菌株

    灰樹花(Grifolafrondasa):本實(shí)驗(yàn)室保藏,編號為CGMCC No.14358。

    1.1.2 試劑

    沒食子酸(分析純):北京化學(xué)試劑公司;牛血清白蛋白(純度98%):上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司;苯酚、Na2HPO4·12H2O(均為分析純):天津市四通化工廠;NaH2PO4·2H2O(分析純):天津大學(xué)科威公司;葡萄糖(分析純):河南永昌飛天淀粉糖有限公司;蛋白胨(分析純):安琪酵母股份有限公司;瓊脂粉(分析純):鄭州超凡化工有限公司;磷酸二氫鉀、硫酸鎂(均為分析純):江蘇科倫多食品配料有限公司;硫酸(分析純):廊坊市金?;び邢薰?;鹽酸(分析純):北京化工廠。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA)培養(yǎng)基[16]:馬鈴薯(去皮)200 g,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。

    PDA平板培養(yǎng)基[17]:馬鈴薯(去皮)200 g,葡萄糖20 g,蛋白胨5 g,KH2PO42 g,MgSO4·7H2O 1 g,瓊脂20 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。

    液體種子培養(yǎng)基[6]:馬鈴薯(去皮)200 g,葡萄糖20 g,蛋白胨5 g,KH2PO42 g,MgSO4·7H2O 1 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。

    液體發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖22g,蛋白胨3g,KH2PO41.2g,MgSO4·7H2O 0.8 g,維生素B11.2 g,蒸餾水1 000 mL,pH值自然。

    補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)基:與液體發(fā)酵培養(yǎng)基相同。

    以上所有培養(yǎng)基滅菌條件:高壓蒸汽滅菌,115℃、20 min。

    1.2 儀器與設(shè)備

    MA300A型磁力攪拌器:日本YAMATO公司;BIOTECH-5BGZ型氣升式發(fā)酵罐、BIOTECH-10JGZ型氣升式發(fā)酵罐:上海保興生物設(shè)備工程有限公司;JA2003型電子分析天平:上海精科天平廠;722E可見分光光度計(jì):北京瑞利分析儀器公司;SM-510型全自動滅菌鍋:日本YAMATO公司;5415D型離心機(jī):德國EPPENDORF公司;SPX-250A型恒溫培養(yǎng)箱:上海煜南儀器有限公司;BS-2F型振蕩培養(yǎng)箱:金壇市梅香儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌種的活化[18]

    用接種鏟挖取保存在PDA斜面上的直徑為1 cm的灰樹花菌絲體塊接種到新的PDA斜面試管中,于25℃恒溫培養(yǎng)20~25 d,待菌絲滿管,保存于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    用直徑為1 cm的打孔器將之前活化的菌種接種于PDA平板培養(yǎng)基中央,于25℃恒溫培養(yǎng)20~25 d,待菌絲長滿平板后接種。

    1.3.2 搖瓶種子培養(yǎng)

    用直徑為1 cm的打孔器,從平板上取10個大小相同的菌絲體塊接入裝液量為100 mL/500 mL搖瓶種子培養(yǎng)基中,于25℃、150 r/min條件下恒溫振蕩培養(yǎng)4.5 d。

    1.3.3 發(fā)酵條件優(yōu)化

    (1)攪拌速度優(yōu)化:選擇7 L攪拌式發(fā)酵罐,培養(yǎng)溫度25℃,通氣量2L/min,分別在攪拌速度為100r/min、120r/min、140 r/min條件下培養(yǎng)14 d,根據(jù)菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖含量確定最佳的攪拌速度。

    (2)培養(yǎng)溫度優(yōu)化:在最優(yōu)攪拌速度條件下,選擇7 L攪拌式發(fā)酵罐,通氣量2 L/min,分別在培養(yǎng)溫度為23℃、25℃、27℃條件下培養(yǎng)14 d,根據(jù)菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖含量確定最佳的培養(yǎng)溫度。

    (3)通氣量優(yōu)化:在最優(yōu)攪拌速度和培養(yǎng)溫度條件下,選擇7 L攪拌式發(fā)酵罐,分別在通氣量為2 L/min、3 L/min、5L/min的條件下培養(yǎng)14 d,根據(jù)菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖含量確定最佳的通氣量。

    1.3.4 不同發(fā)酵罐類型對灰樹花的影響

    分別采用7 L攪拌式發(fā)酵罐和氣升式發(fā)酵罐連接溶氧電極、pH電極、通氣裝置及攪拌裝置,裝液量5 L/7 L,按接種量10%接種于發(fā)酵罐中,于上述最佳條件下培養(yǎng),每天取樣50 mL分析,考察不同發(fā)酵罐類型對灰樹花的影響。

    1.3.5 灰樹花的擴(kuò)大培養(yǎng)

    選取最優(yōu)的發(fā)酵罐類型,將50 L的發(fā)酵罐連接溶氧電極、pH電極、通氣裝置及攪拌裝置,裝液量30 L/50 L,將培養(yǎng)到10 d的7 L攪拌式發(fā)酵罐中的發(fā)酵液作為種子液接種,接種量10%,在攪拌速度100r/min、溫度23℃、通氣量15L/min條件下培養(yǎng),每天取樣50 mL分析。

    1.3.6 菌絲體生長情況測定

    菌絲體生物量:將發(fā)酵液在4℃條件下10 000 r/min離心20 min,收集上清液和沉淀。將沉淀用無菌水洗滌3次,于真空冷凍干燥機(jī)中凍干至恒質(zhì)量,取出稱質(zhì)量,減去濾紙質(zhì)量,即為菌絲體生物量[19]。

    菌絲球直徑:隨機(jī)取10個菌絲球置于90 mm培養(yǎng)皿中緊密的排成一排,用游標(biāo)卡尺測量其總直徑,算出菌絲球平均直徑[20]。

    1.3.7 灰樹花發(fā)酵液中多糖含量及殘?zhí)橇康臏y定

    取10 mL上述離心得到的上清液置于截留分子質(zhì)量為8 000 Da的透析袋中流水透析,直至透析液中無單糖檢測出為止,然后采用苯酚-硫酸法[21]測定其多糖含量。

    取1mL上述離心得到的上清液,采用3,4-二硝基水楊酸(dinitrosalicylic acid,DNS)法[22]測定灰樹花發(fā)酵液中的殘?zhí)橇俊?/p>

    2 結(jié)果與分析

    2.1 發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果

    2.1.1 攪拌速度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響

    攪拌是食用菌發(fā)酵過程中的一個重要因素,適宜的攪拌速度不僅可以充分混合培養(yǎng)液使菌絲處于理想的培養(yǎng)環(huán)境中,也可以增加培養(yǎng)基中的溶氧量。攪拌速度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響如圖1所示。由圖1可知,隨著攪拌速度的增加,灰樹花菌絲體的生物量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢,在攪拌速度為120 r/min時,菌絲體生物量達(dá)到最大為(3.983±0.371)g/L,而發(fā)酵液中多糖含量卻呈現(xiàn)不斷下降的趨勢,在攪拌速度為100 r/min時多糖含量最大為(0.291±0.033)g/L,分析原因可能是由于高攪拌速度時,剪切力較大,菌絲易被打斷,影響了菌絲的活性和多糖的積累,所以后續(xù)實(shí)驗(yàn)將采用120 r/min作為最佳的攪拌速度。

    圖1 攪拌速度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響Fig.1 Effect of stirring speed on liquid submerged fermentation of G.frondasa

    2.1.2 培養(yǎng)溫度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響

    圖2 培養(yǎng)溫度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響Fig.2 Effect of culture temperature on liquid submerged fermentation of G.frondasa

    溫度是影響菌絲生長的最重要條件,食用菌適宜的生長溫度在22~30℃之間,不同的菌種的最適生長溫度不同。培養(yǎng)溫度對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響結(jié)果見圖2。由圖2可知,隨著培養(yǎng)溫度的升高,灰樹花菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖的含量逐漸降低,當(dāng)培養(yǎng)溫度為23℃時,灰樹花菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖含量達(dá)到最大,分別為(4.537±0.364)g/L和(0.486±0.022)g/L,所以23 ℃為最佳的培養(yǎng)溫度。

    2.1.3 通氣量對灰樹花液態(tài)發(fā)酵的影響

    在需氧型微生物發(fā)酵中,微生物對培養(yǎng)基中的溶氧量非常敏感,在發(fā)酵過程中通入空氣可以供給細(xì)胞生長所需的O2,同時也有利于除去代謝過程中產(chǎn)生的廢氣。通氣量對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響結(jié)果見圖3。由圖3可知,隨著通氣量的增加,灰樹花的菌絲體生物量和發(fā)酵液中多糖含量也隨之增加,當(dāng)通氣量為5 L/min時達(dá)到最大,分別為(5.805±0.259)g/L和(0.513±0.026)g/L,但考慮到通氣量較高時,發(fā)酵液劇烈翻騰,有大量的泡沫產(chǎn)生,影響發(fā)酵罐的裝液量,同時也會增加染菌的幾率,所以選擇通氣量3 L/min為灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的最佳通氣量。

    圖3 通氣量對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響Fig.3 Effect of ventilatory capacity on liquid submerged fermentation of G.frondasa

    2.2 兩種不同類型發(fā)酵罐對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵的影響

    目前,攪拌式發(fā)酵罐和氣升式發(fā)酵罐是工業(yè)化生產(chǎn)中兩種主要的發(fā)酵設(shè)備,本研究在相同的培養(yǎng)條件(攪拌速度120 r/min、培養(yǎng)溫度23℃、通氣量3 L/min、接種量10%)下,采用7L的這兩種發(fā)酵罐分別液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花14d,每隔1 d取樣檢測,攪拌式發(fā)酵罐和氣升式發(fā)酵罐對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵過程中殘?zhí)橇?、溶氧量、pH、生物和多糖含量的影響結(jié)果見圖4。

    由圖4可知,采用攪拌式發(fā)酵罐發(fā)酵時,灰樹花的適應(yīng)期較短為3 d,對數(shù)期較長為7 d,而氣升式發(fā)酵罐發(fā)酵時,灰樹花的適應(yīng)期和對數(shù)期分別是5d和5d,說明攪拌產(chǎn)生有利于灰樹花菌絲的分散,從而提高了發(fā)酵液中菌絲的濃度,延長數(shù)生長期促進(jìn)了灰樹花菌絲體的生長和胞外胞外多糖的合成。在衰亡期階段,攪拌式發(fā)酵培養(yǎng)的灰樹花生物量和發(fā)酵液中多糖含量分別為10.742 g/L和3.541 g/L,高于氣升式發(fā)酵罐中生物量(4.802 g/L)和發(fā)酵液中多糖含量(1.048 g/L)。采用攪拌式發(fā)酵罐和氣升式發(fā)酵罐對灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵14 d時的菌絲體形態(tài)見圖5。采用攪拌式發(fā)酵罐發(fā)酵灰樹花14 d時,菌絲球直徑為(2.725±0.372 mm),菌絲球密度為(306個/10 mL),而采用氣升式發(fā)酵罐發(fā)酵灰樹花14 d時,菌絲球直徑為(3.225±0.571 mm),菌絲球密度為130個/10 mL),采用攪拌式發(fā)酵罐發(fā)酵灰樹花菌絲球直徑較小,密度大,且更加均勻。此外,采用攪拌式發(fā)酵罐發(fā)酵灰樹花發(fā)酵液菇香味更加濃郁。綜上得出攪拌式發(fā)酵罐比氣升式發(fā)酵罐更適用于灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵。

    圖4 7 L攪拌式(A)及氣升式(B)發(fā)酵罐液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花的動力學(xué)曲線Fig.4 Kinetic curves of liquid submerged fermentation of G.frondasa in stirring(A)and airlift(B)7 L fermenter

    圖5 7 L攪拌式(A)及氣升式(B)發(fā)酵罐液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花的菌絲體形態(tài)Fig.5 Mycelium morphology of liquid submerged fermentation of G.frondasa in stirring(A)and airlift(B)7 L fermenter

    2.3 攪拌式發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)灰樹花

    在得到7 L攪拌式發(fā)酵罐液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花的最佳條件后,在50L攪拌式發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),結(jié)果見圖6。

    圖6 50 L攪拌式發(fā)酵罐液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花的動力學(xué)曲線Fig.6 Dynamic curve of submerged fermentation of G.frondasa in 50 L stirred tank fermenter

    在攪拌速度100r/min、培養(yǎng)溫度23℃、通氣量15 L/min,接種量10%的條件下發(fā)酵14 d,由圖6可知,灰樹花發(fā)酵培養(yǎng)13 d時生物量和發(fā)酵液中多糖含量達(dá)到最大值,分別為13.238g/L和3.178g/L,發(fā)酵液的pH值從4.64降為3.58,溶氧量降為27.5%,并且發(fā)酵液中的殘?zhí)橇坑?2 g/L降為3.357 g/L。表明50 L攪拌式發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)灰樹花取得了成功。

    3 結(jié)論

    通過對攪拌轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度和通氣量的研究得出灰樹花在7 L攪拌式發(fā)酵罐中的最佳液態(tài)深層發(fā)酵條件為攪拌速度120 r/min、培養(yǎng)溫度23℃和通氣量3 L/min;同時,通過對比兩種不同類型的發(fā)酵罐發(fā)現(xiàn),采用攪拌式發(fā)酵罐液態(tài)深層發(fā)酵灰樹花14 d時,生物量和發(fā)酵液中多糖含量更高,分別為10.742 g/L和3.541 g/L,菌絲球形態(tài)更好且密度較高,發(fā)酵液菇香味更加濃郁,所以攪拌式發(fā)酵罐更適用于灰樹花液態(tài)深層發(fā)酵;此外,本研究成功的在50 L攪拌式發(fā)酵罐中進(jìn)行了擴(kuò)大培養(yǎng),發(fā)酵14 d時,灰樹花的生物量和發(fā)酵液中多糖含量分別達(dá)到13.238 g/L和3.178 g/L。本研究結(jié)果為灰樹花的工業(yè)化液態(tài)培養(yǎng)提供了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。

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    《中國釀造》雜志征稿啟事

    《中國釀造》創(chuàng)刊于1982年,是由中國商業(yè)聯(lián)合會主管,中國調(diào)味品協(xié)會及北京食品科學(xué)研究院主辦的綜合性科技期刊。并歷次被評為全國中文核心期刊、中國科技核心期刊、《中國知網(wǎng)》重點(diǎn)收錄期刊、《萬方數(shù)據(jù)庫》全文收錄期刊、《中文科技期刊數(shù)據(jù)庫》來源期刊、中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫收錄期刊、美國《烏利希期刊指南》(UPD)收錄期刊、英國《食品科學(xué)文摘》(FSTA)收錄期刊、英國《國際農(nóng)業(yè)與生物科學(xué)研究中心》(CABI)收錄期刊、美國《化學(xué)文摘》(CA)收錄期刊、俄羅斯《文摘雜志》(AJ)收錄期刊、中國科學(xué)評價研究中心(RCCSE)數(shù)據(jù)庫收錄期刊,也是學(xué)位與研究生教育的中文重要期刊。

    本刊主要面向全國各大高等院校、科研院所、各級黨政機(jī)關(guān)、相關(guān)企事業(yè)單位的廣大專家學(xué)者、工程技術(shù)人員、本科生、碩士博士研究生、管理人員等。

    《中國釀造》主要欄目有:研究報(bào)告、專論綜述、創(chuàng)新與借鑒、經(jīng)驗(yàn)交流、分析與檢測、產(chǎn)品開發(fā)、釀造文化、海外文摘等。

    歡迎踴躍投稿!

    網(wǎng)站:www.chinabrewing.net.cn郵箱:zgnzzz@163.com電話:010-83152738/83152308

    征稿范圍:

    (1)新工藝、新技術(shù)、新設(shè)備在釀造行業(yè)的應(yīng)用;(2)調(diào)味品的研發(fā)創(chuàng)新與推廣應(yīng)用;(3)調(diào)味品產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)管理及產(chǎn)品質(zhì)量安全評價;(4)食品添加劑在釀造行業(yè)的應(yīng)用;(5)現(xiàn)代高新檢測技術(shù)在釀造行業(yè)的應(yīng)用;(6)釀酒產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)管理及產(chǎn)品質(zhì)量安全的控制;(7)發(fā)酵法制備酒精、氨基酸、高級醇及有機(jī)酸等工藝研究;(8)微生物發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基發(fā)酵條件優(yōu)化;(9)發(fā)酵工程菌種的篩育與人工誘變、雜交選育及基因工程改造研究;(10)生物質(zhì)能源的開發(fā)利用及規(guī)模化制備;(11)傳統(tǒng)發(fā)酵食品生產(chǎn)工藝改進(jìn)、微生物菌種改良、發(fā)酵機(jī)理及規(guī)?;a(chǎn)研究;(12)食品及發(fā)酵工業(yè)廢水、廢渣處理及綜合利用;(13)益生菌及功能型發(fā)酵乳制品研究與開發(fā);(14)行業(yè)實(shí)用技術(shù)、政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)動態(tài)和最新舉措等。

    注意事項(xiàng):

    (1)來稿要求論點(diǎn)明確、數(shù)據(jù)可靠、邏輯嚴(yán)密、文字精煉。在文稿首頁用腳注說明論文屬何項(xiàng)目、何基金(編號)資助,本刊將優(yōu)先報(bào)道國家級、省部級及國際合作項(xiàng)目的科研成果;第一作者及通訊作者(一般為導(dǎo)師)簡介(包括姓名、出生年月、性別、職稱、學(xué)位、研究方向或目前主要從事的工作、郵箱、聯(lián)系電話)。(2)稿件要求8000字以內(nèi),須有中圖分類號,文獻(xiàn)標(biāo)志碼,中英文標(biāo)題、單位、作者,并有200~300字的中英文摘要和5~8個關(guān)鍵詞,標(biāo)題、摘要、表題、圖題請用中英文對照。摘要內(nèi)容應(yīng)包括研究目的、方法、結(jié)果和結(jié)論;綜述文章可寫指示性摘要。(3)來稿內(nèi)容涉及配方時,應(yīng)寫明配料的名稱和配比,勿用代號;工藝過程要完整,不要省略;插圖、表格需放在正文相應(yīng)地方,不要集中;引用的圖表要有出處,計(jì)量要用法定單位。(4)文稿參考文獻(xiàn)一般研究論文約25篇參考文獻(xiàn),不可少于20篇,綜述論文不少于35篇。研究性論文和綜述性論文中近5年文獻(xiàn)不少于參考文獻(xiàn)總數(shù)的一半,外文文獻(xiàn)不少于5篇,期格式請參照GB/T 7714—2015《信息與文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)著錄規(guī)則》。(5)來稿必須是最新的、作者自身創(chuàng)造性的科研成果,且是在中外文正式刊物上未發(fā)表的論文。本刊嚴(yán)禁一稿多投、重復(fù)內(nèi)容多次投稿、不同文種重復(fù)投稿。(6)我刊以實(shí)現(xiàn)對所有來稿的文字復(fù)制比對工作,若文字復(fù)制比超過30%的稿件我刊不予采用。(7)稿件一經(jīng)錄用,即被認(rèn)為同意收錄于《中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)》、萬方數(shù)據(jù)庫等,同意入編數(shù)據(jù)庫及上網(wǎng)發(fā)布,與此有關(guān)的作者著作權(quán)使用費(fèi)與稿酬一次性給付。作者如有異議,請?jiān)谕陡鍟r聲明。

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