白酒生產(chǎn)用己酸菌發(fā)酵液發(fā)酵條件及培養(yǎng)基組成的優(yōu)化

胡智慧,諶柄旭,任 雪,郭學(xué)武,肖冬光*

(天津科技大學(xué) 生物工程學(xué)院 工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300457)

濃香型白酒是目前我國(guó)產(chǎn)量最大、消費(fèi)面最廣、研究最多的一類白酒,其質(zhì)量的好壞與窖泥的質(zhì)量關(guān)系密切［1］。窖泥是己酸菌生長(zhǎng)、繁殖和代謝產(chǎn)己酸的場(chǎng)所,所產(chǎn)己酸在大曲酯化酶的作用下與乙醇發(fā)生酯化反應(yīng),形成濃香型白酒的主體香成分—己酸乙酯,其含量影響著濃香型白酒的風(fēng)格與質(zhì)量。

窖泥經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的使用后,就會(huì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象,如表面析出淺白色或針狀結(jié)晶物質(zhì),致使?jié)庀阈桶拙浦械募核嵋阴ズ拷档?嚴(yán)重影響白酒的風(fēng)味及口感［2］。目前科研工作者已采取使用超濃縮復(fù)合己酸菌液［3-5］、固(液)窖泥功能菌［6-9］、人工窖泥［10-13］等多種方法修復(fù)老化窖泥,來(lái)彌補(bǔ)窖泥退化帶來(lái)的不良后果。

濃香型白酒的生產(chǎn)多使用小窖池作為發(fā)酵容器,雖然酒的品質(zhì)好,但很大程度上限制了糟醅出入窖池的方式,降低了勞動(dòng)效率,增加了勞動(dòng)強(qiáng)度及生產(chǎn)成本,給濃香型白酒的機(jī)械化生產(chǎn)帶來(lái)了很多的困難。隨著大窖池和機(jī)械抓斗的應(yīng)用,極大地提高了勞動(dòng)效率,但同時(shí)也影響了白酒的品質(zhì),主要是因?yàn)榇蠼殉亟涯嘀械募核峋a(chǎn)的己酸很難滲透到窖池中部,致使窖池中部很難形成己酸乙酯。高濃度己酸菌發(fā)酵液的灌窖可以有效地解決大窖池中部己酸乙酯合成不足的問(wèn)題,進(jìn)而改善和提高白酒的品質(zhì)。

己酸菌發(fā)酵液已廣泛應(yīng)用于濃香型白酒的生產(chǎn)中,如可以應(yīng)用于濃香型白酒的灌窖［14-15］,增加窖池中己酸的濃度,為己酸乙酯的合成提供充足的前體物；也可以用于窖池保養(yǎng)［15-16］、人工窖泥培養(yǎng)［17］,修復(fù)改善窖泥微生態(tài)菌群,增加窖泥的活力；還可以應(yīng)用于濃香型白酒的酯化液制作［18-19］,直接添加到窖池中或者串蒸酒醅,達(dá)到提高濃香型白酒中己酸乙酯含量的目的。如何快速地提高己酸菌發(fā)酵液中己酸的含量,滿足濃香型白酒生產(chǎn)的需求,節(jié)約生產(chǎn)成本,是亟需解決的問(wèn)題之一。本研究采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法對(duì)影響己酸菌代謝產(chǎn)酸的發(fā)酵條件和培養(yǎng)基組成進(jìn)行了優(yōu)化,旨在探索出己酸菌發(fā)酵液的最佳生產(chǎn)工藝,為其工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

己酸菌：從濃香型白酒的窖泥中篩選得到；硫酸銨、磷酸氫二鉀、乙醇：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；乙酸鈉、碳酸鈣、硫酸鎂：天津市化學(xué)試劑一廠；酵母浸粉(生化試劑)：北京奧博星生物技術(shù)公司；生物素：北京索萊寶科技有限公司；對(duì)氨基苯甲酸：上海麥克林生化科技有限公司；以上試劑均為分析純；己酸標(biāo)準(zhǔn)品(色譜純)：美國(guó)Sigma-Aldrich公司。

種子培養(yǎng)基［20］：乙酸鈉0.5g/100mL,硫酸銨0.05g/100mL,磷酸氫二鉀0.04 g/100 mL,硫酸鎂0.02 g/100 mL,酵母浸粉0.2 g/100mL,自然值pH,121℃滅菌20 min。干熱滅菌后接種前加入1g/100mL碳酸鈣,過(guò)濾除菌后加入2.5mL/100mL體積分?jǐn)?shù)95%乙醇溶液。

發(fā)酵培養(yǎng)基：乙酸鈉0.5g/100mL,硫酸銨0.05g/100mL,磷酸氫二鉀0.04 g/100mL,硫酸鎂0.02 g/100 mL,酵母浸粉0.2g/100mL,自然pH值,121℃滅菌20 min。干熱滅菌后接種前加入1g/100 mL碳酸鈣,過(guò)濾除菌后加入0.05 g/100mL對(duì)氨基苯甲酸、0.05 g/100 mL生物素和2.5 mL/100 mL體積分?jǐn)?shù)95%乙醇溶液。

1.2 儀器與設(shè)備

LRh-250A型生化培養(yǎng)箱：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；Agilent 1260 Infinity高效液相色譜儀：美國(guó)Agilent公司；UV-1200紫外分光光度計(jì)：上海美譜達(dá)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 己酸菌種子培養(yǎng)周期的確定

取100μL己酸菌接入含有5 mL種子培養(yǎng)基的試管中,35℃,200 r/min活化培養(yǎng)12 h?；罨N子液按10%的接種量接入裝有100 mL種子培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,35℃、200 r/min培養(yǎng)36 h,每2 h在波長(zhǎng)600 nm處測(cè)定發(fā)酵液吸光度值OD600nm,記錄己酸菌生長(zhǎng)情況,繪制己酸菌的生長(zhǎng)曲線。

1.3.2 己酸菌發(fā)酵條件優(yōu)化

采用單因素優(yōu)化法,以己酸產(chǎn)量為評(píng)價(jià)指標(biāo),分別對(duì)發(fā)酵溫度(30℃、33℃、35℃、37℃、40℃)、發(fā)酵時(shí)間(3 d、7d、11 d、15 d、20 d)、接種量(3%、5%、10%、15%、20%)、裝液量(25mL/100mL、50mL/100mL、75mL/100mL、100mL/100mL、125 mL/100 mL)進(jìn)行優(yōu)化,于恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),培養(yǎng)基為發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

1.3.3 己酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

在己酸菌發(fā)酵條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上,采用Plackett-Burman試驗(yàn)、最陡爬坡試驗(yàn)、中心組合設(shè)計(jì)、響應(yīng)面法對(duì)己酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基的組成進(jìn)行優(yōu)化,確定己酸菌發(fā)酵液的最佳生產(chǎn)工藝。

(1)Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用Minitab17軟件創(chuàng)建Plackett-Burman試驗(yàn),選取發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基的9個(gè)組分作為篩選對(duì)象,篩選出對(duì)己酸產(chǎn)量影響顯著的因素,每個(gè)因素取2個(gè)水平,高水平是低水平的1.5倍。選用變量個(gè)數(shù)N=20的Plackett-Burman設(shè)計(jì)表,另加3個(gè)空白項(xiàng)(虛擬變量),用于考察試驗(yàn)誤差。Plackett-Burman試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

表1 Plaekett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman experiments design

(2)最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果,選取乙酸鈉、硫酸銨、生物素3個(gè)對(duì)己酸產(chǎn)量影響顯著的因素,以試驗(yàn)值的正負(fù)效應(yīng)確定爬坡方向,根據(jù)各因素效應(yīng)值與比例來(lái)確定變化步長(zhǎng),梯度增加或者減少試驗(yàn)值,對(duì)產(chǎn)酸影響不顯著的其他因素均取平均水平。

(3)中心組合設(shè)計(jì)

在Plackett-Burman試驗(yàn)和最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,利用Minitab17軟件創(chuàng)建中心組合設(shè)計(jì),進(jìn)一步對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的組成進(jìn)行優(yōu)化。以乙酸鈉(X1)、硫酸銨(X2)、生物素(X3)3個(gè)因素作為考察因素,己酸產(chǎn)量(Y)為響應(yīng)值,每個(gè)因素取5個(gè)水平,共有20個(gè)試驗(yàn)點(diǎn),其中有15個(gè)析因點(diǎn)和5個(gè)中心點(diǎn),中心組合設(shè)計(jì)因素與水平見(jiàn)表2。

表2 中心復(fù)合試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 2 Factors and levels of center composite experiments design

1.3.4 己酸產(chǎn)量的檢測(cè)方法

采用高效液相色譜法測(cè)定己酸產(chǎn)量。色譜條件：色譜柱：Aminex HPX-87H有機(jī)酸色譜柱(300 mm×7.8 mm,9μm),流動(dòng)相：5 mmol/L的H2SO4溶液,流速：0.6 mL/min,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm,柱溫：65℃,進(jìn)樣量：20μL。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理

每組試驗(yàn)重復(fù)3次,數(shù)據(jù)均以平均值表示。采用OriginPro 8.5.1繪制圖表,Plackett-Burman試驗(yàn)、最陡爬坡試驗(yàn)、中心復(fù)合試驗(yàn)、響應(yīng)面試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與分析均采用Minitab17軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 己酸菌種子培養(yǎng)周期的確定

按照1.3.1的方法繪制己酸菌種子的生長(zhǎng)曲線,結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知,己酸菌在6～20 h時(shí)為己酸菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,20h時(shí)進(jìn)入減速生長(zhǎng)期,30h后進(jìn)入成熟期。本試驗(yàn)選取己酸菌種子培養(yǎng)周期為15 h,這個(gè)時(shí)期的己酸菌種子處于對(duì)數(shù)中期、活性大、適應(yīng)性強(qiáng)、延滯期短,更利于己酸菌代謝產(chǎn)酸。

圖1 己酸菌種子的生長(zhǎng)曲線Fig.1 Growth curve of caproic acid bacteria seed

2.2 己酸菌發(fā)酵條件優(yōu)化

2.2.1 發(fā)酵溫度對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響

考察發(fā)酵溫度對(duì)己酸產(chǎn)量的影響,結(jié)果如圖2所示。由圖2可知,隨著發(fā)酵溫度的上升,己酸產(chǎn)量先升高后降低。當(dāng)發(fā)酵溫度為33℃時(shí),最適合己酸菌生長(zhǎng)代謝,己酸產(chǎn)量達(dá)到最大,繼續(xù)升高發(fā)酵溫度,影響了己酸菌的生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)酸,己酸產(chǎn)量開(kāi)始下降。因此,選擇最佳發(fā)酵溫度為33℃。

圖2 發(fā)酵溫度對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響Fig.2 Effect of fermentation temperature on acid production of caproic acid bacteria

2.2.2 發(fā)酵時(shí)間對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響

考察發(fā)酵時(shí)間對(duì)己酸產(chǎn)量的影響,結(jié)果如圖3所示。由圖3可知,發(fā)酵時(shí)間為3 d時(shí),己酸菌發(fā)酵液中未檢測(cè)到己酸,此時(shí)己酸菌正處于生長(zhǎng)期；當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為7～11 d時(shí),己酸產(chǎn)量迅速增加,此時(shí)己酸菌處于代謝產(chǎn)酸期,代謝產(chǎn)酸旺盛；當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為11 d時(shí),己酸產(chǎn)量達(dá)到最大值；繼續(xù)延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間,此時(shí)己酸菌代謝減緩甚至菌體衰亡,己酸產(chǎn)量沒(méi)有繼續(xù)增加。因此,選擇發(fā)酵時(shí)間11 d為宜。

圖3 發(fā)酵時(shí)間對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響Fig.3 Effect of fermentation time on acid production of caproic acid bacteria

2.2.3 接種量對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響

圖4 接種量對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響Fig.4 Effect of inoculum on acid production of caproic acid bacteria

考察接種量對(duì)己酸產(chǎn)量的影響,結(jié)果如圖4所示。由圖4可知,隨著接種量的增加,己酸產(chǎn)量呈先升高后下降的趨勢(shì)。當(dāng)接種量＜5%時(shí),己酸產(chǎn)量較少,此時(shí)己酸菌生物量積累少,進(jìn)而影響己酸菌代謝產(chǎn)酸；當(dāng)接種量＞5%時(shí),己酸菌過(guò)多消耗碳源、氮源,反而不利于己酸菌代謝產(chǎn)酸。當(dāng)接種量為5%時(shí),己酸產(chǎn)量達(dá)到最高。因此,選擇接種量5%為宜。

2.2.4 裝液量對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響

圖5 裝液量對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸的影響Fig.5 Effect of loaded volume on acid production of caproic acid bacteria

考察裝液量對(duì)己酸產(chǎn)量的影響,結(jié)果如圖5所示。由圖5可知,隨著裝液量的增加,己酸產(chǎn)量呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)裝液量＜50 mL/100 mL時(shí),己酸產(chǎn)量較少,由于預(yù)留的空間大、氧氣含量高,反而不利于己酸菌代謝產(chǎn)酸；當(dāng)裝液量為50 mL/100 mL時(shí),己酸產(chǎn)量達(dá)到最高；繼續(xù)增加裝液量,己酸產(chǎn)量開(kāi)始降低,這可能是由于己酸菌生長(zhǎng)環(huán)境預(yù)留空間小、氧氣含量低,從而影響到己酸菌代謝產(chǎn)酸。因此,選擇裝液量50 mL/100 mL為宜。

2.3 己酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基組分優(yōu)化

2.3.1 Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果

利用Minitab17軟件對(duì)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果及各因素效應(yīng)進(jìn)行分析,結(jié)果如表3、表4所示。由表4可知,從主效應(yīng)可以看出,因素A(乙酸鈉)、E(硫酸銨)、G(碳酸鈣)、I(對(duì)氨基苯甲酸)、K(生物素)對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響極顯著(P＜0.01),各因素對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響的大小順序?yàn)镚＞A＞K＞E＞I,其中A、E、G、I為正因素,K為負(fù)因素,G的作用主要是中和己酸菌所產(chǎn)的己酸,不是己酸菌生長(zhǎng)所需的碳源,加入一定量即可以滿足中和己酸的需求,因此不作為進(jìn)一步優(yōu)化的因素。A、E作為己酸菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源,K、I作為己酸菌生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子,因此,本研究選取A、E、K作為最陡爬坡試驗(yàn)中進(jìn)一步優(yōu)化的因素。

表3 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Design and results of Plackett-Burman experiments

表4 Plackett-Burman試驗(yàn)各因素效應(yīng)分析Table 4 Effect analysis of each factor of Plackett-Burman experiments

2.3.2 最陡爬坡試驗(yàn)選取中心點(diǎn)

對(duì)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)因素A(乙酸鈉)、E(硫酸銨)對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸具有正促進(jìn)作用,K(生物素)對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸具有負(fù)促進(jìn)作用。在最陡爬坡試驗(yàn)中,以0.2和0.1為步長(zhǎng)增加培養(yǎng)基中A、E的含量,以-0.01為步長(zhǎng)減少K的含量。在進(jìn)一步研究中,其他因素均取平均水平,對(duì)影響效果不進(jìn)行分析。

最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果如表5所示。由表5可知,7號(hào)試驗(yàn)組的己酸產(chǎn)量最大,即乙酸鈉1.8 g/100 mL、硫酸銨1.2 g/100 mL、生物素0.01 g/100 mL,這說(shuō)明最大響應(yīng)區(qū)間在7號(hào)試驗(yàn)組附近。故以7號(hào)試驗(yàn)組的培養(yǎng)基組分為中心復(fù)合試驗(yàn)的中心點(diǎn),進(jìn)一步優(yōu)化。

表5 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 5 Design and results of the steepest ascent experiments

2.3.3 中心組合設(shè)計(jì)確定最優(yōu)組合

根據(jù)最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果篩選出的試驗(yàn)中心點(diǎn),以乙酸鈉(X1)、硫酸銨(X2)、生物素(X3)進(jìn)行3因素5水平的中心復(fù)合試驗(yàn),其他因素均取平均水平,共進(jìn)行20次試驗(yàn),中心組合設(shè)計(jì)及結(jié)果如表6所示。

表6 中心組合試驗(yàn)的設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 6 Design and results of center composite experiments

2.3.4 模型的建立與方差分析

利用Minitab17軟件對(duì)中心組合試驗(yàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合分析,以乙酸鈉(X1)、硫酸銨(X2)、生物素(X3)為影響因素,己酸產(chǎn)量(Y)為響應(yīng)值,經(jīng)回歸擬合后,己酸產(chǎn)量與乙酸鈉、硫酸銨、生物素含量的回歸方程表示為：

Y=17.847+0.154X1+0.315X2-0.885X3+0.064X1X2-1.301X1X3+

0.185 X2X3-0.127X12-1.177X22-0.276X32

表7 回歸方程的方差分析Table 7 Variance analysis of regression equation

對(duì)模型進(jìn)行方差分析,結(jié)果見(jiàn)表7。由表7可知,回歸模型極顯著(P＜0.01),決定系數(shù)R2為0.923,說(shuō)明回歸模型的擬合度很好,表明己酸產(chǎn)量的試驗(yàn)值和預(yù)測(cè)值有很好的一致性；校正決定系數(shù)R2adj為0.854,說(shuō)明己酸產(chǎn)量的回歸模型能夠在85.4%的程度上解釋試驗(yàn)結(jié)果,僅有14.6%不能用這個(gè)回歸模型表示。其中因素X3、X22、X1X3對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響極顯著(P＜0.01),其他一次項(xiàng)、二次項(xiàng)、交互項(xiàng)對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響均不顯著(P＞0.05),失擬項(xiàng)P值為0.563,影響不顯著(P＞0.05),進(jìn)一步說(shuō)明此模型的擬合度很好。變異系數(shù)(variable coefficient,CV)表示試驗(yàn)的精確度,數(shù)值越大,表明試驗(yàn)的可靠性越差,本試驗(yàn)中響應(yīng)值(Y)的CV值為12.238%(＜15%),說(shuō)明回歸模型方程能夠較好地反應(yīng)真實(shí)值。綜上所述,該回歸模型擬合程度好,試驗(yàn)誤差小,能夠準(zhǔn)確的分析和預(yù)測(cè)己酸的產(chǎn)量。

2.3.5 響應(yīng)面結(jié)果分析及驗(yàn)證試驗(yàn)

利用Minnitab17軟件,繪制3因素對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響的響應(yīng)面及等值線,結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6可知,乙酸鈉與生物素之間的交互作用對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響顯著,當(dāng)硫酸銨添加量為定值,乙酸鈉含量在中心點(diǎn)附近時(shí),隨著生物素含量梯度減少,己酸產(chǎn)量逐步提高；生物素與硫酸銨之間的交互作用對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響不顯著,當(dāng)乙酸鈉添加量為定值,硫酸銨在中心點(diǎn)附近時(shí),隨著生物素含量梯度減少,己酸產(chǎn)量逐步增加；乙酸鈉與硫酸銨之間的交互作用對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響也不顯著,當(dāng)生物素添加量為定值,乙酸鈉、硫酸銨含量都在中心點(diǎn)附近時(shí),己酸產(chǎn)量最高。

圖6 乙酸鈉、硫酸銨和生物素的交互作用對(duì)己酸菌代謝產(chǎn)酸影響的響應(yīng)曲面和等值線Fig.6 Response surface plots and contour line of the effects of interaction between sodium acetate,ammonium sulfate and biotin on acid production of caproic acid bacteria

對(duì)多元回歸擬合方程進(jìn)行分析,得出己酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為乙酸鈉1.644 g/100 mL、硫酸銨1.213 g/100 mL、生物素0.013 g/100 mL,其余組分均取平均值,再結(jié)合單因素優(yōu)化的發(fā)酵條件,最終確定己酸菌發(fā)酵液的最佳培養(yǎng)工藝。在此培養(yǎng)工藝條件下,進(jìn)行3次重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn),所得己酸平均產(chǎn)量為18.93 g/L,試驗(yàn)值與回歸擬合方程預(yù)測(cè)值(17.69 g/L)相差7%,再次證實(shí)了該模型的有效性。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)以白酒生產(chǎn)用的己酸菌為研究對(duì)象,在單因素的基礎(chǔ)上,對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,在此基礎(chǔ)上利用PB試驗(yàn)、最陡爬坡試驗(yàn)、中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)、響應(yīng)面法對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基的組成進(jìn)行了優(yōu)化,最終確定了最佳的己酸菌發(fā)酵液的發(fā)酵條件為發(fā)酵溫度33℃、接種量5%、裝液量50 mL/100 mL、發(fā)酵時(shí)間11 d；發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為乙酸鈉1.644 g/100 mL、硫酸銨1.213 g/100 mL、生物素0.013 g/100 mL、碳酸鈣1.0 g/100 mL、磷酸氫二鉀0.025 g/100 mL、硫酸鎂0.025g/100mL、酵母浸粉0.625g/100mL、乙醇2.5mL/100 mL、對(duì)氨基苯甲酸0.062 5 g/100 mL。在此生產(chǎn)工藝條件下,獲得的己酸菌發(fā)酵液中己酸產(chǎn)量達(dá)18.93 g/L,比初始發(fā)酵工藝提高了169%,為己酸工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù),同時(shí)也為實(shí)現(xiàn)白酒機(jī)械化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

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《中國(guó)釀造》雜志征稿啟事

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