外周血中循環(huán)腫瘤細胞檢測在肺部良惡性病變診斷中的價值

陳 衛(wèi) 琴

(番禺區(qū)中醫(yī)院檢驗科微生物室 廣州 511400)

肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率增長最快、最高，對人類生命健康威脅最大的惡性腫瘤之一，遠處轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因[1]。外周血中的循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cell，簡稱CTC)是指存在于外周血的腫瘤細胞，具有高度活力和高度轉(zhuǎn)移潛能的CTC可以在循環(huán)系統(tǒng)中存活，并在合適的環(huán)境中增殖，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[2]。為探究外周血中CTC檢測在肺部良惡性病變診斷中的應(yīng)用價值，本院選取133例經(jīng)X線/CT檢查確診為肺部實性占位性病變患者為研究對象進行CTC檢測和腫瘤標志物檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1納入標準

(1)X線/CT檢查顯示肺部最大直徑≤35mm；(2)無鈣化；(3)所有入組患者均未接受過化療；(4)本實驗經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查通過，患者及家屬對本實驗?zāi)康募胺绞街?，并自愿簽署同意書?/p>

1.1.2排除標準

(1)合并其他器質(zhì)性疾病患者；(2)免疫系統(tǒng)疾病患者；(3)凝血功能障礙者；(4)急、慢性感染患者；(5)精神障礙者。

1.1.3分組資料

選取2014年11月～2016年11月期間于我院經(jīng)X線/CT檢查確診為肺部實性占位性病變患者133例為研究對象，經(jīng)手術(shù)病理證實為良性病變53例(良性病變組)，惡性病變80例(惡性病變組)。良性病變組男35例，女18例；年齡28～79歲，平均(54.43±5.89)歲；炎癥25例，結(jié)核瘤16例，炎性肌纖維母細胞瘤6例，曲霉菌感染6例。惡性病變組中男56例、女24例；年齡29～80歲，平均(55.12±6.03)歲；鱗癌37例，腺癌25例，小細胞肺癌12例，霍奇金淋巴瘤3例，轉(zhuǎn)移瘤3例。

1.2 方法

(1)使用一次性EDTA抗凝真空采血管收集兩組患者未經(jīng)腫瘤相關(guān)治療前的晨間空腹狀態(tài)外周靜脈血3mL，上下顛倒7～8次后，使用ABI StepOne PCR儀(美國Applied Biosystems公司)和CTC檢測試劑(格諾思博生物科技有限公司)， 基于LT-PCR技術(shù)對細胞表面FR陽性CTC進行計數(shù)；(2)使用惰性分離膠促凝管收集兩組患者未經(jīng)腫瘤相關(guān)治療前的晨間空腹狀態(tài)外周靜脈血5mL，室溫下靜置30min后，離心分離血清，使用Elecsys2010型電化學發(fā)光全自動免疫分析儀(德國羅氏診斷有限公司)測定血清中腫瘤標志物[癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]水平。CEA、CYFRA21-1試劑由德國羅氏診斷有限公司提供，SCC試劑由深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程有限公司提供，嚴格按照儀器和試劑說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學分析

應(yīng)用SPSS19.0軟件處理實驗數(shù)據(jù)，CTC和腫瘤標志物水平呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)表示，行Mann-Whitney U 秩和檢驗；采用ROC曲線評價CTC和腫瘤標志物對肺部良惡性病變的診斷價值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者CTC和腫瘤標志物表達水平比較

兩組患者CYFRA21-1水平比較無顯著差異(P>0.05)；惡性病變組CTC和CEA水平顯著高于良性病變組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組患者CTC和腫瘤標志物表達水平比較

組別例數(shù)CTC(units/3mL)CEA(ng/mL)CYFRA21?1(ng/mL)良性病變組536．67(4．49～7．85)1．41(1．01～1．70)0．90(0．69～1．40)惡性病變組8011．06(8．77～14．42)1．61(1．10～2．50)0．90(0．61～1．42)Z-6．215-1．990-0．370P0．0010．0470．712

2.2 CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線分析

ROC曲線分析結(jié)果顯示，CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線下面積分別為0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，說明較之傳統(tǒng)腫瘤標志物CEA，CTC對肺部良惡性病變的診斷價值更高，見圖1。

圖1 CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線

3 討論

自從1869年，Ashworth首次提出CTC概念后，對CTC的研究逐漸成為了腫瘤領(lǐng)域的研究熱點[3]。大量臨床研究顯示，外周血循環(huán)CTC的檢測可以通過捕捉外周血中痕量存在的CTC，監(jiān)測CTC類型和數(shù)量變化趨勢，以便實時監(jiān)測腫瘤動態(tài)，達到評估預(yù)后療效的作用[4]；CTC數(shù)量升高提示療效不好而數(shù)量降低提示療效較好，CTC能及時反映治療過程中患者的狀況變化[5]；CTC檢測比傳統(tǒng)的影像學更早、更準確、更靈敏地判斷預(yù)后，治療4周后監(jiān)測CTC對于預(yù)后判斷的結(jié)果與傳統(tǒng)影像學在治療12周后的判斷結(jié)果極其吻合[6]。這種實時、靈敏、可靠的檢測方法可以幫助醫(yī)生正確判斷治療效果，并制定高效的個體化治療方案。

臨床研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者體內(nèi)葉酸受體(FRs)表達水平較高，LT-PCR技術(shù)主要是通過FRs識別肺癌CTC。其中FR-α除在少量正常組織中(腎、胎盤等)有表達外，在正常組織和健康人血液細胞中表達水平極低，具有較強的組織和腫瘤特異性，是一種理想的肺癌CTC檢測靶點[7～8]。既往臨床研究使用LT-PCR技術(shù)對自爆表面FR陽性CTC進行計數(shù)，結(jié)果顯示肺癌良性良性病變患者體內(nèi)CTC顯著高于原位肺癌患者，說明CTC檢測可用于肺癌的早期診斷與轉(zhuǎn)移檢測[9]。本研究共選取了133例肺部實性占位性病變患者為研究對象，其中良性病變53例，惡性病變80例，惡性病變組CTC和CEA水平顯著高于良性病變組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。ROC曲線分析結(jié)果顯示，CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線下面積分別為0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，證明CTC在肺部良惡性病變診斷中具有較好的臨床應(yīng)用前景，可以為制定其臨床治療方案提供重要依據(jù)。

綜上所述，CTC在肺部良惡性病變診斷中具有重要臨床應(yīng)用價值，可將其作為肺部良惡性病變的輔助診斷方法。

1 喬理華,王琳,婁加陶,等.循環(huán)腫瘤細胞在良惡性肺部孤立性結(jié)節(jié)鑒別診斷中的應(yīng)用價值.中華檢驗醫(yī)學雜志,2016,39(12):941～945.

2 陳陽陽,張潔,徐國賓,等.肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞的檢測方法及臨床應(yīng)用.臨床檢驗雜志,2015,33(8):615～617.

3 郭巧梅,喬理華,王琳,等.循環(huán)腫瘤細胞檢測對非小細胞肺癌的診斷價值.中華檢驗醫(yī)學雜志,2016,39(8):589～594.

4 徐春祥,何四軍.肺惡性疾病和良性疾病患者外周血循環(huán)腫瘤細胞的差異表達情況分析及臨床意義.海南醫(yī)學院學報,2016,22(15):1722～1725.

5 尹寒露,陰建,陳立文,等.分類檢測非小細胞肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞的臨床價值.中華腫瘤雜志,2016,38(9):677～681.

6 溫堅,何志江,劉云軍,等.小細胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測的臨床意義.黑龍江醫(yī)學,2016,40(2):151～153.

7 Wan J W,Gao M Z,Hu R J,et al.A Preliminary Study on the Relationship Between Circulating Tumor Cells Count and Clinical Features in Patients with Non-small Cell Lung Cancer.Journal of Thoracic Disease,2016,8(6):1029～1031.

8 Kim H,Chang M P,Kim S H,et al.Persistent Pulmonary Subsolid Nodules: Model-based Iterative Reconstruction for Nodule Classification and Measurement Variability on Low-dose CT.European Radiology, 2014,24(11):2700～2708.

9 Lou J T,Wang X Q,Liang X H,et al.Quantitation of Rare Circulating Tumor Cells in Non-small Cell Lung Cancer by Ligand-targeted PCR.Plos One,2013,8(12):e80458.