猴頭菇多糖的乙?；揎椉捌淇寡趸钚匝芯?/h1>
2018-05-01 20:36:52王華麗林曉穎陳義勇
食品工業(yè)科技 2018年8期
徐 兵,王華麗,林曉穎,陳義勇
(常熟理工學(xué)院,生物與食品工程學(xué)院,江蘇常熟 215500)
猴頭菇(Hericiumerinaceus,HE)是一類罕有珍稀的藥用菌,其子實(shí)體外形象猴子的頭,味美可食,富含多種營養(yǎng)成分,并且還含有16種氨基酸,其中有8種為人體必需氨基酸,并且比例與人體需要的氨基酸相接近[1-2]。猴頭菇多糖(HEP)可以控制細(xì)胞分裂速度,調(diào)控細(xì)胞分裂,衰老程度,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),可以用作免疫促進(jìn)劑[3]。同時(shí),猴頭菇多糖還具有降低血糖血脂[4]、促進(jìn)胃的健康[5]、提高免疫力[6]等生理作用,用其制成的醫(yī)藥保健品及功能性食品深受消費(fèi)者喜愛,具有廣闊的市場前景[7]。
乙?；揎検翘穷愇镔|(zhì)的一種常見的修飾方法。目前,多糖的乙?；揎椀难芯恐饕性陟`芝多糖[8]、南瓜多糖[9]、青錢柳葉多糖[10]、松樹蕈多糖[11]等,對猴頭菇多糖的研究僅限于提取、純化方面[12-13],關(guān)于對其乙?；揎椀难芯窟€未見報(bào)道。為此,本文對猴頭菇多糖乙?；揎椷M(jìn)行研究探討。研究料液比(多糖與乙酸酐的比例,g/mL)、反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時(shí)間對多糖乙?；揎椀挠绊?。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面分析法對乙?；に囘M(jìn)行優(yōu)化,并探討乙?；镱^菇多糖的抗氧化活性,旨在為猴頭菇多糖在保健食品領(lǐng)域應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器
猴頭菇 東北黑龍江海成科技有限公司;乙酸酐、NaOH、濃鹽酸、無水乙醇、DPPH、水楊酸、NaNO2、雙氧水、硫酸亞鐵、硝酸鈉等 以上試劑均為國產(chǎn)分析純。
RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮儀器廠;HH-22型恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋 金壇杰瑞爾有限公司;HK-20B型 1000 g搖擺式高速粉碎機(jī) 廣州旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司;722型分光光度計(jì) 上海金華科技儀器有限公司);Z326K型離心機(jī) Hermle labor technik;DFS-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義予華儀器有限公司;DHG-P030A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海三發(fā)儀器有限公司;FE20 pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器上海有限公司;NICOLET 380傅立葉變換紅外光譜儀 美國Thermo公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 猴頭菇多糖的提取 將猴頭菇置入30 ℃鼓風(fēng)干燥箱干燥,粉碎,過40目篩。取50.0 g猴頭菇粉,按固液比1∶40 g/mL加入2 L蒸餾水,80 ℃水浴4 h得到猴頭菇的初提液,經(jīng)4500 r/min離心10 min,取上清液,經(jīng)Sevag法脫蛋白、過氧化氫脫色得到洗脫液,將洗脫液旋蒸至一定體積,以1∶4的比例加入無水乙醇進(jìn)行醇沉,靜置12 h,經(jīng)10000 r/min離心10 min,取沉淀,在40 ℃條件下恒溫鼓風(fēng)干燥24 h,取出后研磨成粉狀,過60目篩,即為HEP樣品,經(jīng)苯酚-硫酸法測定[14-15],以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo),OD490為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.2.2 猴頭菇多糖的乙?；?參照梁少茹等的研究[16],精確稱取HEP樣品0.5 g加入燒杯中,加入10 mL蒸餾水充分混勻,用0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.0,在恒溫下保持一定的時(shí)間,然后分別向HEP溶液中加入一定量的乙酸酐,并且用0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為8.0,恒溫反應(yīng)一定時(shí)間。待反應(yīng)完成后,用濃度為5 mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至7.0,待冷卻后將反應(yīng)液置于截留分子量為15000的透析袋中,流水透析48 h后將透析液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,用4倍95%乙醇醇沉24 h,沉淀經(jīng)冷凍干燥后即得到乙?；镱^菇多糖。
1.2.3 猴頭菇多糖乙酰化取代度的測定 根據(jù)劉瑩等[17]的研究,采用酸堿滴定法測定猴頭菇多糖乙?；〈?。準(zhǔn)確稱取10 mg乙酰化猴頭菇多糖放入100 mL燒杯中,用10 mL 0.01 mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解。以酚酞作為指示劑,用0.01 mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液反滴定至紅色消失,記錄加入鹽酸的體積。取代度(DS)按下式計(jì)算[18]:
式中:A為乙?；?%;V0為加入氫氧化鈉溶液的體積,mL;C0為氫氧化鈉溶液的濃度(0.01 mol/L);V1為消耗鹽酸溶液的體積,mL;C1為鹽酸溶液的濃度(0.01 mol/L);m為乙酰化猴頭菇多糖樣品質(zhì)量,g。
1.2.4 猴頭菇多糖乙酰化修飾的單因素實(shí)驗(yàn)
1.2.4.1 料液比對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?精確稱取0.1 g HEP,反應(yīng)時(shí)間35 ℃,保持反應(yīng)液 pH為8.0反應(yīng)時(shí)間3 h,分別考察料液比1∶20、1∶25、1∶30、1∶35和1∶40 g/mL對HEP乙酰化反應(yīng)的影響,確定適宜的料液比。
1.2.4.2 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙酰化修飾的影響 精確稱取0.1 g HEP,反應(yīng)溫度40 ℃,乙酸酐3.5 mL,保持反應(yīng)液 pH為8.0,分別考察反應(yīng)時(shí)間2、2.5、3、3.5 和4 h對HEP乙酰化反應(yīng)的影響,確定適宜的反應(yīng)時(shí)間。
1.2.4.3 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?精確稱取0.1 g HEP,乙酸酐3.5 mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,保持反應(yīng)液 pH為8.0,分別考察溫度25、30、35、40和45 ℃對HEP乙?；磻?yīng)的影響,確定適宜的反應(yīng)溫度。
1.2.5 猴頭菇多糖乙?；揎椆に嚄l件優(yōu)化 在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken 的中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,以取代度為指標(biāo),選取料液比(A)、反應(yīng)時(shí)間(B)和反應(yīng)溫度(C)三個(gè)主要因素進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化猴頭菇多糖乙?；揎椆に嚄l件,實(shí)驗(yàn)因素及水平設(shè)計(jì)見表1。
表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平Table 1 Level and code of independent variable used for response surface analysis
1.2.6 乙酰化猴頭菇多糖的紅外結(jié)構(gòu)表征 充分干燥的乙?；镱^菇多糖與KBr一起充分研磨,并取適量壓片,用紅外光譜儀在4000～400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外線光譜掃描,同時(shí)與修飾前猴頭菇多糖的紅外光譜圖進(jìn)行比較。
1.2.7 抗氧化活性測定
1.2.7.1 DPPH自由基清除率的測定 根據(jù)宋逍等[19]的研究,取不同濃度的(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)HEP樣品溶液2 mL,加入2 mL現(xiàn)配的DPPH-乙醇溶液(0.1 g/mL)2 mL,作為樣品管,混勻后常溫避光30 min,在517 nm波長處測定溶液OD值,記錄數(shù)據(jù)A1;用蒸餾水代替HEP溶液重復(fù)以上操作,在517 nm處測得吸光度值,記錄數(shù)據(jù)A0;用蒸餾水代替DPPH-乙醇溶液,重復(fù)上述操作,測得吸光度數(shù)據(jù)為B1。
DPPH自由基清除率公式為:
式中:A1為加入不同濃度HEP溶液的吸光度;A0為空白組的吸光度;B1為不同濃度HEP不加DPPH-乙醇溶液的吸光度。
1.2.7.2 羥基自由基清除率的測定 根據(jù)王之珺等[20]的研究,各取1.2.7.1中配制好的不同濃度的HEP樣品溶液1 mL,先后加入FeSO4(9 mmol/L)溶液1 mL,水楊酸-乙醇溶液(9 mmol/L)1 mL,H2O2溶液(9 mmol/L)1 mL,37 ℃水浴加熱,30 min 后,在波長為510 nm處測定OD值,記錄數(shù)據(jù)A1;用蒸餾水代替HEP溶液重復(fù)以上操作,在510 nm處測定OD值,記錄數(shù)據(jù)A0;用蒸餾水替代H2O2溶液重復(fù)上述操作,測得吸光度數(shù)據(jù)為B1。
羥基自由基清除率公式為:
式中:A1為加入不同濃度HEP溶液的吸光度;A0為空白組的吸光度;B1為不加H2O2溶液不同濃度HEP的吸光度。
式中:V1為加多糖樣品后清除超氧陰離子的速率;V0為鄰苯三酚自氧化速率。
1.3 數(shù)據(jù)處理
所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值,并以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Design Expert 8.0.5以及Microsoft Office Excel進(jìn)行處理分析。
2 結(jié)果與分析
2.1 猴頭菇多糖含量
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定多糖含量(圖1),獲得回歸方程:y=0.0050x+0.0155,R2=0. 9931。經(jīng)測定猴頭菇多糖含量為10.89%。
圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve
2.2 單因素對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?/h3>
2.2.1 料液比對猴頭菇多糖乙酰化取代度的影響 料液比對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖2。
圖2 料液比對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊慒ig.2 Effect of polysaccharides-to-acetic anhydrideratioon substitution degree of HEP
由圖2可知,隨著料液比的減少,HEP乙酰化取代度有一定程度增加,當(dāng)料液比為1∶35 (g/mL)時(shí),取代度達(dá)到最大值,乙?；Ч詈谩．?dāng)料液比進(jìn)一步減少,水解副反應(yīng)增加,反應(yīng)體系取代度反而下降,這主要是因?yàn)樯傻囊阴；嗵菍Ψ磻?yīng)起抑制作用導(dǎo)致,因此確定最適宜料液比為1∶35 (g/mL)。
2.2.2 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊?反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖3。
圖3 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙酰化取代度的影響Fig.3 Effect of the reaction time on substitution degree of HEP
由圖3可知,反應(yīng)時(shí)間在1～3 h時(shí),乙酰取代度隨反應(yīng)時(shí)間的增加而增加;在3 h時(shí)取代度達(dá)到最大為0.593,此時(shí)乙酸酐與HEP完全反應(yīng),乙?；Ч詈?超過3 h時(shí),取代度下降,可能是由于反應(yīng)時(shí)間過長,部分乙?；嗵堑囊阴；坞x出來,使取代度降低[17],因此確定最適宜反應(yīng)時(shí)間為3 h。
2.2.3 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊?反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖4。
圖4 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊慒ig.4 Effect of the reaction temperature on substitution degree of HEP
由圖4可知,反應(yīng)溫度在25～30 ℃時(shí),取代度遞增;30 ℃時(shí)取代度達(dá)到最大值;超過30 ℃時(shí),取代度隨溫度升高降低,原因是溫度升高使乙酸酐的水解速度加快,乙?；c多糖的結(jié)合力降低,導(dǎo)致取代度下降[18]。因此確定最適宜反應(yīng)溫度為30 ℃。
2.3 響應(yīng)面分析
2.3.1 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析 為了確定猴頭菇多糖乙酰化修飾的最優(yōu)工藝條件,利用3因素3水平響應(yīng)面分析法優(yōu)化猴頭菇多糖乙?；に噮?shù)。選取料液比、反應(yīng)時(shí)間和溫度三個(gè)考察因素,以乙?；〈菵S作為響應(yīng)值,進(jìn)行三因素三水平的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。用Design-expert軟件對17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的取代度進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,從中發(fā)現(xiàn)各影響因素對修飾的HEP取代度的影響,找到各因素作用的最優(yōu)區(qū)域,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。
表2 實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果分析Table 2 Design and results of tests
表3 方差分析表Table 3 Analysis of variance
通過對響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行分析研究,三個(gè)因素經(jīng)擬合,得到的多糖取代度的回歸方程為
Y=0.59-0.036A+0.000875B-0.011C-0.028AB+0.021AC+0.00675BC-0.11A2-0.11B2-0.087C2
由表3方差分析可以看出,模型p小于0.05,說明模型有意義。失擬項(xiàng)p值為0.0917>0.05,失擬項(xiàng)差異不顯著,表明干擾因素較小。相關(guān)系數(shù)R2=0.9047,表明超過90%的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用該模型進(jìn)行解釋,說明該方程可靠性較高。影響HEP乙?；蛩氐闹鞔雾樞蛞来螢锳>C>B,即料液比>反應(yīng)溫度>反應(yīng)時(shí)間。
2.3.2 響應(yīng)面圖分析 通過響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到響應(yīng)面圖,更直觀地反映各因素交互作用對猴頭菇多糖乙?；〈扔绊懙膹?qiáng)弱關(guān)系。各因素交互作用影響的響應(yīng)面圖見圖5。
圖5 兩因素交互作用對取代度的影響Fig.5 Effects of cross-interaction of two factors on substitution degree of Ac-TMP
由圖5可知:料液比對乙?；〈鹊挠绊懽畲?表現(xiàn)為曲線最陡;溫度的影響次之,而圖中時(shí)間曲線最平滑,因此影響最不顯著。料液比和時(shí)間的交互作用最明顯,料液比和溫度的交互作用次之,時(shí)間和溫度的交互作用不太明顯,但都不顯著。
2.3.3 最佳條件的確定及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 利用Design-Expert 8.06軟件對工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,得到的最佳工藝條件為:料液比為1∶34.1 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3.01 h,溫度為29.59 ℃時(shí),猴頭菇多糖乙?；〈茸畲鬄?.612。考慮實(shí)際操作,調(diào)整工藝參數(shù)料液比為1∶34 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,反應(yīng)溫度30 ℃,在此條件下測得猴頭菇多糖乙酰化的取代度為0.609,與預(yù)測值十分接近,表明該實(shí)驗(yàn)的最佳優(yōu)化條件合理可行。
2.4 紅外結(jié)構(gòu)表征分析
乙?；揎椙昂蠛镱^菇多糖紅外光譜見圖6和圖7。
圖6 HEP的紅外光譜Fig.6 Infrared spectra of HEP
圖7 A-HEP的紅外光譜Fig.7 Infrared spectra of A-HEP
由圖6和圖7可見修飾前后的猴頭菇多糖均具有多糖類物質(zhì)紅外的特征吸收峰:如圖6,在1401.58 cm-1顯現(xiàn)了多糖物質(zhì)的特征吸收,表明該物質(zhì)即為猴頭菇多糖。同樣,如圖7所示,乙?；镱^菇多糖在1640.28 cm-1出現(xiàn)了一個(gè)吸收峰,為酯基C=O雙鍵的伸縮振動(dòng),在1398.14 cm-1處有C-O單鍵的伸縮振動(dòng),說明乙?；a(chǎn)物中成功引入了乙?；?。
2.5 抗氧化活性檢測
2.5.1 DPPH自由基清除能力 修飾前后猴頭菇多糖對DPPH·的清除作用見圖8。
圖8 HEP和A-HEP對DPPH·的清除作用Fig.8 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on DPPH free radicals
由圖8可知,HEP和A-HEP在多糖濃度0.2～0.6 mg/mL范圍內(nèi),清除率隨多糖濃度增加而明顯提高,而當(dāng)多糖濃度大于0.6 mg/mL的時(shí)候,A-HEP對DPPH·的清除有明顯變緩的趨勢。HEP的最大清除率為18.7%,A-HEP最大清除率為22.8%,乙酰化后的HEP對DPPH·的清除能力略有增強(qiáng)。
2.5.2 羥基自由基清除能力 修飾前后猴頭菇多糖羥基自由基清除能力結(jié)果見圖9。
圖9 HEP和A-HEP對·OH的清除作用Fig.9 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on hydroxyl free radicals
由圖9可知,在所選多糖濃度范圍內(nèi)HEP和A-HEP對·OH的清除作用均隨濃度升高而增強(qiáng),與HEP相比A-HEP對·OH的清除能力顯著增強(qiáng),A-HEP的清除率最大為42.8%,而HEP清除率最大為23.7%,表明了對HEP進(jìn)行乙?；揎椖芴岣咂鋵ΑH的清除能力。
2.5.3 清除超氧陰離子能力 修飾前后猴頭菇多糖對超氧陰離子清除能力的影響結(jié)果見圖10。
圖10 HEP和A-HEP對超氧陰離子清除作用Fig.10 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on superoxide anion free radicals
由圖10可知,不同濃度下的A-HEP對超氧陰離子的清除作用都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于相同多糖濃度下HEP的清除作用,HEP的最大清除率為17.2%,A-HEP的最大清除率為30.2%,表明對HEP進(jìn)行乙酰化修飾能提高超氧陰離子的清除作用。
對修飾前后猴頭菇多糖抗氧化活性研究表明:猴頭菇多糖經(jīng)過乙?；揎椇罂寡趸钚杂辛嗣黠@增強(qiáng),可能是因?yàn)楹镱^菇多糖經(jīng)乙?；揎椇?其空間構(gòu)象發(fā)生變化,使其更易于提供羥基,從而有利于捕捉自由基,提高抗氧化活性。
3 結(jié)論
本文以猴頭菇為原料,采用傳統(tǒng)水提法提取猴頭菇多糖,采用乙酸酐法對HEP進(jìn)行乙?；揎?以乙?；〈葹橹笜?biāo),通過響應(yīng)面分析對HEP乙?；揎椆に噮?shù)進(jìn)行優(yōu)化,并比較修飾前后HEP的抗氧化活性。確定了猴頭菇多糖乙?；揎椀淖罴压に嚄l件為:料液比1∶34 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,反應(yīng)溫度30 ℃,在最佳修飾工藝條件下,猴頭菇多糖乙?；娜〈葹?.609。利用該方法對多糖進(jìn)行乙酰化修飾,具有反應(yīng)可操作性強(qiáng)、試劑便宜易得、多糖的乙?；〈容^高的優(yōu)點(diǎn),是一種較理想的能夠有效提高猴頭菇多糖抗氧化活性的一種修飾方法。
抗氧化性研究表明:HEP和A-HEP對DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基均有一定的清除作用,且清除率隨多糖濃度增加而增大。與HEP相比,A-HEP抗氧化活性明顯增強(qiáng)。本研究表明乙?；揎椏梢蕴岣吆镱^菇多糖的抗氧化活性,可用于猴頭菇多糖的結(jié)構(gòu)改性,為其構(gòu)效關(guān)系研究提供新的方向和思路。
[1]黃年來. 中國食用菌百科[M]. 北京:農(nóng)業(yè)出版社,1997.
[2]樊偉偉,黃惠華. 猴頭菇多糖研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2008,29(1):355-358.
[3]Yang B K,Park J B,Song C H. Hypolipidemic effect of an exo-biopolymer produced from a submerged mycelial culture ofhericiumerinaceus[J]. Bioscience Biotechnology & Biochemistry,2003,67(6):1292-1298.
[4]Kim D M,Pyun C W,Ko H G,et al. Isolation of antimicrobial substances fromhericiumerinaceum[J]. Mycobiology,2000,28(1):33-38.
[5]黃萍,羅珍,郭重儀,等. 猴頭菇多糖胃黏膜保護(hù)作用研究[J]. 中藥材,2011,34(10):1588-1590.
[6]羅珍,黃萍,郭重儀,等. 猴頭菇多糖增強(qiáng)免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(4):182-183.
[7]皇甫永冠,閆寶松,宗憲春. 猴頭菇的營養(yǎng)功效及在食品加工中的應(yīng)用[J]. 食用菌,2016,38(2):7-8.
[8]Chen Y,Zhang H,Wang Y,et al. Acetylation and carboxymethylation of the polysaccharide from ganoderma atrum,and their antioxidant and immunomodulating activities[J]. Food Chemistry,2014,156(3):279-288.
[9]Song Y,Yang Y,Zhang Y,et al. Effect of acetylation on antioxidant and cytoprotective activity of polysaccharides isolated from pumpkin(Cucurbita pepo,lady godiva)[J]. Carbohydrate Polymers,2013,98(1):686-91.
[10]Xie J H,Zhang F,Wang Z J,et al. Preparation,characterization and antioxidant activities of acetylated polysaccharides fromCyclocaryapaliurusleaves[J]. Carbohydrate Polymers,2015,133:596-604.
[11]徐田甜,陳義勇. 松樹蕈多糖乙?；揎椆に嚰捌淇寡趸钚訹J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2017(4):164-170.
[12]張樹海. 猴頭菇多糖提取及純化的研究[J]. 食品研究與開發(fā),2006,27(11):103-106.
[13]韓偉,豆欣欣. 猴頭菇多糖的提取純化工藝及抗氧化活性研究[J]. 徐州工程學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2016,31(3):22-28.
[14]韓偉,劉瑞麗,張曉堅(jiān). 猴頭菇多糖純化及活性研究[J]. 安徽醫(yī)藥,2008,12(9):793-794.
[15]和法濤,劉光鵬,朱風(fēng)濤,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化熱水法浸提猴頭菇多糖工藝提高多糖得率[J]. 食品科技,2015(1):210-215.
[16]梁少茹,肖霄,肖斌. 綠茶多糖的乙酰化修飾及其清除自由基、NO2-活性的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(11):84-87,99.
[17]劉瑩,趙杰,許琳. 乙?；揎椊疳樄蕉嗵茄苌锏目寡趸匝芯縖J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2014,40(7):88-91.
[18]王晶,張全斌,張忠山,等. 乙?；Ш衷宥嗵橇蛩狨サ闹苽浼捌淇寡趸钚匝芯縖J]. 中國海洋藥物,2008,27(1):50-54.
[19]宋逍,張麗華,趙鵬,等. 響應(yīng)面法優(yōu)選款冬花多糖的乙?；に囇芯縖J]. 中成藥,2013,35(9):2030-2033.
[20]王之珺,張柳婧,鐘瑩霞,等. 青錢柳多糖的乙酰化修飾及抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2015,36(21):6-9.
[21]楊春瑜,楊春莉,劉海玲,等. 乙?；谀径嗵堑闹苽浼捌淇寡趸钚匝芯縖J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(23):105-110.
猜你喜歡
抑癌蛋白p53乙?；揎椀恼{(diào)控網(wǎng)絡(luò)中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)(2022年8期)2022-09-08 00:39:50 硫脲濃度及反應(yīng)時(shí)間對氫化物發(fā)生-原子熒光法測砷影響科學(xué)與財(cái)富(2021年33期)2021-05-10 11:56:08 猴頭菇的歷史文化溯源與食療文化*中國食用菌(2019年12期)2019-01-05 17:01:32 用反應(yīng)時(shí)間研究氛圍燈顏色亮度對安全駕駛的影響汽車零部件(2018年5期)2018-06-13 08:42:18 林下猴頭菇栽培技術(shù)及效益分析遼寧林業(yè)科技(2017年4期)2017-06-22 10:23:36 慢性支氣管哮喘小鼠肺組織中組蛋白H3乙?；揎椩鰪?qiáng)中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志(2016年4期)2016-02-27 11:15:53 三步泡發(fā)猴頭菇中老年健康(2015年9期)2015-05-30 23:22:10 組蛋白去乙?；敢种苿┑难芯窟M(jìn)展中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年16期)2015-03-01 02:03:13 視覺反應(yīng)時(shí)間和聽覺反應(yīng)時(shí)間的比較分析中國信息技術(shù)教育(2014年1期)2014-04-29 09:44:12 組蛋白去乙?；?與神經(jīng)變性疾病中國神經(jīng)精神疾病雜志(2013年1期)2013-03-11 20:23:32
徐 兵,王華麗,林曉穎,陳義勇
(常熟理工學(xué)院,生物與食品工程學(xué)院,江蘇常熟 215500)
猴頭菇(Hericiumerinaceus,HE)是一類罕有珍稀的藥用菌,其子實(shí)體外形象猴子的頭,味美可食,富含多種營養(yǎng)成分,并且還含有16種氨基酸,其中有8種為人體必需氨基酸,并且比例與人體需要的氨基酸相接近[1-2]。猴頭菇多糖(HEP)可以控制細(xì)胞分裂速度,調(diào)控細(xì)胞分裂,衰老程度,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),可以用作免疫促進(jìn)劑[3]。同時(shí),猴頭菇多糖還具有降低血糖血脂[4]、促進(jìn)胃的健康[5]、提高免疫力[6]等生理作用,用其制成的醫(yī)藥保健品及功能性食品深受消費(fèi)者喜愛,具有廣闊的市場前景[7]。
乙?；揎検翘穷愇镔|(zhì)的一種常見的修飾方法。目前,多糖的乙?；揎椀难芯恐饕性陟`芝多糖[8]、南瓜多糖[9]、青錢柳葉多糖[10]、松樹蕈多糖[11]等,對猴頭菇多糖的研究僅限于提取、純化方面[12-13],關(guān)于對其乙?；揎椀难芯窟€未見報(bào)道。為此,本文對猴頭菇多糖乙?；揎椷M(jìn)行研究探討。研究料液比(多糖與乙酸酐的比例,g/mL)、反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時(shí)間對多糖乙?；揎椀挠绊?。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面分析法對乙?；に囘M(jìn)行優(yōu)化,并探討乙?；镱^菇多糖的抗氧化活性,旨在為猴頭菇多糖在保健食品領(lǐng)域應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 材料與儀器
猴頭菇 東北黑龍江海成科技有限公司;乙酸酐、NaOH、濃鹽酸、無水乙醇、DPPH、水楊酸、NaNO2、雙氧水、硫酸亞鐵、硝酸鈉等 以上試劑均為國產(chǎn)分析純。
RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮儀器廠;HH-22型恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋 金壇杰瑞爾有限公司;HK-20B型 1000 g搖擺式高速粉碎機(jī) 廣州旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司;722型分光光度計(jì) 上海金華科技儀器有限公司);Z326K型離心機(jī) Hermle labor technik;DFS-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 鞏義予華儀器有限公司;DHG-P030A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海三發(fā)儀器有限公司;FE20 pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器上海有限公司;NICOLET 380傅立葉變換紅外光譜儀 美國Thermo公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 猴頭菇多糖的提取 將猴頭菇置入30 ℃鼓風(fēng)干燥箱干燥,粉碎,過40目篩。取50.0 g猴頭菇粉,按固液比1∶40 g/mL加入2 L蒸餾水,80 ℃水浴4 h得到猴頭菇的初提液,經(jīng)4500 r/min離心10 min,取上清液,經(jīng)Sevag法脫蛋白、過氧化氫脫色得到洗脫液,將洗脫液旋蒸至一定體積,以1∶4的比例加入無水乙醇進(jìn)行醇沉,靜置12 h,經(jīng)10000 r/min離心10 min,取沉淀,在40 ℃條件下恒溫鼓風(fēng)干燥24 h,取出后研磨成粉狀,過60目篩,即為HEP樣品,經(jīng)苯酚-硫酸法測定[14-15],以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo),OD490為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.2.2 猴頭菇多糖的乙?；?參照梁少茹等的研究[16],精確稱取HEP樣品0.5 g加入燒杯中,加入10 mL蒸餾水充分混勻,用0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.0,在恒溫下保持一定的時(shí)間,然后分別向HEP溶液中加入一定量的乙酸酐,并且用0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為8.0,恒溫反應(yīng)一定時(shí)間。待反應(yīng)完成后,用濃度為5 mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至7.0,待冷卻后將反應(yīng)液置于截留分子量為15000的透析袋中,流水透析48 h后將透析液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,用4倍95%乙醇醇沉24 h,沉淀經(jīng)冷凍干燥后即得到乙?；镱^菇多糖。
1.2.3 猴頭菇多糖乙酰化取代度的測定 根據(jù)劉瑩等[17]的研究,采用酸堿滴定法測定猴頭菇多糖乙?；〈?。準(zhǔn)確稱取10 mg乙酰化猴頭菇多糖放入100 mL燒杯中,用10 mL 0.01 mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解。以酚酞作為指示劑,用0.01 mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液反滴定至紅色消失,記錄加入鹽酸的體積。取代度(DS)按下式計(jì)算[18]:
式中:A為乙?；?%;V0為加入氫氧化鈉溶液的體積,mL;C0為氫氧化鈉溶液的濃度(0.01 mol/L);V1為消耗鹽酸溶液的體積,mL;C1為鹽酸溶液的濃度(0.01 mol/L);m為乙酰化猴頭菇多糖樣品質(zhì)量,g。
1.2.4 猴頭菇多糖乙酰化修飾的單因素實(shí)驗(yàn)
1.2.4.1 料液比對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?精確稱取0.1 g HEP,反應(yīng)時(shí)間35 ℃,保持反應(yīng)液 pH為8.0反應(yīng)時(shí)間3 h,分別考察料液比1∶20、1∶25、1∶30、1∶35和1∶40 g/mL對HEP乙酰化反應(yīng)的影響,確定適宜的料液比。
1.2.4.2 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙酰化修飾的影響 精確稱取0.1 g HEP,反應(yīng)溫度40 ℃,乙酸酐3.5 mL,保持反應(yīng)液 pH為8.0,分別考察反應(yīng)時(shí)間2、2.5、3、3.5 和4 h對HEP乙酰化反應(yīng)的影響,確定適宜的反應(yīng)時(shí)間。
1.2.4.3 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?精確稱取0.1 g HEP,乙酸酐3.5 mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,保持反應(yīng)液 pH為8.0,分別考察溫度25、30、35、40和45 ℃對HEP乙?；磻?yīng)的影響,確定適宜的反應(yīng)溫度。
1.2.5 猴頭菇多糖乙?；揎椆に嚄l件優(yōu)化 在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken 的中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,以取代度為指標(biāo),選取料液比(A)、反應(yīng)時(shí)間(B)和反應(yīng)溫度(C)三個(gè)主要因素進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化猴頭菇多糖乙?；揎椆に嚄l件,實(shí)驗(yàn)因素及水平設(shè)計(jì)見表1。
表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平Table 1 Level and code of independent variable used for response surface analysis
1.2.6 乙酰化猴頭菇多糖的紅外結(jié)構(gòu)表征 充分干燥的乙?；镱^菇多糖與KBr一起充分研磨,并取適量壓片,用紅外光譜儀在4000～400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外線光譜掃描,同時(shí)與修飾前猴頭菇多糖的紅外光譜圖進(jìn)行比較。
1.2.7 抗氧化活性測定
1.2.7.1 DPPH自由基清除率的測定 根據(jù)宋逍等[19]的研究,取不同濃度的(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)HEP樣品溶液2 mL,加入2 mL現(xiàn)配的DPPH-乙醇溶液(0.1 g/mL)2 mL,作為樣品管,混勻后常溫避光30 min,在517 nm波長處測定溶液OD值,記錄數(shù)據(jù)A1;用蒸餾水代替HEP溶液重復(fù)以上操作,在517 nm處測得吸光度值,記錄數(shù)據(jù)A0;用蒸餾水代替DPPH-乙醇溶液,重復(fù)上述操作,測得吸光度數(shù)據(jù)為B1。
DPPH自由基清除率公式為:
式中:A1為加入不同濃度HEP溶液的吸光度;A0為空白組的吸光度;B1為不同濃度HEP不加DPPH-乙醇溶液的吸光度。
1.2.7.2 羥基自由基清除率的測定 根據(jù)王之珺等[20]的研究,各取1.2.7.1中配制好的不同濃度的HEP樣品溶液1 mL,先后加入FeSO4(9 mmol/L)溶液1 mL,水楊酸-乙醇溶液(9 mmol/L)1 mL,H2O2溶液(9 mmol/L)1 mL,37 ℃水浴加熱,30 min 后,在波長為510 nm處測定OD值,記錄數(shù)據(jù)A1;用蒸餾水代替HEP溶液重復(fù)以上操作,在510 nm處測定OD值,記錄數(shù)據(jù)A0;用蒸餾水替代H2O2溶液重復(fù)上述操作,測得吸光度數(shù)據(jù)為B1。
羥基自由基清除率公式為:
式中:A1為加入不同濃度HEP溶液的吸光度;A0為空白組的吸光度;B1為不加H2O2溶液不同濃度HEP的吸光度。
式中:V1為加多糖樣品后清除超氧陰離子的速率;V0為鄰苯三酚自氧化速率。
1.3 數(shù)據(jù)處理
所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值,并以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Design Expert 8.0.5以及Microsoft Office Excel進(jìn)行處理分析。
2 結(jié)果與分析
2.1 猴頭菇多糖含量
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定多糖含量(圖1),獲得回歸方程:y=0.0050x+0.0155,R2=0. 9931。經(jīng)測定猴頭菇多糖含量為10.89%。
圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve
2.2 單因素對猴頭菇多糖乙?；揎椀挠绊?/h3>
2.2.1 料液比對猴頭菇多糖乙酰化取代度的影響 料液比對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖2。
圖2 料液比對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊慒ig.2 Effect of polysaccharides-to-acetic anhydrideratioon substitution degree of HEP
由圖2可知,隨著料液比的減少,HEP乙酰化取代度有一定程度增加,當(dāng)料液比為1∶35 (g/mL)時(shí),取代度達(dá)到最大值,乙?；Ч詈谩．?dāng)料液比進(jìn)一步減少,水解副反應(yīng)增加,反應(yīng)體系取代度反而下降,這主要是因?yàn)樯傻囊阴；嗵菍Ψ磻?yīng)起抑制作用導(dǎo)致,因此確定最適宜料液比為1∶35 (g/mL)。
2.2.2 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊?反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖3。
圖3 反應(yīng)時(shí)間對猴頭菇多糖乙酰化取代度的影響Fig.3 Effect of the reaction time on substitution degree of HEP
由圖3可知,反應(yīng)時(shí)間在1～3 h時(shí),乙酰取代度隨反應(yīng)時(shí)間的增加而增加;在3 h時(shí)取代度達(dá)到最大為0.593,此時(shí)乙酸酐與HEP完全反應(yīng),乙?；Ч詈?超過3 h時(shí),取代度下降,可能是由于反應(yīng)時(shí)間過長,部分乙?；嗵堑囊阴；坞x出來,使取代度降低[17],因此確定最適宜反應(yīng)時(shí)間為3 h。
2.2.3 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊?反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊懡Y(jié)果見圖4。
圖4 反應(yīng)溫度對猴頭菇多糖乙?；〈鹊挠绊慒ig.4 Effect of the reaction temperature on substitution degree of HEP
由圖4可知,反應(yīng)溫度在25～30 ℃時(shí),取代度遞增;30 ℃時(shí)取代度達(dá)到最大值;超過30 ℃時(shí),取代度隨溫度升高降低,原因是溫度升高使乙酸酐的水解速度加快,乙?；c多糖的結(jié)合力降低,導(dǎo)致取代度下降[18]。因此確定最適宜反應(yīng)溫度為30 ℃。
2.3 響應(yīng)面分析
2.3.1 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析 為了確定猴頭菇多糖乙酰化修飾的最優(yōu)工藝條件,利用3因素3水平響應(yīng)面分析法優(yōu)化猴頭菇多糖乙?；に噮?shù)。選取料液比、反應(yīng)時(shí)間和溫度三個(gè)考察因素,以乙?；〈菵S作為響應(yīng)值,進(jìn)行三因素三水平的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。用Design-expert軟件對17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的取代度進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,從中發(fā)現(xiàn)各影響因素對修飾的HEP取代度的影響,找到各因素作用的最優(yōu)區(qū)域,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。
表2 實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果分析Table 2 Design and results of tests
表3 方差分析表Table 3 Analysis of variance
通過對響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行分析研究,三個(gè)因素經(jīng)擬合,得到的多糖取代度的回歸方程為
Y=0.59-0.036A+0.000875B-0.011C-0.028AB+0.021AC+0.00675BC-0.11A2-0.11B2-0.087C2
由表3方差分析可以看出,模型p小于0.05,說明模型有意義。失擬項(xiàng)p值為0.0917>0.05,失擬項(xiàng)差異不顯著,表明干擾因素較小。相關(guān)系數(shù)R2=0.9047,表明超過90%的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可用該模型進(jìn)行解釋,說明該方程可靠性較高。影響HEP乙?；蛩氐闹鞔雾樞蛞来螢锳>C>B,即料液比>反應(yīng)溫度>反應(yīng)時(shí)間。
2.3.2 響應(yīng)面圖分析 通過響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到響應(yīng)面圖,更直觀地反映各因素交互作用對猴頭菇多糖乙?；〈扔绊懙膹?qiáng)弱關(guān)系。各因素交互作用影響的響應(yīng)面圖見圖5。
圖5 兩因素交互作用對取代度的影響Fig.5 Effects of cross-interaction of two factors on substitution degree of Ac-TMP
由圖5可知:料液比對乙?；〈鹊挠绊懽畲?表現(xiàn)為曲線最陡;溫度的影響次之,而圖中時(shí)間曲線最平滑,因此影響最不顯著。料液比和時(shí)間的交互作用最明顯,料液比和溫度的交互作用次之,時(shí)間和溫度的交互作用不太明顯,但都不顯著。
2.3.3 最佳條件的確定及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 利用Design-Expert 8.06軟件對工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,得到的最佳工藝條件為:料液比為1∶34.1 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3.01 h,溫度為29.59 ℃時(shí),猴頭菇多糖乙?；〈茸畲鬄?.612。考慮實(shí)際操作,調(diào)整工藝參數(shù)料液比為1∶34 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,反應(yīng)溫度30 ℃,在此條件下測得猴頭菇多糖乙酰化的取代度為0.609,與預(yù)測值十分接近,表明該實(shí)驗(yàn)的最佳優(yōu)化條件合理可行。
2.4 紅外結(jié)構(gòu)表征分析
乙?；揎椙昂蠛镱^菇多糖紅外光譜見圖6和圖7。
圖6 HEP的紅外光譜Fig.6 Infrared spectra of HEP
圖7 A-HEP的紅外光譜Fig.7 Infrared spectra of A-HEP
由圖6和圖7可見修飾前后的猴頭菇多糖均具有多糖類物質(zhì)紅外的特征吸收峰:如圖6,在1401.58 cm-1顯現(xiàn)了多糖物質(zhì)的特征吸收,表明該物質(zhì)即為猴頭菇多糖。同樣,如圖7所示,乙?；镱^菇多糖在1640.28 cm-1出現(xiàn)了一個(gè)吸收峰,為酯基C=O雙鍵的伸縮振動(dòng),在1398.14 cm-1處有C-O單鍵的伸縮振動(dòng),說明乙?；a(chǎn)物中成功引入了乙?；?。
2.5 抗氧化活性檢測
2.5.1 DPPH自由基清除能力 修飾前后猴頭菇多糖對DPPH·的清除作用見圖8。
圖8 HEP和A-HEP對DPPH·的清除作用Fig.8 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on DPPH free radicals
由圖8可知,HEP和A-HEP在多糖濃度0.2～0.6 mg/mL范圍內(nèi),清除率隨多糖濃度增加而明顯提高,而當(dāng)多糖濃度大于0.6 mg/mL的時(shí)候,A-HEP對DPPH·的清除有明顯變緩的趨勢。HEP的最大清除率為18.7%,A-HEP最大清除率為22.8%,乙酰化后的HEP對DPPH·的清除能力略有增強(qiáng)。
2.5.2 羥基自由基清除能力 修飾前后猴頭菇多糖羥基自由基清除能力結(jié)果見圖9。
圖9 HEP和A-HEP對·OH的清除作用Fig.9 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on hydroxyl free radicals
由圖9可知,在所選多糖濃度范圍內(nèi)HEP和A-HEP對·OH的清除作用均隨濃度升高而增強(qiáng),與HEP相比A-HEP對·OH的清除能力顯著增強(qiáng),A-HEP的清除率最大為42.8%,而HEP清除率最大為23.7%,表明了對HEP進(jìn)行乙?；揎椖芴岣咂鋵ΑH的清除能力。
2.5.3 清除超氧陰離子能力 修飾前后猴頭菇多糖對超氧陰離子清除能力的影響結(jié)果見圖10。
圖10 HEP和A-HEP對超氧陰離子清除作用Fig.10 Scavenging capacity of HEP and A-HEP on superoxide anion free radicals
由圖10可知,不同濃度下的A-HEP對超氧陰離子的清除作用都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于相同多糖濃度下HEP的清除作用,HEP的最大清除率為17.2%,A-HEP的最大清除率為30.2%,表明對HEP進(jìn)行乙酰化修飾能提高超氧陰離子的清除作用。
對修飾前后猴頭菇多糖抗氧化活性研究表明:猴頭菇多糖經(jīng)過乙?；揎椇罂寡趸钚杂辛嗣黠@增強(qiáng),可能是因?yàn)楹镱^菇多糖經(jīng)乙?；揎椇?其空間構(gòu)象發(fā)生變化,使其更易于提供羥基,從而有利于捕捉自由基,提高抗氧化活性。
3 結(jié)論
本文以猴頭菇為原料,采用傳統(tǒng)水提法提取猴頭菇多糖,采用乙酸酐法對HEP進(jìn)行乙?；揎?以乙?；〈葹橹笜?biāo),通過響應(yīng)面分析對HEP乙?；揎椆に噮?shù)進(jìn)行優(yōu)化,并比較修飾前后HEP的抗氧化活性。確定了猴頭菇多糖乙?；揎椀淖罴压に嚄l件為:料液比1∶34 g/mL,反應(yīng)時(shí)間3 h,反應(yīng)溫度30 ℃,在最佳修飾工藝條件下,猴頭菇多糖乙?；娜〈葹?.609。利用該方法對多糖進(jìn)行乙酰化修飾,具有反應(yīng)可操作性強(qiáng)、試劑便宜易得、多糖的乙?；〈容^高的優(yōu)點(diǎn),是一種較理想的能夠有效提高猴頭菇多糖抗氧化活性的一種修飾方法。
抗氧化性研究表明:HEP和A-HEP對DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基均有一定的清除作用,且清除率隨多糖濃度增加而增大。與HEP相比,A-HEP抗氧化活性明顯增強(qiáng)。本研究表明乙?；揎椏梢蕴岣吆镱^菇多糖的抗氧化活性,可用于猴頭菇多糖的結(jié)構(gòu)改性,為其構(gòu)效關(guān)系研究提供新的方向和思路。
[1]黃年來. 中國食用菌百科[M]. 北京:農(nóng)業(yè)出版社,1997.
[2]樊偉偉,黃惠華. 猴頭菇多糖研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2008,29(1):355-358.
[3]Yang B K,Park J B,Song C H. Hypolipidemic effect of an exo-biopolymer produced from a submerged mycelial culture ofhericiumerinaceus[J]. Bioscience Biotechnology & Biochemistry,2003,67(6):1292-1298.
[4]Kim D M,Pyun C W,Ko H G,et al. Isolation of antimicrobial substances fromhericiumerinaceum[J]. Mycobiology,2000,28(1):33-38.
[5]黃萍,羅珍,郭重儀,等. 猴頭菇多糖胃黏膜保護(hù)作用研究[J]. 中藥材,2011,34(10):1588-1590.
[6]羅珍,黃萍,郭重儀,等. 猴頭菇多糖增強(qiáng)免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(4):182-183.
[7]皇甫永冠,閆寶松,宗憲春. 猴頭菇的營養(yǎng)功效及在食品加工中的應(yīng)用[J]. 食用菌,2016,38(2):7-8.
[8]Chen Y,Zhang H,Wang Y,et al. Acetylation and carboxymethylation of the polysaccharide from ganoderma atrum,and their antioxidant and immunomodulating activities[J]. Food Chemistry,2014,156(3):279-288.
[9]Song Y,Yang Y,Zhang Y,et al. Effect of acetylation on antioxidant and cytoprotective activity of polysaccharides isolated from pumpkin(Cucurbita pepo,lady godiva)[J]. Carbohydrate Polymers,2013,98(1):686-91.
[10]Xie J H,Zhang F,Wang Z J,et al. Preparation,characterization and antioxidant activities of acetylated polysaccharides fromCyclocaryapaliurusleaves[J]. Carbohydrate Polymers,2015,133:596-604.
[11]徐田甜,陳義勇. 松樹蕈多糖乙?；揎椆に嚰捌淇寡趸钚訹J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2017(4):164-170.
[12]張樹海. 猴頭菇多糖提取及純化的研究[J]. 食品研究與開發(fā),2006,27(11):103-106.
[13]韓偉,豆欣欣. 猴頭菇多糖的提取純化工藝及抗氧化活性研究[J]. 徐州工程學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2016,31(3):22-28.
[14]韓偉,劉瑞麗,張曉堅(jiān). 猴頭菇多糖純化及活性研究[J]. 安徽醫(yī)藥,2008,12(9):793-794.
[15]和法濤,劉光鵬,朱風(fēng)濤,等. 響應(yīng)面法優(yōu)化熱水法浸提猴頭菇多糖工藝提高多糖得率[J]. 食品科技,2015(1):210-215.
[16]梁少茹,肖霄,肖斌. 綠茶多糖的乙酰化修飾及其清除自由基、NO2-活性的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(11):84-87,99.
[17]劉瑩,趙杰,許琳. 乙?；揎椊疳樄蕉嗵茄苌锏目寡趸匝芯縖J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2014,40(7):88-91.
[18]王晶,張全斌,張忠山,等. 乙?；Ш衷宥嗵橇蛩狨サ闹苽浼捌淇寡趸钚匝芯縖J]. 中國海洋藥物,2008,27(1):50-54.
[19]宋逍,張麗華,趙鵬,等. 響應(yīng)面法優(yōu)選款冬花多糖的乙?；に囇芯縖J]. 中成藥,2013,35(9):2030-2033.
[20]王之珺,張柳婧,鐘瑩霞,等. 青錢柳多糖的乙酰化修飾及抗氧化活性[J]. 食品科學(xué),2015,36(21):6-9.
[21]楊春瑜,楊春莉,劉海玲,等. 乙?；谀径嗵堑闹苽浼捌淇寡趸钚匝芯縖J]. 食品工業(yè)科技,2015,36(23):105-110.
猜你喜歡
中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)(2022年8期)2022-09-08 00:39:50
科學(xué)與財(cái)富(2021年33期)2021-05-10 11:56:08
中國食用菌(2019年12期)2019-01-05 17:01:32
汽車零部件(2018年5期)2018-06-13 08:42:18
遼寧林業(yè)科技(2017年4期)2017-06-22 10:23:36
中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志(2016年4期)2016-02-27 11:15:53
中老年健康(2015年9期)2015-05-30 23:22:10
中國當(dāng)代醫(yī)藥(2015年16期)2015-03-01 02:03:13
中國信息技術(shù)教育(2014年1期)2014-04-29 09:44:12
中國神經(jīng)精神疾病雜志(2013年1期)2013-03-11 20:23:32
