HIV抗體ELISA和膠體硒聯(lián)合檢測與免疫印跡試驗(yàn)的結(jié)果對比分析

楊育紅，陳杰毅，占凌云

(泉州市疾病預(yù)防控制中心，福建 泉州 362000)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （Enzyme Linked Immunosorben Assay，ELISA)和快速檢測試驗(yàn)(rapid testing，RT)是艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）抗體篩查常用的方法，免疫印跡試驗(yàn)（Western blotting，WB）是HIV抗體確證通常采用的方法。篩查試劑和確證試劑各有其優(yōu)缺點(diǎn)，篩查目的是盡可能發(fā)現(xiàn)感染者，為避免漏檢，篩查試劑往往具備較高的敏感性，但特異性會(huì)相應(yīng)降低，有一定假陽性率；而確證目的是保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，確證試劑需要具備較高的特異性，敏感性必然受影響，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。本文對3258例HIV抗體ELISA和膠體硒（快速檢測方法）聯(lián)合復(fù)檢陽性樣品與免疫印跡試驗(yàn)的檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析，以了解不同的檢測方法和檢測試劑之間的相關(guān)性，有助于實(shí)際工作中對檢測結(jié)果的分析判斷，提高診斷效率和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 材料和方法

1.1對象來源 本實(shí)驗(yàn)室收到的各篩查實(shí)驗(yàn)室2011年1月-2016年10月送檢的HIV抗體篩查陽性樣品，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和膠體硒快速試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)核檢測陽性的3258例樣品。

1.2 試劑 ELISA用北京萬泰生產(chǎn)的第四代人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒，快速檢測用美國雅培生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒 （HIV）1+2型抗體診斷試劑盒（膠體硒法）；確認(rèn)試劑用新加坡Genelab Diagnostics生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗體檢測試劑盒（免疫印跡法），所有試劑均在國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊，在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.3 方法 3258例復(fù)核陽性的樣品進(jìn)入WB確證實(shí)驗(yàn)流程，檢測原則和確認(rèn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)2016年之前按照 “全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范”（2009年修訂版）[1]的標(biāo)準(zhǔn)，2016年則按照“全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范”（2015年修訂版）[2]的標(biāo)準(zhǔn)，對比不同的檢測結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)。

2 結(jié)果

2.1 ELISA和膠體硒與WB的結(jié)果比較 3258例復(fù)檢陽性樣品，ELISA陽性3159例，WB確證陽性2862例，陽性符合率90.6%（2862/3159），不確定5.4%（171/3159），陰性 4.0%（125/3159）。其中 S/CO（樣品的A值/CUTOFF）＞6的2927例，WB確證陽性、不確定、陰性比率分別為96.4%(2822/2927)、2.8(81/2927)%、0.8%(24/2927)；1≤S/CO≤6的 232例，WB確證陽性、不確定、陰性比率分別為17.2%(40/232)、38.8%(90/232)、44.0%(102/232)。膠體硒陽性3058例，確證陽性2862例，陽性符合率93.6%（2862/3058）， 不確定 116例 (3.8%)， 陰性 80例(2.6%)。

2.2 ELISA和膠體硒雙陽樣品與WB的比較 見表1，ELISA和膠體硒雙陽樣品2959例，經(jīng)WB確證，HIV抗體陽性2862例，陽性符合率96.7%（2862/2959）， 不確定 2.7%（80/2959）， 陰性 0.6%（17/2959）。

其中ELISA的S/CO＞6有2887例，確證陽性2822例，陽性符合率97.7%（2822/2887），不確定2.0%（57/2887），陰性 0.3%(8/2887)。1≤S/CO≤6 樣品有72例，確證陽性40例，陽性符合率55.6%（40/72），不確定 31.9%(23/72)，陰性 12.5%(9/72)。

2.3 ELISA或膠體硒單陽樣品的確證結(jié)果 ELISA或膠體硒單陽的樣品有299例，經(jīng)WB確證，未出現(xiàn)HIV抗體陽性，陽性符合率0，不確定42.5%（127/299），陰性 57.5%(172/299)，單陽樣品不確定和陰性的概率相差不大，陰性概率相對較高。

其中ELISA陽性快速陰性200例，WB確證后不確定45.5%（91/200），陰性 109例，陰性符合率54.5%（109/200），多數(shù)樣品ELISA的S/CO值在1～6之間。ELISA陰性快速陽性99例，WB確證后不確定36.4%（36/99），陰性63例，陰性符合率63.6%（63/99）。快速單陽樣品出現(xiàn)陰性的概率更高。

2.4 WB不確定結(jié)果的帶型特征 207例不確定樣品共有9種不同帶型，見表2，ELISA和快速雙陽性樣品不確定80例，帶型以gp160 p24為主，占50.0%（40/80）， 其次是 gp160、gp160 p24 p17 和p24，分別占13.8%、12.5%和12.5%；ELISA和快速單陽性樣品不確定127例，帶型以p24為主，占74.8%（95/127）， 其次是 gp160，p17 分別占 10.2%（13/127），6.3%（8/127）。結(jié)果顯示 ELISA 和快速雙陽和單陽樣品出現(xiàn)不確定時(shí)的條帶特征有所不同，雙陽樣品多出現(xiàn)env帶，特別是ELISA的S/CO＞6的樣品，單陽樣品則以gag帶為主。

3 討論

目前常用的HIV抗體檢測策略是HIV抗體篩查+確證試驗(yàn)，篩查試驗(yàn)中ELISA和快速檢測因經(jīng)濟(jì)、快速、靈敏、簡便，在實(shí)際工作中應(yīng)用較為廣泛，是基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)普遍采用的方法。隨著近年來HIV檢測試劑不斷更新?lián)Q代，試劑的敏感性和特異性也在不斷提高，現(xiàn)在ELISA試劑已發(fā)展到第4代，增加了P24抗原，進(jìn)一步提高了試劑的敏感性，但也存在一定程度的假陽性[3]，快速試劑則比較穩(wěn)定，操作簡單快捷，特異性較高，缺點(diǎn)是靈敏度低于ELISA試劑，可能存在陽性樣品的漏檢，特別是弱陽性反應(yīng)樣品。兩種試劑的聯(lián)合檢測，可以彌補(bǔ)以上不足，提高樣品復(fù)檢和確證的準(zhǔn)確性[4]。

本次研究從篩查結(jié)果分析，①ELISA的S/CO＞6的樣品與WB陽性符合率96.4%，1≤S/CO≤6的樣品為17.2%，說明S/CO值越高，與WB確證試驗(yàn)的陽性符合率也越高[5]。有報(bào)道在對早期感染的研究發(fā)現(xiàn)，WB不確定或陰性樣品篩查時(shí)ELISA的S/CO＞6的樣品中核酸檢測陽性的概率較大[6]，雖然高S/CO值并非說明已感染HIV，但這類樣品應(yīng)當(dāng)引起高度重視。②ELISA和快速雙陽樣品WB確證陰性有17例，這些WB陰性樣品ELISA的S/CO值大于6的樣品有8例，其中6例再次檢測時(shí)為陽性，說明WB試劑存在假陰性結(jié)果，會(huì)出現(xiàn)漏檢，對于ELISA和快速雙陽樣品中ELISA的S/CO值大于6的樣品應(yīng)引起重視，即使WB結(jié)果陰性在檢測后咨詢也要慎重，結(jié)合流行病學(xué)史建議隨防并縮短隨防時(shí)間或推薦進(jìn)行核酸檢測。③WB確證陽性的樣品ELISA和膠體硒均陽性，ELISA或膠體硒單陽樣品經(jīng)確證未出現(xiàn)WB陽性，與湯琰等人的結(jié)果[7]，有報(bào)道復(fù)檢一陰一陽樣品多為非特異反應(yīng)[8]，但也不排除存在少部分早期或晚期樣品，只是WB確證出現(xiàn)的條帶較少，不足于判定為陽性。

表1 HIV抗體ELISA和膠體硒聯(lián)合檢測與免疫印跡試驗(yàn)的結(jié)果比較

表2 87份不確定樣品的帶型特征

不確定結(jié)果是WB的常見現(xiàn)象，不同條帶類型的不確定結(jié)果預(yù)示HIV感染的意義也不同，env類不確定預(yù)示HIV感染的意義比較大，gag類不確定基本上都是非特異反應(yīng)[9]。如果不確定帶型包含兩條env帶或包含一條env帶和p24帶的3條或以上條帶，則真陽性的可能性很大[10]，從本次不確定條帶類型分析，雙陽樣品多出現(xiàn)env帶，且以2條或2條以上條帶為主，提示這類樣品陽性可能性很大，隨防結(jié)果也證實(shí)這一點(diǎn)，80例不確定樣品32例有隨防記錄，31例為陽性。單陽樣品則多以單一條帶p24、gp160、P17為主，這類帶型據(jù)報(bào)道絕大多數(shù)是陰性[10]。

綜上所述，ELISA和膠體硒的聯(lián)合檢測結(jié)果，ELISA的S/CO值大小以及WB條帶類型有助于HIV感染的診斷和感染風(fēng)險(xiǎn)的評估。雙陽樣品特別是ELISA的S/CO大于6的，不管WB結(jié)果是不確定或陰性，均應(yīng)重點(diǎn)追蹤。單陽樣品考慮到檢測成本和檢測流程的簡化，建議結(jié)合流行病學(xué)資料判斷是否進(jìn)行確證，有高危行為的進(jìn)行隨訪或核酸檢測，無高危行為的進(jìn)行確證。

[1]中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范[S].2009年修訂版.

[2]中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范[S].2015年修訂版.

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