犬鉤端螺旋體感染診治病例

王雅麗， 王 亨， 崔璐瑩， 孟 霞， 李建基

(1.揚州大學獸醫(yī)學院， 江蘇 揚州 225009 ；2.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚州 225009 )

鉤端螺旋體病(Leptospirosis)是由一類致病性問號鉤端螺旋體引起的一種人獸共患病，在溫熱、潮濕的環(huán)境下發(fā)病率較高。 其臨床表現(xiàn)差異較大，有肝炎、心肌炎、腎衰竭等。 2017 年9 月?lián)P州大學動物醫(yī)院接診1 只雄性泰迪犬，通過臨床檢查和分子生物學診斷，最終確診為鉤端螺旋體感染。 經(jīng)3 周治療后，該犬康復，為臨床診療提供資料，總結(jié)如下。

1 發(fā)病情況

2017 年9 月22 日，揚州大學動物醫(yī)院接診1只雄性泰迪犬，年齡1.5 歲，體重3.5 kg。 臨床檢查發(fā)現(xiàn)：該犬體溫39.4 ℃，呼吸及脈搏正常，精神沉郁，小便帶血，呈深茶色，大便正常。

2 實驗室檢驗及診斷

2.1 血常規(guī)檢查 采取犬前肢頭靜脈外周血進行血常規(guī)檢查，結(jié)果可見白細胞總數(shù)、嗜中性粒細胞數(shù)及其百分比升高，淋巴細胞百分比降低；平均血紅蛋白量升高(見表1)。

2.2 血液生化檢查 結(jié)果顯示：谷草轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶顯著升高；谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰氨轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素、間接膽紅素和總蛋白等不同程度升高(見表2)。

2.3 尿常規(guī)檢查 通過導尿采集病犬的尿液，進行尿常規(guī)檢查，結(jié)果顯示，尿液pH 值升高、其中白細胞、紅細胞、酮體、膽紅素、尿膽原及蛋白質(zhì)均為陽性(見表3)。

2.4 尿沉渣檢查 尿液內(nèi)有少量紅細胞、鳥糞石結(jié)晶及大量革蘭陽性細菌。

表1 犬血常規(guī)檢查結(jié)果

表2 犬血液生化檢驗結(jié)果

2.5 分子生物學診斷

2.5.1 引物設計與合成 根據(jù)參考文獻[2]報道的引物序列，設計擴增問號鉤端螺旋體LigB 基因的特異性引物，送至南京擎科技術有限公司合成，目的條帶大小為124 bp。

表3 犬尿常規(guī)檢查結(jié)果

上游引物：5′-CTTGGGATTCTTCTAATMCSGATA-3′；

下游引物：5′-GATCCTTGTATTCCACCGATG-3′。

2.5.2 DNA 提取 采用北京全式金生物技術有限公司的EasyPure Genomic DNA Kit 試劑盒，取患犬尿液及疫苗，提取鉤端螺旋體DNA，再進行PCR 反應。

2.5.3 PCR 反應 反應體系：2 ×EasyTaq PCR Super Mix 12.5 μL，上下游引物各1 μL，DNA 模板2 μL，補ddH2O 至25 μL。

反應條件：94 ℃預變性3 min，94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共30 個循環(huán)，最后延伸72 ℃5 min。

2.5.4 PCR 電泳結(jié)果 使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳，結(jié)果顯示，病犬尿液提取物電泳后出現(xiàn)目的條帶，與陽性對照條帶符合，且陰性對照無條帶，PCR 產(chǎn)物送至南京擎科技術有限公司測序，測序結(jié)果與GenBank 數(shù)據(jù)庫基因序列進行比對，與問號鉤端螺旋體已公布的基因型同源性高達99%。 判定該犬為問號鉤端螺旋體陽性(見圖1)。

圖1 鉤端螺旋體PCR 檢測結(jié)果

3 診斷結(jié)果

經(jīng)過臨床檢查及分子生物學診斷，該犬確診為鉤端螺旋體感染繼發(fā)細菌感染。

4 治療

對因治療，靜脈注射青霉素及口服多西環(huán)素，連用2 周。 對癥治療，根據(jù)病犬出現(xiàn)的不同癥狀，對癥治療。

5 轉(zhuǎn)歸

經(jīng)過治療，分別在第8 天、第20 天進行血常規(guī)和生化檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：白細胞和嗜中性粒細胞數(shù)量下降至正常，谷氨酰氨轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素及直接膽紅素等指標逐漸恢復正常，飲食恢復，精神狀態(tài)無異常。

6 討論

鉤端螺旋體病廣泛傳播于世界各地，主要感染哺乳動物，包括人、家畜及犬等，許多野生動物是鉤端螺旋體的攜帶者與傳播者。 研究表明，犬是將鉤端螺旋體傳播給人的重要來源[2]。 患犬通過皮膚黏膜傷口感染或由接觸病原攜帶者尿液或被尿液污染的水或土壤而感染。 鉤端螺旋體進入體內(nèi)后，可在腎臟中長期生長增殖，并通過尿液向環(huán)境中排出病原。 根據(jù)調(diào)查，發(fā)病犬多為1 歲以上，經(jīng)常在室外活動的犬，雄犬發(fā)病率高于雌犬，且未去勢的犬發(fā)病率較高[3-4]，但也有調(diào)查顯示，患病雌犬多于雄犬[2]。

該病在犬上常表現(xiàn)為肝臟、腎臟的慢性或急性炎癥，甚至功能衰竭，也可以表現(xiàn)為特發(fā)性多尿、多飲的慢性攜帶狀態(tài)[5-7]。 常見臨床癥狀為嘔吐、腹瀉、發(fā)熱、黃疸、氮質(zhì)血癥等。 本次確診的病例與上述癥狀相符合，生化檢查結(jié)果總膽紅素與直接膽紅素均升高，表明其出現(xiàn)肝細胞性黃疸，同時谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷丙轉(zhuǎn)氨酶也有所升高，即肝功能受到影響。 而該犬腎臟生化指標未見異常，這可能與疾病的發(fā)現(xiàn)及時有關。 而尿液中的紅細胞及白細胞陽性可能主要是由于細菌感染導致。

目前，對于鉤端螺旋體病常見的診斷方法有顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)、顯微凝集測試(MAT)、動物接種試驗及PCR 方法等。 相較于其他方法、PCR 法更加快捷，且準確性更佳，因此可采用此方法作為該病的主要診斷途徑。

有研究表明，青霉素和多西環(huán)素對鉤端螺旋體病治療效果較好，多西環(huán)素還可作為在易感情況下的短期預防藥物[6]。 本次治療在使用青霉素和多西環(huán)素等抗生素的同時，還使用保肝護腎等藥物對癥治療。 連續(xù)用藥1 周后，癥狀開始減輕，精神也逐漸好轉(zhuǎn)，3 周后恢復正常。

鉤端螺旋體病是重要的人獸共患病，因此，應對寵物鉤端螺旋體病加以重視，防止寵物和人之間的互相傳染。