高鹽飲食對(duì)健康人和高血壓患者血漿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C水平的影響及其與血壓的相關(guān)性研究

鞠文浩，劉金波，趙紅薇，周迎燕，王宏宇

人體的鈉鹽總量和細(xì)胞外液容量關(guān)系密切，鈉鹽儲(chǔ)存在體液里，鈉鹽的量主要受飲食攝入和腎臟排泄的影響。腎排鈉的特點(diǎn)：多攝多排，少攝少排。因此細(xì)胞外液的滲透壓是穩(wěn)定的，過(guò)多的組織間液的鈉鹽流入血液，通過(guò)腎臟清除[1]。但是最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，存在無(wú)水儲(chǔ)存的鈉鹽。在組織間液內(nèi)，鈉鹽通過(guò)結(jié)合陰離子的蛋白聚糖和糖胺聚糖，儲(chǔ)存在皮下的組織間質(zhì)腔室內(nèi)，這部分鈉鹽不需要等體積的水[2,3]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這部分鈉鹽造成的滲透壓力，使巨噬細(xì)胞聚集，促進(jìn)其分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C（VEGF-C），VEGF-C 進(jìn)一步促進(jìn)血管新生和內(nèi)皮型一氧化氮（eNOS）的表達(dá)增加，部分緩解血壓升高。如果抑制巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生這條信號(hào)通路，高鹽飲食就會(huì)導(dǎo)致血壓升高[4-7]。另有研究發(fā)現(xiàn)，頑固性高血壓患者血漿中VEGF-C水平也升高[8]。這些發(fā)現(xiàn)都提示，在人的鈉鹽代謝中也存在一種腎外調(diào)節(jié)機(jī)制，即巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生信號(hào)通路，它可能通過(guò)調(diào)控鈉鹽，進(jìn)一步調(diào)控血壓[9-11]。因此，血漿中VEGF-C水平和高鹽飲食可能存在相關(guān)性，高鹽飲食會(huì)使血漿中VEGF-C水平升高。本研究在原發(fā)性高血壓患者中進(jìn)一步探討血漿VEGF-C水平與血壓的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

北京大學(xué)首鋼醫(yī)院血管醫(yī)學(xué)中2013-2014年度住院的原發(fā)性高血壓患者 75例（高血壓組）和同期體檢健康者98例（對(duì)照組）。按照《中國(guó)高血壓防治指南2010》定義，收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mmHg；既往有高血壓病史，2周內(nèi)服用降壓藥物，體檢時(shí)血壓＜140/90 mmHg，也診斷為高血壓。排除冠心病、糖尿病、腦梗死、心力衰竭、肝腎功能異常、全身炎癥反應(yīng)、感染性疾病、癌癥患者。

1.2 研究方法

血壓的測(cè)定和平均動(dòng)脈壓的計(jì)算方法：按照國(guó)際通用的測(cè)量方法和質(zhì)量控制規(guī)范進(jìn)行，使用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的水銀血壓計(jì)，在安靜狀態(tài)下測(cè)量。連續(xù)測(cè)量?jī)纱危看伍g隔2 min，取兩次結(jié)果的平均值。平均動(dòng)脈壓=舒張壓+1/3脈壓。

食鹽攝入量評(píng)估方法：通過(guò)量化食物頻率法（SALTFFQ）獲得。調(diào)查對(duì)象計(jì)算得出的食鹽攝入量包括在家烹飪食物和在外就餐的食用鹽兩部分的總和[12]。

頸-股脈搏波傳導(dǎo)速度（CF-PWV）的測(cè)定：應(yīng)用動(dòng)脈硬化檢測(cè)儀器Compliar SP（r），受檢者采取平臥位，壓力探頭分別置于頸動(dòng)脈及股動(dòng)脈搏動(dòng)點(diǎn)，取得最佳波形，并檢測(cè)兩點(diǎn)間的距離，儀器自動(dòng)計(jì)算CF-PWV。

實(shí)驗(yàn)室檢查：取空腹靜脈血，用EDTA抗凝，應(yīng)用自動(dòng)分析儀（HITACHI-7170）檢測(cè)空腹血糖（FBG）、血肌酐（CCr）、血尿酸（UA）、血總膽固醇 （TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

血漿VEGF-C的測(cè)定：（1）試劑盒和儀器：VEGF-C（ELISA）試劑盒（購(gòu)自美國(guó)R&D公司），測(cè)量吸光度的酶標(biāo)儀為550型（美國(guó)BIO-RAD公司）。（2）檢測(cè)方法：-80℃凍存樣品復(fù)溫。以試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每批檢測(cè)設(shè)空白、陰性對(duì)照各 2 孔。嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。在酶標(biāo)分析儀上 450 nm 處讀取吸光度值，每孔測(cè)定3次，取均值。結(jié)果計(jì)算：參照試劑盒操作步驟與方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求濃度與吸光度的回歸方程，依標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程確定各樣品 VEGF-C 含量。（3）血漿VEGF-C水平的正常參考值范圍:109.0～7 000.0 pg/ml。

一般病史的采集：收集受試者的一般資料如年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、收縮壓、舒張壓、脈壓、平均動(dòng)脈壓、心率、血管相關(guān)的病史（冠心病、腦梗死、糖尿病、高脂血癥、下肢動(dòng)脈疾病） 等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。兩組間性別構(gòu)成比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，P＜0.05（雙側(cè)）認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組受試者的基本臨床資料比較（表1）：高血壓組與對(duì)照組相比，血漿VEGF-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（3 940.8±1 141.1）pg/ml vs （2 938.0±987.0）pg/ml，P＜0.001],同時(shí)兩組在年齡、BMI、收縮壓、舒張壓、脈壓、平均動(dòng)脈壓、CFPWV上的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

表1 兩組受試者的基本臨床資料比較（±s）

表1 兩組受試者的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動(dòng)脈脈搏傳導(dǎo)速度；VEGF-C：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。1 mmHg=0.133 kPa

年齡 (歲) 57.0±8.0 60.4±9.4 0.013 CF-PWV (m/s) 9.6±1.5 10.7±1.9 ＜0.001

高血壓組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（表2）：高血壓組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組相比，血漿VEGF-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（4 208.8±113.1）pg/ml vs （3 515.8±1 070.1）pg/ml，P=0.009]，同時(shí)兩亞組在年齡、收縮壓、舒張壓、脈壓上的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

表2 高血壓組患者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

表2 高血壓組患者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動(dòng)脈脈搏傳導(dǎo)速度；VEGF-C：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。1 mmHg=0.133 kPa

項(xiàng)目 低鹽飲食亞組(n=29)高鹽飲食亞組(n=46) P值年齡 (歲) 63.9±9.3 58.1±8.8 0.009性別 (男/女，例) 9/20 21/25 0.208體重指數(shù) (kg/m2) 24.8±3.1 26.0±3.0 0.089空腹血糖 (mmol/L) 5.3±0.6 5.2±0.5 0.686 TC (mmol/L) 4.7±1.5 4.9±1.1 0.575 HDL-C (mmol/L) 1.2±0.2 1.2±0.3 0.894 LDL-C (mmol/L) 3.1±1.0 3.1±0.7 0.994 TG (mmol/L) 1.7±0.9 1.7±1.3 0.768肌酐清除率 (ml/min) 89.9±21.7 101.7±31.5 0.080血尿酸 (μmol/L) 291.6±57.2 311.3±83.0 0.265血鈉離子 (mmol/L) 141.0±2.4 140.9±2.8 0.838血鉀離子 (mmol/L) 4.0±0.4 4.1±0.4 0.409血氯離子 (mmol/L) 104.8±3.0 104.5±3.0 0.680收縮壓 (mmHg) 134.6±13.3 146.8±12.6 ＜0.001舒張壓 (mmHg) 81.2±8.2 89.7±7.9 ＜0.001脈壓 (mmHg) 53.4±11.0 57.1±12.5 ＜0.001平均動(dòng)脈壓 (mmHg) 99.0±8.8 108.7±7.7 0.195心率 (次/min) 67.1±8.6 65.1±10.5 0.388 CF-PWV (m/s) 10.6±1.3 10.7±2.3 0.972 VEGF-C (pg/ml) 3 515.8±1 070.1 4 208.8±113.1 0.009

對(duì)照組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（表3）：對(duì)照組中高鹽飲食亞組血漿VEGF-C水平高于低鹽飲食亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（3 158.7±917.2）pg/ml vs （2 655.7±1 011.3）pg/ml，P=0.012]，兩亞組在年齡、BMI、CCr的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

平均動(dòng)脈壓與血漿VEGF-C水平的相關(guān)性分析（表4）：Spearman相關(guān)分析顯示，在所有入組受試者中，平均動(dòng)脈壓與 BMI（r=0.290，P＜0.001）、LDL-C（r=0.122，P=0.018）、TG（r=0.230，P=0.002）、VEGF-C（r=0.209，P＜0.001）、CFPWV（r=0.106，P＜0.001）、鈉鹽攝入量（r=0.274，P＜0.001）呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)(r=-1.777，P=0.020)。 進(jìn) 一 步 校 正 BMI、LDL-C、TG、CF-PWV、 鈉 鹽攝入量后，平均動(dòng)脈壓仍與VEGF-C呈 正 相 關(guān) (r=0.536，P＜0.001)。在高血壓組中，平均動(dòng)脈壓與CCr （r=0.236，P=0.041）、鈉鹽攝入量（r=0.534，P＜0.001）、VEGF-C（r=0.617，P＜0.001）呈正相關(guān)；進(jìn)一步校正CCr、鈉鹽攝入量后，平均動(dòng)脈壓仍與VEGF-C呈正相關(guān)（r=0.546，P=0.002）。在對(duì)照組中，平均動(dòng)脈壓與BMI（r=0.227，P=0.025）、FBG（r=0.212，P＜0.037）、TG（r=0.221，P=0.030）、UA（r=0.201，P=0.048）、VEGF-C（r=0.379，P＜0.001）、CF-PWV（r=0.517，P＜0.001）呈正相關(guān)；進(jìn)一步校正BMI、FBG、TG、UA、CF-PWV后，平均動(dòng)脈壓仍與VEGF-C呈正相關(guān)（r=0.291，P=0.006）。

表3 對(duì)照組受試者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

表3 對(duì)照組受試者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動(dòng)脈脈搏傳導(dǎo)速度；VEGF-C：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。1 mmHg=0.133 kPa

項(xiàng)目 低鹽飲食亞組(n=43)高鹽飲食亞組(n=55) P值年齡 (歲) 59.3±8.6 55.3±7.1 0.012性別 (男/女，例) 14/29 21/34 0.564體重指數(shù) (kg/m2) 23.0±3.6 24.8±3.0 0.009空腹血糖 (mmol/L) 5.1±0.4 5.1±0.6 0.699 TC (mmol/L) 4.7±0.9 5.1±1.1 0.073 HDL-C (mmol/L) 1.4±0.4 1.3±0.3 0.613 LDL-C (mmol/L) 2.9±0.7 3.2±0.8 0.107 TG (mmol/L) 1.3±0.8 1.9±2.1 0.061肌酐清除率 (ml/min) 83.4±22.5 109.1±26.1 ＜0.001血尿酸 (μmol/L) 301.3±83.9 298.3±89.5 0.871血鈉離子 (mmol/L) 140.1±2.2 140.5±2.4 0.367血鉀離子 (mmol/L) 4.0±0.3 4.0±0.3 0.634血氯離子 (mmol/L) 105.0±2.7 105.0±2.6 0.904收縮壓 (mmHg) 123.0±13.9 125.1±11.7 0.420舒張壓 (mmHg) 77.6±6.4 79.7±8.1 0.152脈壓 (mmHg) 45.4±11.3 44.5±10.0 0.677平均動(dòng)脈壓 (mmHg) 92.7±8.0 93.1±15.4 0.867心率 (次/min) 65.5±9.9 67.8±12.6 0.333 CF-PWV (m/s) 9.5±1.6 9.8±1.5 0.377 VEGF-C (pg/ml) 2 655.7±1 011.3 3 158.7±917.2 0.012

表4 平均動(dòng)脈壓與血漿VEGF-C水平的Spearman相關(guān)分析

3 討論

我們發(fā)現(xiàn)，高血壓組血漿VEGF-C水平比對(duì)照組高，且血漿VEGF-C水平受高鹽飲食的影響。在健康人群和高血壓人群中，高鹽飲食亞組的血漿VEGF-C水平均更高。在高血壓組中，與低鹽飲食亞組相比，高鹽飲食亞組的收縮壓[（146.8±12.6）mmHg vs （134.6±13.3）mmHg，P＜0.001]和舒張壓 [（89.7±7.9）mmHg vs（81.2±8.2）mmHg，P＜0.001]明顯升高；而在健康人群中，高鹽飲食對(duì)血壓的影響不大；這提示可能與高血壓患者腎外血壓調(diào)節(jié)軸（巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生）受損、血壓調(diào)節(jié)失代償有關(guān)。在健康人群中，該調(diào)節(jié)軸功能正常。

在動(dòng)物試驗(yàn)中，高鹽飲食干預(yù)后動(dòng)物皮下的組織間質(zhì)鈉鹽蓄積，滲透壓增大，糖胺聚糖含量和糖胺聚糖所帶的負(fù)電荷增加[13]。為了響應(yīng)間質(zhì)的高滲透壓力，巨噬細(xì)胞聚集，分泌VEGF-C，誘導(dǎo)eNOS表達(dá)，其結(jié)合VEGFR-2或VEGFR-3受體，促進(jìn)血管新生[14-16]。隨后血管舒張，鈉鹽從組織間質(zhì)中清除掉，從而調(diào)控血壓[15-17]。

健康人群經(jīng)高鹽飲食干預(yù)一周后，血漿中VEGF-C水平升高，同時(shí)細(xì)胞外體積和CCr也增加，提示腎臟也參與了高鹽飲食的調(diào)節(jié)[18,19]。我們的數(shù)據(jù)顯示，在健康人群中，與低鹽飲食亞組相比，高鹽飲食亞組的CCr明顯上升，而高血壓人群經(jīng)高鹽飲食干預(yù)后CCr變化不明顯；這提示可能是腎外血壓調(diào)節(jié)軸（巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生）通路和傳統(tǒng)的腎內(nèi)鹽平衡腎滲透壓通路一起調(diào)控血壓，腎內(nèi)也可能存在巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生的調(diào)節(jié)通路。

我們的研究證明，在原發(fā)性高血壓患者中，高鹽飲食對(duì)血漿中VEGF-C水平有影響，血漿VEGF-C水平和血壓存在相關(guān)性；這提示了人體腎外巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生信號(hào)通路在血壓調(diào)節(jié)中的重要作用，該通路在正常人群和高血壓患者中均發(fā)揮作用。

我們的研究存在缺陷：第一，鈉鹽攝入評(píng)估方法采取的是膳食史法，主觀性強(qiáng)，容易出現(xiàn)一些偏差和錯(cuò)誤；第二，由于技術(shù)限制，我們沒(méi)有準(zhǔn)確測(cè)定皮膚中鈉鹽的總含量和VEGF-C的表達(dá)情況。隨著技術(shù)的改善，現(xiàn)在用新的核磁共振技術(shù)測(cè)量皮膚中鈉鹽的含量[19]，為下一步研究奠定了基礎(chǔ)。

綜上所述，與健康人群相比，高血壓患者血漿VEGF-C水平升高。血漿VEGF-C水平受高鹽飲食的影響，且血漿VEGF-C水平和血壓呈正相關(guān)。VEGF-C介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞-VEGF-C-血管新生這條信號(hào)通路在人體鹽平衡調(diào)節(jié)中有重要作用，未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步探討VEGF-C介導(dǎo)的間質(zhì)的電解平衡和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的相關(guān)性。

高鹽飲食在我國(guó)北方比較普遍，考慮到個(gè)體易感性，檢測(cè)某一高血壓患者是否為鹽敏感性高血壓患者是有難度的。而我們可以通過(guò)檢測(cè)血漿中VEGF-C水平，以其作為靶標(biāo)，干預(yù)鹽敏感高血壓患者因高鹽飲食引起的血壓升高。

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