綠茶多酚對被動吸煙引起小鼠肺氧化應激的干預研究

史春麟，李曉煥，黃翔翔*

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綠茶多酚對被動吸煙引起小鼠肺氧化應激的干預研究

史春麟1，李曉煥2，黃翔翔2*

1. 湖南師范大學附屬中學，湖南 長沙 410006； 2. 湖南農(nóng)業(yè)大學茶學教育部重點實驗室，湖南 長沙 410128

研究了綠茶多酚（Green tea polyphenol，GTP）對被動吸煙致小鼠肺部氧化應激損傷的干預作用，并探討其可能機制。將40只KM雌性小鼠隨機分成正常對照C組、被動吸煙模型M組、100?mg·kg-1GTP1組、200?mg·kg-1GTP2組，每組10只。實驗12周結束后處死小鼠，測定其肺質量及血清氧化應激炎癥水平；采用熒光定量PCR測定白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素33（IL-33）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素1β（IL-1β）基因表達水平。研究結果表明，與M組相比，灌喂GTP后使得小鼠生存質量、肺形態(tài)有明顯改觀，顯著提高小鼠血清T-SOD及GSH-Px活力，顯著降低MDA、IL-6、TNF-α表達水平，顯著抑制IL-6、IL-33、TNF-α及IL-1β炎性相關基因的表達，灌胃200?mg·kg-1GTP比100?mg·kg-1的GTP作用更加顯著。研究發(fā)現(xiàn)，GTP可能通過抑制炎性細胞因子表達水平、提高抗氧化能力來保護肺部組織形態(tài)與結構的完整，保護被動吸煙對肺部的損害。

綠茶多酚；被動吸煙；肺組織；氧化應激

我國是世界上煙草生產(chǎn)、消費量最大的國家，吸煙率在37%以上。因對吸煙環(huán)境管控不嚴格，導致諸多被動吸煙環(huán)境。研究顯示，香煙側流煙霧中苯并芘含量比主流煙霧高出5倍，二甲基甲硝胺則高出幾十倍[1]。流行病學調(diào)查吸煙家庭兒童呼吸道疾病遠多于不吸煙家庭，丈夫吸煙其妻子發(fā)生肺癌是不吸煙者的2倍，并使孕婦胎兒產(chǎn)前死亡率增加65%[2]。對小鼠進行香煙煙霧（Cigarette smoke，CS）暴露可誘發(fā)肺形態(tài)學變化及氧化應激，總超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase，T-SOD）活性增加[3]，活性氧（Reactive oxygen species，ROS）濃度增高，但綠茶在一定程度上能抑制CS誘導的肺氧化應激損傷[4]。茶多酚（Tea polyphenols，TP）是綠茶的主體抗氧化成分，以兒茶素占主導地位，兒茶素主體成份表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯（EGCG）可以顯著降低香煙煙霧冷凝物（Cigarette smoke condensate，CSC）誘導人支氣管上皮細胞DNA損傷及細胞凋亡[5-6]，抑制人類正常支氣管上皮細胞核因子活化B細胞κ輕鏈增強子（Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-κB）的活化[7]，顯著上調(diào)鼠肺泡巨噬細胞系（MH-S）響應感染CSC、抑制白細胞介素6（Interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α）的產(chǎn)生[8]。由此可知，TP抵抗CS氧化應激主要集中在CSC方面，而模擬人被動吸煙環(huán)境，系統(tǒng)研究綠茶多酚（Green tea polyphenols，GTP）干預小鼠被動吸煙其肺部炎性細胞因子表達水平、氧化應激能力等還未見研究報道。因此，本實驗擬通過小鼠體質量、肺質量及血清氧化應激炎癥水平的變化；以及肺組織IL-6、白細胞介素33（Interleukin-33，IL-33）、TNF-α、白細胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）等炎性基因表達研究，分析探討GTP對被動吸煙小鼠肺損傷氧化應激的保護機制，旨在為GTP在被動吸煙環(huán)境的抗氧化應用及防護提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

綠茶多酚（GTP），含量大于等于98%，其中EGCG純度大于50%，由湖南農(nóng)業(yè)大學茶學教育部重點實驗室自行制備；43F116標準香煙，由湖南中煙公司提供。T-SOD、丙二醛（Malondialdhyde，MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）測試盒購自南京建成生物工程研究所；小鼠IL-6、TNF-α酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒購自Bio-Swamp公司。實時熒光定量PCR試劑盒SYBR premix EX TaqTM（TLi RNaseH Plus）（Takara公司，日本）；逆轉錄試劑盒PrimeScript? RT reagent Kit With gDNA Eraser（Perfect Real Time）（Takara公司，日本）；IL-6、IL-33、TNF-α、IL-1β等PCR（qRT-PCR）引物由金斯瑞生物科技有限公司合成；Trizol、DEPC等常規(guī)試劑為國產(chǎn)。

1.2 儀器設備

自制透明有機玻璃小鼠被動吸煙箱（長×寬×高：1.0?m×0.6?m×0.6?m），頂部和周圍開有數(shù)個直徑5?cm的通氣口，香煙固定在底部通氣孔上，煙霧濃度用注射器容量進行調(diào)配。全波長酶標儀（Thermo scientific，德國）、冷凍離心機（MIKRO 22R型臺式、德國Hettich公司）、梯度PCR儀（Applied Biosystems，美國）、NanoDrop 2000/2000c分光光度儀（Thermo Scientific，德國）、實時熒光定量PCR儀（Roter-Gene Q，美國）等。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組

昆明種（KM）SPF級雌鼠40只，4周齡，由斯萊克景達實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2011-0003。小鼠飼養(yǎng)于湖南農(nóng)業(yè)大學茶葉研究所，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（25±1）℃，濕度40%~70%，光照時間12?h晝夜交替，自由飲用水和基礎飼料，基礎飼料主要營養(yǎng)成分：粗蛋白24.3%，粗灰粉8.6%，粗脂肪7.5%，粗纖維3.5%，鈣1.16%，磷0.7%，含水量7.5%。因小鼠年齡較小，適應性喂養(yǎng)一周，期間自由飲水、進食。適應性飼養(yǎng)1周后，以體重為權重，將40只小鼠隨機分為正常對照組（The control group，C Group）10只，生存在正常環(huán)境下；被動吸煙組30只，第1個月每兩天增加一支香煙，增加至每天12支煙為止；第2個月開始每天被動吸煙12支（每天6次，每次2支，每支10?min）。上述小鼠被動吸煙2個月后，從被動吸煙組小鼠中隨機抽取20只，隨機分為兩組，每天上午被動吸煙前灌喂GTP，分別為100?mg·kg-1、200?mg·kg-1GTP；另10只小鼠進行被動吸煙處理，正常飲水攝食，被動吸煙處理共持續(xù)3個月，以此方法來建立小鼠被動吸煙模型（Passive smoking group，Model Group）。建立C正常對照組、M被動吸煙模型組、100?mg·kg-1GTP（GTP1）干預組、200?mg·kg-1GTP（GTP2）干預組。

1.3.2 小鼠生存狀況觀察

每日觀察各組小鼠精神狀態(tài)、活潑狀態(tài)、毛發(fā)色澤等情況，每日定量為每組小鼠添加(50±2)?g飼料，回收并稱量當日剩余飼料，記錄小鼠進食量變化，并且每周記錄小鼠體重變化。

1.3.3 樣本采集

實驗處理12周結束后，處死前禁食12?h，采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠，收集眼球血、離心獲得血清；打開胸腔取出全肺，右肺用于肺組織病理學觀察，左肺使用預冷的0.9%的NaCl溶液清洗，放于凍存管中存于–80℃冰箱以備基因分析。

1.3.4 肺組織病理學觀察

肺組織經(jīng)PBS清洗后拍照，剪取右肺上葉用10%的甲醛浸泡24?h，石蠟包埋切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察肺組織病理學改變。

1.3.5 血清中T-SOD、MDA、GSH-Px、IL-6、TNF-α檢測

小鼠眼球取血收集于1.5?mL或2?mL離心管中，靜置于4℃冰箱1?h后，4℃下3?000?r·min-1離心15?min，共離心2次，小心收集上清，按照檢測試劑盒說明書操作，檢測T-SOD、MDA、GSH-Px、IL-6、TNF-α表達變化。

1.3.6 肺組織IL-6、IL-33、TNF-α、IL-1β基因RT-PCR檢測

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果與分析

2.1 對小鼠一般體征變化的影響

小鼠在適應飼喂期間生存狀態(tài)良好，平均體重增加了5?g；被動吸煙造模期間，表現(xiàn)出與正常對照組明顯不同的生存狀態(tài)，被動吸煙初期對煙霧反應劇烈，每次被動吸煙結束后異?；钴S，精神亢奮，啃咬鼠籠鐵絲；被動吸煙造模后期對外界刺激反應遲鈍，精神倦怠，活動減少，食欲下降，體重減輕，毛發(fā)由最初的雪白色變得焦黃、粗糙、無光澤。

表1 IL-6、IL-33、TNF-α、IL-1β、β-actin引物序列

圖1 被動吸煙對小鼠體重的影響

被動吸煙及GTP灌喂干預對各實驗組小鼠體重產(chǎn)生明顯影響（圖1）。被動吸煙造模4~8周，正常對照C組體重增加明顯高于被動吸煙組，呈顯著差異（<0.05）；9~12周繼續(xù)被動吸煙造模及灌喂GTP水液的3個實驗小組，模型M組體重呈持續(xù)下降趨勢，GTP灌喂干預的2個小組體重維持平穩(wěn)，并呈輕度增加趨勢，這可能是GTP對被動吸煙誘發(fā)的炎癥有一定的消減、干預作用，使得小鼠生存質量趨于好轉、體重有所回升。

2.2 對小鼠肺組織病理學變化的影響

解剖小鼠后發(fā)現(xiàn)其肺部外觀形態(tài)差異較大。被動吸煙模型M組小鼠兩肺呈暗紅色，表面有斑點狀陳舊性出血灶，體積增大，質地變硬，彈性較差，局部胸膜黏連；GTP1灌喂干預組的小鼠兩肺顏色變淺，有少許胸膜黏連，表面有少許斑點狀出血灶，體積較M組小，硬度較正常對照C組硬但明顯較M組軟；GTP2灌喂干預組肺部形態(tài)與正常對照相比，部分肺泡壁崩解破壞，總體變化惡化程度較M組有所減輕。

由圖2可知：在M組（圖2-B），發(fā)現(xiàn)其肺泡隔變厚，肺泡隔損害，腔體擴張變大，有明顯滲血、炎癥現(xiàn)象；GTP1灌喂干預組（圖2-C）肺組織出血及肺間質水腫明顯減弱，肺泡腔與C組（圖2-A）相比較呈不規(guī)則、有些破裂導致肺泡腔變大，肺泡隔增厚，仍有明顯出血等炎癥發(fā)生；GTP2（圖2-D）灌喂干預組肺泡組織形態(tài)已基本恢復正常。

注：A：正常組，B：模型組，C：100 mg·kg-1 組，D：200 mg·kg-1 組。

注：A：正常組，B：模型組，C：100 mg·kg-1 組，D：200 mg·kg-1 組。

由圖3可知：M組（圖3-B）氣管纖毛上皮細胞消失，間質血管擴張充血，有大量炎性細胞浸潤；GTP1灌喂干預組小鼠肺氣管黏膜基本恢復正常，但與C組（圖3-A）比較其氣管周圍仍有炎性細胞浸潤；GTP2灌喂干預組與正常對照組比較，肺氣管基本恢復正常，但修復后的肺氣管明顯增大。

由圖2、圖3小鼠肺部肺泡、肺氣管病理學切片可知，被動吸煙導致小鼠肺發(fā)生了明顯病理性炎癥，但GTP具有明顯修復作用，尤以200?mg·kg-1的GTP2灌喂干預效果為佳。

2.3 對小鼠血清氧化應激因子表達水平的影響

小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH-Px水平高低反映了體內(nèi)氧化應激水平。由表2可知，與C組相比，M組T-SOD、GSH-Px水平顯著降低（＜0.05），MDA含量顯著升高（＜0.05）；灌喂GTP進行干預，與M相比，GTP1組、GTP2組均顯著減少MDA含量（＜0.05）；顯著增加T-SOD、GSH-Px水平（＜0.05），GTP2組比GTP1組作用更加顯著；GTP2干預組T-SOD、MDA水平已基本恢復至C組水平，GSH-Px水平高于C組。由此可知，被動吸煙使得小鼠血液產(chǎn)生較高氧化應激水平，灌喂茶多酚可能起到干預作用，200?mg·kg-1GTP灌喂量效果更加明顯。

2.4 對小鼠血清細胞因子表達水平的影響

IL-6、TNF-α與肺部炎癥發(fā)生及發(fā)展密切相關。由表3可知，與C相比，M型組IL-6、TNF-α含量顯著升高（＜0.05）。經(jīng)GTP干預后，與M比較，GTP1組和GTP2組均顯著減少IL-6、TNF-α含量（＜0.05），GTP2組比GTP1組作用更加顯著；與C組比較，GTP2組已基本恢復到C組水平。說明被動吸煙組小鼠肺部存在較高的炎癥反應，100?mg·kg-1的GTP1干預能夠對IL-6、TNF-α表達起到有效緩解作用，而200?mg·kg-1的GTP2干預可顯著抑制IL-6、TNF-α含量，對被動吸煙小鼠肺部的炎癥反應有很好的干預作用。

2.5 對小鼠肺部炎性相關基因表達水平的影響

IL-6、IL-33、TNF-α及IL-1β基因表達水平升高會導致COPD、肺癌等肺部疾病的發(fā)生及發(fā)展。以β-actin為內(nèi)參，由圖4的qRT-PCR分析結果可知：與C比較，M組小鼠肺組織IL-6、IL-33、TNF-α及IL-1β基因mRNA相對表達量均顯著上升（＜0.05），GTP2組、GTP1組IL-6、IL-33、TNF-α及IL-1β基因mRNA相對表達量顯著降低（＜0.05），GTP2組的GTP干預效果與C組表達水平接近。由此可知，導致肺部炎性基因表達增強，茶多酚干預呈劑量依賴關系，以200?mg·kg-1的GTP2干預抑制修復效果明顯。

表2 各組小鼠血清中T-SOD、MDA、GSH-Px指標變化

注：*同C組比較；#與M組比較；＜0.05差異顯著。

Note: *Compared with C group, # Compared with M group,<0.05 showed significant difference.

表3 各組小鼠血清中IL-6、TNF-α濃度變化

注：*同C組比較；#與M組比較；＜0.05差異顯著。

Note: *Compared with C group, # Compared with M group,<0.05 showed significant difference.

注：*同C組比較；#與M組比較；P＜0.05差異顯著。

3 討論

研究表明，高于500?mg·kg-1的EGCG攝入會對小鼠肝臟產(chǎn)生毒性[9]，由于EGCG占茶葉中總兒茶素的50%左右，而兒茶素占茶多酚總量的但70%，所以低于1?428?mg·kg-1的GTP攝入在小鼠安全計量范圍之內(nèi)。本研究選用100?mg·kg-1、200?mg·kg-1GTP對小鼠被動吸煙2個月后進行灌喂干預，灌喂劑量遠低于最大耐受劑量，在安全劑量范圍。

本實驗表明，被動吸煙導致小鼠肺組織充血浮腫、肺泡腔變大、肺泡間隔厚度增加，發(fā)生SOD、過氧化氫酶（Catalase，CAT）系列氧化損傷，與K K Campos、K H Chan等研究結果一致[3-4]。灌喂200?mg·kg-1GTP進行干預，體重有所回升，肺部外觀形態(tài)得到了較好修復，基本恢復到正常對照組水平。GTP干預組與M組比較，小鼠血清中T-SOD、GSH-Px活性明顯增加，MDA、IL-6、TNF-α水平明顯降低，說明血清抗氧化應激能力增強。但K H Chan等[4]將小鼠進行煙霧暴露后進行綠茶干預得到了相反研究結果，因其使用綠茶劑量過少，GTP起到促氧化作用而未起到應有的保護作用。趙文紅等[10]使用茶多酚修復了直鏈烷基苯磺酸鈉致小鼠的皮膚損傷，G Adikesavan等[11]使用EGCG穩(wěn)定線粒體酶抑制CS誘發(fā)大鼠心肌功能障礙細胞凋亡；對CSC毒理性能研究方面，K Matsunaga 等[8]發(fā)現(xiàn)EGCG單體可顯著抑制CSC誘導巨噬細胞誘導IL-6和TNF-α的產(chǎn)生，C Qing及D N Syed等發(fā)現(xiàn)EGCG可保護人正常支氣管上皮細胞氧化損傷[6]、抑制NF-κB的活化[7]，上述研究均與本實驗取得了一致性研究進展。本研究使用的GTP其EGCG含量為50%，對被動吸煙小鼠進行灌喂干預，與哮喘過敏相關的IL-33、炎癥因子IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表達水平下降接近正常對照組水平；從肺部病理形態(tài)改變上分析，GTP也起到了很好修復作用。

綠茶因其富含多酚類物質具有很強的抗氧化性[4, 12]，是深受世界各地人們歡迎、每天飲用的飲料。婦女、兒童本身不吸煙，但常常暴露于被動吸煙環(huán)境，使得新生兒體重偏低、胸圍偏小，并給呼吸系統(tǒng)帶來不良影響[6]。小鼠懷孕期間CS暴露使得新生兒出生時身長、體重降低，肺組織發(fā)生炎性變化，導致氧化還原指標失衡[3]。用龍井茶綠茶水提物對CS暴露小鼠進行灌喂干預，發(fā)現(xiàn)通過綠茶的抗氧化作用可緩解小鼠氣道局部氧化應激及蛋白酶/抗蛋白酶失衡[13]。飲用綠茶、口服EGCG可預防及緩解CS誘導慢性阻塞性肺疾病發(fā)生[14]；利用黏膜培養(yǎng)模型發(fā)現(xiàn)EGCG是DNA的最好保護物質，對上呼吸消化道細胞中致癌物誘導的DNA斷裂起到明顯的保護作用[15]。由此可知，飲用綠茶或口服適量EGCG對呼吸道或肺部的煙霧暴露可起到明顯的抗氧化保護作用。但從世界公共衛(wèi)生角度分析，禁煙和避免被動吸煙才是提高生活質量，保證身體健康的根本途徑。

[1] 周世偉, 李淑敏, 葉明, 等. 香煙主測流煙霧中主要致癌成分分析[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 1991, 1(1): 20-23.

[2] S H Huang, K P Weng, S M Huang, et al. The effects of maternal smoking exposure during pregnancy on postnatal outcomes: A cross sectional study [J]J Chin Med Assoc, 2017, https://doi.org/10.1016/j.jcma.2017.01.007.

[3] K K Campos, V A Dourado, M F Diniz, et al. Exposure to cigarette smoke during pregnancy causes redox imbalance and histological damage in lung tissue of neonatal mice [J]. Exp Lung Res, 2014, 40(4): 164-171.

[4] K H Chan, S P Ho, S C Yeung, et al. Chinese green tea ameliorates lung injury in cigarette smoke-exposed rats [J]Respir Med, 2009, 103(11): 1746-1754.

[5] P Baumeister, M Reiter, N Kleinsasser, et al. Epigallocatechin-3-gallate reduces DNA damage induced by benzo[a]pyrene diol epoxide and cigarette smoke condensate in human mucosa tissue cultures [J]Eur J Cancer Prev, 2009, 18(3): 230-235.

[6] 卿春華, 陳平, 向旭東. 茶多酚對低劑量煙草懸凝物誘導人支氣管上皮細胞氧化損傷及凋亡的影響[J]. 中南大學學報(醫(yī)學版), 2010, 35(2): 123-128.

[7] D N Syed, F Afaq, M H Kweon, et al. Green tea polyphenol EGCG suppresses cigarette smoke condensate-induced NF-kappaB activation in normal human bronchial epithelial cells [J]Oncogene, 2007, 26(5): 673-682.

[8] K Matsunaga, T W Klein, H Friedman, et al. Epigallocatechin gallate, a potential immunomodulatory agent of tea components, diminishes cigarette smoke condensate-induced suppression of anti-Legionella pneumophila activity and cytokine responses of alveolar macrophages [J]Clin Diagn Lab Immunol, 2002, 9(4): 864-871.

[9] LAMBERT J D, KENNETT M J, SANG S M, et al. Hepatotoxicity of high oral dose (-)-epigallocatechin-3-gallate in mice [J]. Food Chem Toxicol, 2010, 48(1): 409-416.

[10] 趙文紅, 崔慧嫻, 孫倩男, 等. 茶多酚對直鏈烷基苯磺酸鈉致小鼠皮膚損傷的保護作用[J]茶葉科學, 2016, 36(5): 461-468.

[11] G Adikesavan, M M Vinayagam, L A Abdulrahman, et al. (-)-Epigallocatechin-gallate (EGCG) stabilize the mitochondrial enzymes and inhibits the apoptosis in cigarette smoke-induced myocardial dysfunction in rats [J]Mol Biol Rep, 2013, 40(12): 6533-6545.

[12] G J Du, Z Zhang, X D Wen, et al. Epigallocatechin Gallate (EGCG) is the most effective cancer chemopreventive polyphenol in green tea [J]Nutrients, 2012, 4(11): 1679-1691.

[13] K H Chan, S C Chan, S C Yeung, et al. Inhibitory effect of Chinese green tea on cigarette smoke-induced up-regulation of airway neutrophil elastase and matrix metalloproteinase-12 via antioxidant activity [J]. Free Radic Res, 2012, 46(9): 1123-1129.

[14] 黃翔翔, 楊哲, 禹利君. 綠茶、EGCG預防及緩解香煙煙霧誘導COPD的研究進展[J]. 茶葉科學, 2017,37(4): 332-338

[15] P Baumeister, M Reiter, N Kleinsasser, et al. Epigallocatechin-3-gallate reduces DNA damage induced by benzo[a]pyrene diol epoxide and cigarette smoke condensate in human mucosa tissue cultures[J]. Eur J Cancer Prev, 2009, 18(3): 230-235.

Effects of Green Tea Polyphenols on Oxidative Stress Induced by Passive Smoking in Mice Lung

SHI Chunlin1, LI Xiaohuan2, HUANG Xiangxiang2*

1. The High School Attached to Hunan Normal University, Changsha 410006, China; 2. Key Laboratory of Tea Science of Ministry of Education, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China

The objective of the study is to investigate the intervention effects of green tea polyphenols (GTP) on oxidative stress induced by passive smoking in mice lung and its possible mechanisms. Forty healthy Kunming mice (female) were randomly divided into 4 groups including normal control group (C), passive smoking model group (M), GTP treated group 1 (GTP1, 100?mg·kg-1) and GTP treated group 2 (GTP2, 200?mg·kg-1) respectively (n=10). All mice were killed after treating with GTP for 12 weeks. The morphology and quality of lung, the oxidative stress of serum and inflammatory level were determined. The mRNA expression levels of inflammation-related genes including interleukin 6 (IL-6), interleukin 33 (IL-33), tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 1 beta (IL-1β) were measured by fluorescence quantitative PCR. Compared to M group, the life quality and pulmonary morphology of mice in GTP1 and GTP2 were significantly improved, and T-SOD and GSH-Px activities in serum were also significantly enhanced.But MDA, IL-6 and TNF-α levels in serum were decreased significantly. The mRNA expressions of IL-6, IL-33, TNF-α and IL-1β were also declined in GTP groups, which were clearly dose-dependent. These results showed that GTP could protect lung against damage of passive smoking and remain the integrity of lung tissuesby inhibiting inflammatory cytokine expression and improving the antioxidant capacity.

green tea polyphenols, passive smoking, lung tissue, oxidative stress

TS272.5+1；R97

A

1000-369X(2018)02-212-09

2017-09-07

2017-10-30

湖南師范大學附屬中學自主研究性學習項目、湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新項目（HNCR-2014003）

史春麟，男，湖南師范大學附屬中學2016級學生。

huangxiangxiangsg@qq.com