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    酵母菌發(fā)酵法改良甘草感官品質(zhì)的研究

    2018-04-17 01:13:34豆康寧孟宏昌張玲玲王飛
    中國(guó)調(diào)味品 2018年4期
    關(guān)鍵詞:腥味酵母菌提取液

    豆康寧,孟宏昌,張玲玲,王飛*

    (1.漯河醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校,河南 漯河 462002; 2.漯河職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河南 漯河 462002)

    甘草為多年生草本植物,是一種藥食兩用資源,其提取物廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、日用化工等領(lǐng)域[1]。甘草味甘甜,性平和,入心、脾、肺、胃四經(jīng);生用偏涼,可瀉火解毒、緩急止痛;炙用偏溫,能散表寒、補(bǔ)中益氣;此外,甘草還善于調(diào)和藥性,解百藥之毒[2]。甘草中的生理活性成分主要有三萜類化合物、黃酮類化合物及甘草多糖類化合物三大類成分,具有抑菌、抗腫瘤、抗誘變、抗病毒、抗氧化等多種生理功能[3-8]。我國(guó)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 02760-2011規(guī)定,甘草、甘草酸銨、甘草酸一鉀及三鉀作為功能甜味劑可用于蜜餞涼果、糖果、餅干、肉罐頭、調(diào)味品和飲料中,使用量按生產(chǎn)需要使用。

    但是,甘草具有甘草腥味,將甘草及其提取液作為調(diào)味品或食品添加劑直接添加到食品中,會(huì)影響食品的感官品質(zhì),限制了其在食品中的應(yīng)用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn),微生物發(fā)酵法是改良甘草感官品質(zhì)的良好途徑[9]。文章研究了甘草在酵母菌發(fā)酵下酒精含量的變化、感官品質(zhì)的變化、氣味成分的變化,為甘草感官品質(zhì)的改良及在食品中的應(yīng)用提供了技術(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    甘草:品種為烏拉爾甘草,生長(zhǎng)方式為種植,產(chǎn)地為寧夏鹽池,生長(zhǎng)期為3年,通過(guò)市售采購(gòu);水:一級(jí)純凈水,實(shí)驗(yàn)室自制;酵母菌:活性面包干酵母,活菌數(shù)為1×1012個(gè)/g,安琪酵母股份有限公司;葡萄糖:食品級(jí),山東西唐生物科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    YP3001N型電子分析天平上海精密科學(xué)儀器有限公司;SZYDW型無(wú)菌操作臺(tái)蘇州億達(dá)凈化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司;LDZX-50KBS型高壓滅菌鍋上海申安醫(yī)療器械廠;RYC-111型搖床上海?,攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;X-22R型冷凍離心機(jī)Allegra公司;SQ456-GC型毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀美國(guó)布魯克公司;Agilent 7890A氣相色譜儀、附氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1甘草提取物制備方法

    將甘草用萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎成20目的粉末,稱量20 g甘草樣品,放入1000 mL錐形瓶中,再加入500 mL水,放入搖床中振蕩提取,搖床振蕩速度為120 r/min,溫度為30 ℃,提取60 min。提取結(jié)束后,用冷凍離心機(jī)分離甘草提取液,轉(zhuǎn)速為10000 r/min,時(shí)間為10 min。將離心后的上清液用提取溶劑定容至500 mL,即得甘草提取液,然后用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾甘草提取液得1 mL作為甘草提取物GC-MS試樣。

    1.3.2甘草發(fā)酵方法

    在250 mL錐形瓶中,加入100 mL甘草提取液,添加5%的葡萄糖,搖勻后,在高壓滅菌鍋中滅菌,待甘草溶液冷卻后,在無(wú)菌操作臺(tái)中接種甘草溶液1%的酵母菌,然后放置在恒溫?fù)u床中發(fā)酵,發(fā)酵溫度28 ℃[10]。每隔30 min,取出部分甘草發(fā)酵溶液,評(píng)價(jià)甘草溶液的感官品質(zhì)。

    1.3.3甘草溶液感官品質(zhì)評(píng)價(jià)方法

    表1 甘草溶液感官品質(zhì)評(píng)價(jià)賦分標(biāo)準(zhǔn)

    其中,以4%的甘草提取液的腥味等級(jí)標(biāo)定為重,將甘草液濃度依次稀釋10倍,腥味等級(jí)依次為較重、稍有甘草腥味,無(wú)甘草腥味。以4%的甘草提取液的色澤等級(jí)標(biāo)定為黃色深,將甘草液濃度依次稀釋10倍,色澤等級(jí)依次為黃色較深、黃色淡、黃色淺淡。

    1.3.4甘草提取液中乙醇含量的測(cè)定

    1.3.4.1乙醇含量測(cè)定方法

    采用Agilent 7890A氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定分析乙醇含量。色譜分析條件:色譜柱:DB-FFAP色譜柱(30 m×0.25 μm×0.25 mm),程序升溫60 ℃(保持2 min),以5 ℃/min升至110 ℃(保持5 min),進(jìn)樣口溫度200 ℃,檢測(cè)器(FID)溫度220 ℃,分流比5∶1,氫氣流速 40 mL/min,空氣流速400 mL/min,載氣(N2) 30 mL/min,進(jìn)樣量1.0 μL[12]。

    1.3.4.2乙醇濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

    用一級(jí)純水分別配制以下不同濃度的乙醇溶液:2%,1%,0.5%,0.25%,0.125%,0.625%。建立乙醇濃度與氣相色譜出峰面積之間的關(guān)系曲線。

    1.3.5甘草提取液氣質(zhì)色譜分析

    采用SQ456-GC型毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定分析。

    1.3.5.1氣質(zhì)色譜方法[13]

    萃取條件:CAR/PDMS復(fù)合萃取頭,溫度為50 ℃,時(shí)間為40 min。氣相色譜條件:石英毛細(xì)管柱HP-FFAP (30 m×0.25 mm,0.25 μm),程序升溫:起始溫度40 ℃,保持3 min,然后以5 ℃/min升到90 ℃,再以12 ℃/min 升到250 ℃,保持8 min;載氣為氦氣,柱流量1.5 mL/min,進(jìn)樣口溫度250 ℃,進(jìn)樣量:固相微萃取(SPME),進(jìn)樣方式:手動(dòng),不分流。

    1.3.5.2質(zhì)譜條件

    電離方式:EI,電子能量:70 eV,接口溫度:250 ℃,離子源溫度:200 ℃。采用Wiley7n.1 標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)檢索進(jìn)行定性;通過(guò)氣相色譜法按色譜峰面積計(jì)算各組分的相對(duì)含量。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

    2.1 甘草提取液在發(fā)酵過(guò)程中乙醇含量的變化

    乙醇溶液氣相色譜出峰圖見(jiàn)圖1。

    圖1 乙醇溶液氣相色譜出峰圖

    乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見(jiàn)圖2。方程式為Y=12648.0299X-91.032609,相關(guān)系數(shù)R2=0.99998。

    (2)宗教信仰與風(fēng)俗習(xí)慣導(dǎo)致的文化沖突.宗教和信仰是處于文化最深層的東西,它凝聚著一個(gè)民族的歷史和文化.不同的宗教代表不同的文化,有不同的傾向和禁忌,影響著各個(gè)國(guó)家人們認(rèn)識(shí)事物、觀察事物的觀念和態(tài)度[4-5],也影響企業(yè)以及企業(yè)管理者對(duì)商機(jī)的把握、產(chǎn)品的銷售等.不同國(guó)家的人們?cè)谟^念、理念上的文化差異常常會(huì)使從事國(guó)際化經(jīng)營(yíng)的企業(yè)在經(jīng)營(yíng)過(guò)程中出現(xiàn)文化沖突,也使當(dāng)?shù)厝撕茈y容忍這類沖突,所以企業(yè)必須做好有效的管理.

    圖2 乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

    甘草提取液在酵母菌發(fā)酵的過(guò)程中,乙醇含量的變化見(jiàn)圖3。

    圖3 甘草提取液發(fā)酵過(guò)程中乙醇含量的變化

    由圖3可知,甘草提取液在酵母發(fā)酵的過(guò)程中,開(kāi)始發(fā)酵時(shí),乙醇含量增加幅度較小,發(fā)酵1 h后,乙醇含量增加幅度較大。這是由于酵母在前期發(fā)酵主要以有氧發(fā)酵為主,產(chǎn)生氧氣和二氧化碳。發(fā)酵后期,溶液中氧氣消失,酵母菌以無(wú)氧發(fā)酵為主,產(chǎn)生乙醇和二氧化碳[14]。

    2.2 甘草提取液在發(fā)酵過(guò)程中感官品質(zhì)的變化

    酵母菌發(fā)酵甘草提取液0,0.5,1,1.5,2,2.5,3 h,其感官品質(zhì)的變化見(jiàn)圖4。

    圖4 甘草提取液在酵母菌發(fā)酵過(guò)程中感官品質(zhì)的變化

    由圖4可知,甘草提取液感官品質(zhì)隨著酵母菌發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)先上升后下降,發(fā)酵2 h時(shí),甘草提取液感官品質(zhì)最好。不發(fā)酵的甘草提取液色澤為深黃色,具有較重的腥氣味道。隨著酵母菌的發(fā)酵,會(huì)產(chǎn)生醇類、酯類等物質(zhì),使甘草提取液的腥味下降。發(fā)酵2 h時(shí),甘草提取液的腥味消失,變成具有乙醇的殺口感[15],腥氣味消失,變成酒香味。發(fā)酵時(shí)間超過(guò)2 h后,口感中乙醇味比較明顯,具有一定的刺激感,這是由于乙醇含量較高造成的,氣味中帶有異味,酒香味變得不純正。因此,甘草提取液在28 ℃下,酵母菌發(fā)酵2 h時(shí),感官品質(zhì)最佳。此時(shí)感官品質(zhì)得分為89分。

    2.3 甘草提取液發(fā)酵前后風(fēng)味物質(zhì)的變化

    2.3.1甘草水提取物氣味成分分析

    甘草水提取物氣味成分GC-MS總離子流圖見(jiàn)圖5,氣質(zhì)色譜出峰物質(zhì)信息見(jiàn)表2。

    圖5 甘草提取液氣味成分GC-MS總離子流圖

    表2 甘草水提取物氣質(zhì)色譜出峰物質(zhì)信息

    續(xù) 表

    由表2可知,共有59種物質(zhì),其中含量較高的物質(zhì)為正己醇(48.2%)、1-辛稀-3-醇(4.26%)、E-2-己烯-1-醇(3.53%)、檸檬烯(3.14%)。甘草水提取物氣味成分中,有烴類、醇類、酮類、醛類、胺類、酚類、酯類等多類有機(jī)化合物。因此,甘草水提取物氣味成分比較復(fù)雜。

    2.3.2甘草提取物酵母發(fā)酵后氣味成分分析

    甘草提取液酵母菌發(fā)酵2 h后,氣味成分GC-MS總離子流圖見(jiàn)圖6,氣質(zhì)色譜出峰物質(zhì)信息見(jiàn)表3。

    圖6 甘草提取液酵母發(fā)酵物氣味成分GC-MS總離子流圖

    表3 甘草提取液酵母菌發(fā)酵溶氣質(zhì)色譜出峰物質(zhì)分析

    續(xù) 表

    由表3可知,共有52種物質(zhì),其中含量較高的有異戊醇(36.02%)、苯乙醇(15.05%)、辛酸(7.58%)、癸酸(6.68%)、正己醇(2.95%)、乙酸(2.66%)、辛酸乙酯(2.66%)。甘草提取液發(fā)酵后的氣味成分中,有烴類、醇類、酮類、醛類、酚類、酯類等多類有機(jī)化合物。因此,甘草提取液酵母發(fā)酵后氣味成分仍然比較復(fù)雜多樣,但是主要成分都發(fā)生了變化。甘草提取液發(fā)酵后的主要?dú)馕冻煞治镔|(zhì)主要是醇類、酸類和酯類物質(zhì),因此,甘草提取液發(fā)酵后的物質(zhì)氣味呈酒香味。

    3 結(jié)論

    在4%的甘草提取液中,添加1%的酵母菌,在28 ℃下發(fā)酵2 h時(shí),甘草提取液的感官品質(zhì)最佳。甘草提取液在酵母菌發(fā)酵的過(guò)程中,乙醇含量不斷增加,甘草腥味消失,氣味由腥味變成酒香味,色澤變淺,甘草提取液的感官品質(zhì)得到很大改善。因此,酵母菌發(fā)酵法是甘草感官品質(zhì)改良的有效途徑。發(fā)酵后的甘草提取液感官品質(zhì)良好,無(wú)甘草腥味,可以作為調(diào)味品或者食品添加劑應(yīng)用到食品中。

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