食管鱗癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-3和溶酶體相關(guān)4次跨膜蛋白B-35的表達(dá)

曹 婧

(鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 鄭州 450052)

食管癌我國(guó)高發(fā)病率的消化道惡性腫瘤之一，每年超過(guò)10萬(wàn)人死于食管癌。食管癌的病理類型中以鱗癌為主，約占90%[1]。食管癌的發(fā)病是一個(gè)多基因、多蛋白參與的復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)在食管癌、結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌、肝癌等多種惡性腫瘤中存在高表達(dá)，在其腫瘤浸潤(rùn)、腫瘤血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等病理生理學(xué)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，MMP-3是其中較為重要的一種[2-3]。溶酶體相關(guān)4次跨膜蛋白B-35(lysosome-associated transmembrane protein 4β-35，LAPTM4B-35)首先發(fā)現(xiàn)于肝癌中，后來(lái)證實(shí)其參與了肝癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等病理生理學(xué)過(guò)程[4]。本研究旨在通過(guò)用免疫組化S-P法檢測(cè)食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達(dá)，以期探討MMP-3和LAPTM4B-35在食管鱗癌中的作用和進(jìn)一步闡明食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制和疾病進(jìn)展的影響因素。

1 材料與方法

1.1一般資料入組鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科2015年5月至2017年8月收治的食管癌患者120例，均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為食管鱗癌，其中男82例，女38例；年齡29～81歲，中位年齡59歲；分化程度：高分化50例，中分化43例，低分化27例；浸潤(rùn)纖維膜：無(wú)43例，有77例。TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期40例，Ⅲ期52例，Ⅳ期5例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無(wú)55例，有65例。同時(shí)收集60例癌旁正常食管黏膜組織標(biāo)本作為對(duì)照，其中男37例，女23例；年齡31～76歲，中位年齡57歲。

1.2免疫組化S-P法檢測(cè)食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達(dá)水平采用免疫組化S-P法檢測(cè)120例食管鱗癌和60例癌旁正常食管黏膜組織中MMP-3和LAPTM4B-35的蛋白表達(dá)，用試劑盒中已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。鼠抗人MMP-3和LAPTM4B-35抗體以及S-P免疫組化試劑盒等均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3免疫組化結(jié)果判斷每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡(×400)視野，對(duì)切片的染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例分別評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；染色強(qiáng)度：無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。然后將兩者評(píng)分的乘積作為最終積分，0分為(-)，1～3為(±)，4～6為(+)，7～12為(++)，其中前兩者為陰性，后兩者為陽(yáng)性。所有結(jié)果均由2位副主任醫(yī)師以上職稱的病理科醫(yī)生獨(dú)立評(píng)判，并進(jìn)行綜合。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，MMP-3和LAPTM4B-35的陽(yáng)性率等計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，MMP-3和LAPTM4B-35的陽(yáng)性率的相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)分析法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1食管鱗癌和癌旁正常食管黏膜組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達(dá)的比較食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的陽(yáng)性率分別為75.00%(90/120)、58.33%(70/120)，癌旁正常食管黏膜組織中分別為15.00%(9/60)、10.00%(6/60)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.2食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達(dá)與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系食管鱗癌組織中MMP-3的表達(dá)與浸潤(rùn)纖維膜與否、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否有關(guān)(P均<0.05)。食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的表達(dá)與浸潤(rùn)纖維膜與否、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1 食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達(dá)與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達(dá)的相關(guān)性食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.488，P<0.001)。見表2。

表2 食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35表達(dá)的相關(guān)性 n

注：r=0.488，P<0.001

3 討論

食管癌是我國(guó)高發(fā)的消化道惡性腫瘤之一，早期食管癌無(wú)特異性癥狀，不易檢出，一旦確診則已處于中晚期，失去了徹底治愈的機(jī)會(huì)，而對(duì)于高發(fā)地區(qū)的食管拉網(wǎng)式活檢方法雖能提高檢出率，但是并不適用于大面積的體檢人群。因此，進(jìn)一步闡明食管癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，提高食管癌的早期診斷率，爭(zhēng)取做到早診早治，進(jìn)而減少因食管癌死亡人數(shù)成為了當(dāng)今食管癌研究的熱點(diǎn)之一。

食管癌的侵襲轉(zhuǎn)移是其惡性生物學(xué)行為的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)。MMPs屬于細(xì)胞外基質(zhì)和基底細(xì)胞膜的主要降解蛋白，多數(shù)MMPs的高表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)和基底細(xì)胞膜的降解，從而使惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移屏障清除，細(xì)胞間的粘附能力下降，惡性腫瘤細(xì)胞更容易向周圍或遠(yuǎn)處移動(dòng)，進(jìn)而形成腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等[5]。MMP-3能夠降解層粘連蛋白、酪蛋白、纖粘蛋白等多種糖蛋白，廣泛參與多種腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、周圍浸潤(rùn)和易感性[6]。本研究結(jié)果顯示，食管鱗癌組織中MMP-3的陽(yáng)性率為75.00%(90/120)，高于癌旁正常食管黏膜組織的15.00%(9/60)。食管鱗癌組織中MMP-3的表達(dá)與浸潤(rùn)纖維膜與否、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否有關(guān)。LAPTM4B的基因定位于人類染色體的8q22.1，包含7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，全長(zhǎng)50 kb，共有2 245個(gè)核苷酸。其表達(dá)產(chǎn)物包括LAPTM4B-24和LAPTM4B-35等2個(gè)亞型。其中LAPTM4B-35的過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖。分化、遷移、侵襲，并能夠抑制細(xì)胞的凋亡。研究證實(shí)LAPTM4B-35的過(guò)表達(dá)與肝癌[7]。胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。張靜怡等[8]研究發(fā)現(xiàn)，LAPTM4B-35在胃癌的遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮了重要的促進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示，食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的陽(yáng)性率為58.33%(70/120)，高于癌旁正常食管黏膜組織的10.00%(6/60)。食管鱗癌組織中LAPTM4B-35的表達(dá)與浸潤(rùn)纖維膜與否、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)。另外，我們通過(guò)用Spearman相關(guān)分析還發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.488，P<0.001)。

綜上所述，食管鱗癌組織中MMP-3和LAPTM4B-35具有較高的陽(yáng)性表達(dá)水平，且兩者可能與食管鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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