乙醇對(duì)法夫酵母發(fā)酵合成蝦青素的影響

劉春利，沈?qū)幯啵咻x, 2, 3, 4，李利君, 2, 3, 4，陳艷紅, 2, 3, 4，肖安風(fēng), 2, 3, 4*

1(集美大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，福建 廈門(mén)，361021)2(福建省食品微生物與酶工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門(mén)，361021)3(福建省海洋功能食品工程技術(shù)研究中心，福建 廈門(mén)，361021)4(廈門(mén)市海洋功能食品重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門(mén)，361021)

法夫酵母(Phaffiarhodozyma)中主要的類(lèi)胡蘿卜素是胞內(nèi)蝦青素，含量可達(dá)到40%～95%，且法夫酵母具有生長(zhǎng)周期短，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，能代謝多種碳源等優(yōu)勢(shì)，成為了天然蝦青素生產(chǎn)的主要研究對(duì)象[14,16]。法夫酵母可以利用乙醇作為碳源進(jìn)行生長(zhǎng)。YAMANE等[17]在細(xì)胞生長(zhǎng)的穩(wěn)定期添加0.3%的乙醇。GU等[18]在延遲期后期或?qū)?shù)生長(zhǎng)期添加0.2%的乙醇，均使色素產(chǎn)量提高了近1倍左右。汪洪濤等[19]針對(duì)不同的法夫酵母菌株，在培養(yǎng)基中添加乙醇，均能提高法夫酵母中蝦青素的含量。

在搖瓶條件下，易于考察各種營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)發(fā)酵過(guò)程的影響，從而篩選出適宜蝦青素生產(chǎn)的發(fā)酵條件。本試驗(yàn)對(duì)法夫酵母JMU-MVP14進(jìn)行了搖瓶培養(yǎng)，對(duì)比研究不同初始糖濃度與乙醇添加濃度對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)及蝦青素合成的影響，篩選出最利于蝦青素合成的乙醇濃度；然后，利用乙醇傳感器控制整個(gè)發(fā)酵過(guò)程維持在不同恒定乙醇濃度下，考察乙醇濃度對(duì)蝦青素合成的影響；并在此基礎(chǔ)上同時(shí)補(bǔ)加乙醇與葡萄糖，以蝦青素產(chǎn)量為指標(biāo)，得到最佳的乙醇補(bǔ)料方式。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

1.1.1菌種

法夫酵母PhaffiarhodozymaJMU-MVP14 菌株：用甲基磺酸乙酯對(duì)法夫酵母JMU-VDL668 菌株誘變，經(jīng)0.5%的雙氧水和紫外照射來(lái)淘汰低產(chǎn)的菌株選育得到[20]。

1.1.2培養(yǎng)基

種子培養(yǎng)基：4°Bx 麥汁，pH 6.0。

無(wú)碳源培養(yǎng)基(g/L)：取KH2PO42 g，(NH4)2SO45 g，CaCl20.2 g，MgSO40.5 g，酵母膏3 g，溶于1 L蒸餾水中，調(diào)pH為6.0。

法夫酵母搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖及乙醇的添加量如表1所示，其他成分組成和無(wú)碳源培養(yǎng)基相同。

表1　培養(yǎng)基中葡萄糖及乙醇的添加量Table 1　Glucose concentration and ethanol additionwithin medium

1.1.3主要試劑

蝦青素(色譜純)，Sigma公司；無(wú)水乙醇(分析純)，廣東化學(xué)試劑；3,5-二硝基水鹽酸，國(guó)藥集團(tuán)；酵母膏(優(yōu)級(jí)純)，廣東環(huán)凱；其他試劑均為分析純，購(gòu)于西隴化工。

1.2　實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備

ZHWY-2102雙層全溫培養(yǎng)搖床，上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；1260高效液相色譜儀，安捷倫(中國(guó))科技有限公司；SW-CJ-ZFD單面凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；S20K pH酸度計(jì)，梅特勒-托利多儀器有限公司；BS223S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；101-3B電熱鼓風(fēng)干熱箱，上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠；TD5M-WS臺(tái)式離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；LDZX-40KAS立式高壓蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；2600A紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，尤尼柯(上海)儀器有限公司；乙醇感受器，參考相關(guān)專(zhuān)利[21]，在某些結(jié)構(gòu)上進(jìn)行改良，自制了乙醇傳感器。

1.3　實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1培養(yǎng)方法

將PDA斜面活化的菌種接入種子培養(yǎng)基中，22 ℃培養(yǎng)2～3 d得1代種子，轉(zhuǎn)接1代種子到新配制的種子培養(yǎng)基為2代種子，轉(zhuǎn)接2代種子到搖瓶中，于22 ℃連續(xù)培養(yǎng)120 h，每24 h取樣檢測(cè)生物量、蝦青素產(chǎn)量及殘?zhí)呛?，用乙醇傳感器檢測(cè)乙醇質(zhì)量濃度。

1.3.2生物量的測(cè)定

1.3.3蝦青素含量的測(cè)定

二甲基亞砜(DMSO)法破壁[23-24]：取5 mL發(fā)酵液離心2次后去上清液得到菌體。將菌體于55 ℃下預(yù)熱5 min后，加入2 mL已預(yù)熱至75 ℃的二甲基亞砜，充分振蕩后加入5 mL乙醇提取色素，離心得到色素提取液，乙醇定容至10 mL。

紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)[25]：配制不同濃度梯度的蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品，在紫外光波長(zhǎng)為474 nm下檢測(cè)，繪制出蝦青素標(biāo)準(zhǔn)曲線。相同條件下，測(cè)定發(fā)酵樣品吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品中的蝦青素含量。

1.3.4發(fā)酵液中殘?zhí)堑臏y(cè)定

3,5-二硝基水楊酸法(DNS)[26]：1 mL的發(fā)酵上清液稀釋至適宜濃度，加入0.6 mL的DNS，沸水浴10 min后立即冷卻，用蒸餾水定容至5 mL，使用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)為520 nm下測(cè)定。

1.3.5發(fā)酵液中乙醇質(zhì)量濃度的測(cè)定

將配制好的2 g/L的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋后分裝于相同規(guī)格的50 mL離心管中，每管5 mL，用于測(cè)定乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線。于室溫22 ℃下，乙醇傳感器1提前預(yù)熱30 min，待讀數(shù)為0，將傳感器感應(yīng)端置于離心管樣品液面上0.5 cm處，秒表計(jì)時(shí)50 s后讀數(shù)。取出傳感器感應(yīng)端置于空氣中，待讀數(shù)為0后測(cè)定下一個(gè)樣品。

1.3.6二次參數(shù)的計(jì)算

2　結(jié)果與討論

2.1　不同初始糖濃度時(shí)添加乙醇對(duì)發(fā)酵的影響

分別在10 g/L和20 g/L兩種葡萄糖濃度發(fā)酵培養(yǎng)基中添加不同濃度乙醇，考察乙醇對(duì)搖瓶培養(yǎng)法夫酵母JMU-MVP14的細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素合成的影響。乙醇會(huì)對(duì)法夫酵母和蝦青素合成產(chǎn)生影響。

2.1.1初始葡萄糖質(zhì)量濃度為10 g/L時(shí)添加乙醇對(duì)發(fā)酵的影響

以無(wú)碳源培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加10 g/L的葡萄糖，乙醇的添加濃度如表1所示?？疾煸谳^低糖濃度下，不同乙醇濃度對(duì)法夫酵母整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖的消耗、細(xì)胞生長(zhǎng)、蝦青素的積累及乙醇濃度的變化情況如圖1所示。

□-不添加乙醇；■-添加1 g/L乙醇；△-添加2 g/L；▲-添加5 g/L乙醇；●-添加20 g/L乙醇圖1　初始葡萄糖質(zhì)量濃度為10 g/L時(shí)添加乙醇對(duì)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵的影響Fig. 1　The effect of ethanol addtion on astaxanthin production by P. rhodozyma JMU-MVP14 at the initial concentration of10 g/L glucose

由圖1-a可知，添加0～5 g/L的乙醇培養(yǎng)條件下，生物量曲線變化趨勢(shì)基本一致，發(fā)酵至48 h達(dá)到穩(wěn)定期，48 h以后基本不變，且與對(duì)照組(不添加乙醇)相比，添加0～5 g/L的乙醇對(duì)法夫酵母JMU-MVP14生物量影響差別不顯著。從圖1-b可看出，對(duì)照組蝦青素產(chǎn)量在72 h達(dá)到最大，72 h后蝦青素產(chǎn)量保持穩(wěn)定，但添加乙醇后，法夫酵母在72 h后蝦青素產(chǎn)量進(jìn)一步提高。當(dāng)添加乙醇的質(zhì)量濃度為2 g/L和5 g/L時(shí)，蝦青素質(zhì)量濃度均達(dá)到最高水平40.0 mg/L，比對(duì)照組顯著提高了70%，且此時(shí)蝦青素細(xì)胞產(chǎn)率分別達(dá)到了10.0 mg/g和11.3 mg/g，與陳鋒等[27]的研究結(jié)果一致。

結(jié)合圖1-c和圖1-d，與對(duì)照組相比，添加1～2 g/L的乙醇時(shí)，酵母消耗葡萄糖的速度加快，且發(fā)酵至24 h，酵母不再消耗葡萄糖，開(kāi)始使用乙醇，葡萄糖最終利用率均能達(dá)到78.0%，乙醇最終利用率達(dá)到80.0%；而添加5 g/L的乙醇，酵母發(fā)酵48 h后，才開(kāi)始利用乙醇，乙醇最終利用率為93.4%，葡萄糖最終利用率只有68.2%。由此推測(cè)，在葡萄糖和乙醇共同存在的情況下，法夫酵母優(yōu)先利用葡萄糖生長(zhǎng)，再利用乙醇，且乙醇能替代葡萄糖作為碳源使酵母產(chǎn)蝦青素，與HU等[28]的文獻(xiàn)報(bào)道一致。而當(dāng)培養(yǎng)基中乙醇的質(zhì)量濃度增至20 g/L時(shí)，法夫酵母生長(zhǎng)至24 h就停止生長(zhǎng)，對(duì)葡萄糖的利用率降低，發(fā)酵結(jié)束后，生物量質(zhì)量濃度和蝦青素質(zhì)量濃度同對(duì)照組相比差異顯著，分別降低至對(duì)照組的27%和14%。說(shuō)明添加低濃度的乙醇可以促進(jìn)法夫酵母產(chǎn)蝦青素，而添加較高濃度乙醇抑制酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)和蝦青素的積累。

2.1.2初始葡萄糖質(zhì)量濃度為20 g/L時(shí)添加乙醇對(duì)發(fā)酵的影響

在較低糖濃度時(shí)，當(dāng)添加2 g/L和5 g/L乙醇時(shí)，蝦青素產(chǎn)量均達(dá)到最高，且與對(duì)照組相比，添加1～2 g/L質(zhì)量濃度的乙醇，酵母消耗葡萄糖量的速度加快，因此將培養(yǎng)基中初始葡萄糖質(zhì)量濃度提高為20 g/L，其他培養(yǎng)條件不變時(shí)，進(jìn)一步考察在較高糖濃度下添加乙醇對(duì)法夫酵母JUM-MVP14發(fā)酵過(guò)程中細(xì)胞生長(zhǎng)、蝦青素合成、乙醇利用等方面的影響。結(jié)果如圖2所示。

如圖2-a所示，添加1～2 g/L的乙醇促進(jìn)了細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素的積累。且添加1 g/L的乙醇使得生物量較對(duì)照組提高了18%。從蝦青素質(zhì)量濃度曲線圖2-b可看出，添加1 g/L的乙醇，發(fā)酵至120 h，蝦青素質(zhì)量濃度為42.0 mg/L，比對(duì)照組顯著提高了26.9%，此時(shí)乙醇的最終利用率為84.0%，蝦青素細(xì)胞產(chǎn)率為10.5 mg/g，比對(duì)照組提高了7.1%。本試驗(yàn)結(jié)果與肖安風(fēng)等[29]的研究發(fā)現(xiàn)一致，乙醇作為糖代謝途徑中的相關(guān)產(chǎn)物，可為蝦青素合成提供更多的乙酰輔酶A，從而提高了蝦青素的產(chǎn)量。

□-不添加乙醇；■-添加1 g/L乙醇；△-添加2 g/L；▲-添加5 g/L乙醇；○-添加10 g/L乙醇；●-添加20 g/L乙醇圖2　初始葡萄糖質(zhì)量濃度為20 g/L時(shí)添加乙醇對(duì)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵的影響Fig. 2　The effect of ethanol addtion on astaxanthin production by P. rhodozyma JMU-MVP14 at the initial concentration of20 g/L glucose

從殘?zhí)呛康淖兓闆r發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，細(xì)胞代謝旺盛，對(duì)碳源的需求增大，從而殘?zhí)呛垦杆傧陆担?2 h之后，菌體生長(zhǎng)趨于穩(wěn)定，糖含量下降速度明顯減緩。其中，添加1 g/L乙醇顯著提高了法夫酵母JUM-MVP14對(duì)葡萄糖的利用率，可達(dá)75.0%(比對(duì)照組顯著提高了36.4%)，加快了其對(duì)葡萄糖的代謝，產(chǎn)生更多的乙酰輔酶A[29]，為蝦青素的合成提供原料，從而進(jìn)一步闡明低濃度乙醇能促進(jìn)法夫酵母蝦青素合成。但和初始葡萄糖濃度為10 g/L時(shí)相比，酵母對(duì)葡萄糖的利用率明顯降低，且蝦青素的產(chǎn)量卻無(wú)顯著提高。

2.2　控制恒定乙醇的濃度及補(bǔ)加葡萄糖對(duì)發(fā)酵的影響

由2.1的試驗(yàn)結(jié)果可知，乙醇能顯著促進(jìn)法夫酵母JMU-MVP14菌株細(xì)胞生長(zhǎng)及蝦青素的合成，為進(jìn)一步研究乙醇在整個(gè)法夫酵母發(fā)酵周期中對(duì)蝦青素合成的影響，采用乙醇傳感器實(shí)時(shí)在線檢測(cè)乙醇濃度，發(fā)酵過(guò)程補(bǔ)加乙醇,使整個(gè)發(fā)酵周期中乙醇能維持在一個(gè)恒定的濃度。

2.2.1控制恒定乙醇的濃度對(duì)發(fā)酵的影響

在較高葡萄糖濃度環(huán)境中，法夫酵母對(duì)糖的利用率降低，且蝦青素的產(chǎn)量沒(méi)有明顯提高。因此用初始葡萄糖質(zhì)量濃度為10 g/L的培養(yǎng)基，空白組設(shè)為只添加2 g/L的乙醇，實(shí)驗(yàn)組用乙醇傳感器檢測(cè)乙醇濃度在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中維持2 g/L。考察恒定乙醇補(bǔ)料策略對(duì)法夫酵母整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中生物量、殘?zhí)?、蝦青素產(chǎn)量等發(fā)酵參數(shù)的變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。

由圖3-a可知，乙醇持續(xù)補(bǔ)加，JMU-MVP14菌株的細(xì)胞生長(zhǎng)至后期，其生物量提高了，說(shuō)明此菌株可利用乙醇來(lái)合成自身的物質(zhì)，即達(dá)到穩(wěn)定期后仍可利用乙醇繼續(xù)生長(zhǎng)，與HU等[28]文獻(xiàn)報(bào)道一致。在酵母培養(yǎng)過(guò)程中控制恒定乙醇濃度，從24 h開(kāi)始蝦青素合成量呈對(duì)數(shù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，發(fā)酵至120 h蝦青素質(zhì)量濃度為50.1 mg/L，比對(duì)照組提高了20.3%。從圖3-c可知，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組葡萄糖的利用率均能達(dá)到77.2%以上。結(jié)合圖3-d可以看出，乙醇提高了單位細(xì)胞內(nèi)蝦青素的產(chǎn)量(13.1 mg/g)，比對(duì)照組(12.2 mg/g)提高了7.4%，進(jìn)而從總體上提高了JMU-MVP14菌株的蝦青素合成能力。說(shuō)明恒定乙醇控制策略更有利于法夫酵母蝦青素的合成。

2.2.2控制恒定乙醇濃度并補(bǔ)加葡萄糖對(duì)JMU-MVP14發(fā)酵的影響

前期的研究結(jié)果表明，在較低糖質(zhì)量濃度(10 g/L)培養(yǎng)基中，添加乙醇，蝦青素質(zhì)量濃度達(dá)到最高水平40.0 mg/L，在高糖質(zhì)量濃度(20 g/L)培養(yǎng)基中，添加乙醇，蝦青素質(zhì)量濃度為42.0 mg/L，后者比前者多了5%，說(shuō)明乙醇對(duì)法夫酵母產(chǎn)蝦青素的作用與葡萄糖濃度密切相關(guān)。故以無(wú)碳源培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加10 g/L的葡萄糖，設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即只補(bǔ)加葡萄糖、只補(bǔ)加乙醇、同時(shí)補(bǔ)加葡萄糖和乙醇，空白對(duì)照只添加2 g/L的乙醇，同時(shí)不補(bǔ)加乙醇也不補(bǔ)加葡萄糖，考察乙醇及葡萄糖的搖瓶補(bǔ)料策略對(duì)法夫酵母整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中生物量、殘?zhí)恰⑽r青素產(chǎn)量等發(fā)酵參數(shù)的變化情況。試驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。

□-對(duì)照組；■-添加乙醇的實(shí)驗(yàn)組圖3　控制恒定乙醇濃度對(duì)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵的影響Fig. 3　Fermentation curves of P. rhodozyma JMU-MVP14 at the constant concentration of 2 g/L ethanol

□-對(duì)照組；■-只補(bǔ)加乙醇的實(shí)驗(yàn)組；△-只補(bǔ)加葡萄糖的實(shí)驗(yàn)組；▲-補(bǔ)加乙醇和葡萄糖的實(shí)驗(yàn)組圖4　乙醇補(bǔ)料策略對(duì)法夫酵母JMU-MVP14發(fā)酵的影響Fig.4　The effect of fermentation parameters in fed-batch process with ethanol by P. rhodozyma JMU-MVP14 inshaking flask fermentation

在搖瓶發(fā)酵的3種補(bǔ)料方式中，將乙醇質(zhì)量濃度控制在2 g/L左右，對(duì)法夫酵母JMU-MVP14細(xì)胞生長(zhǎng)最有利，生物量質(zhì)量濃度最大為3.2 g/L。而在只補(bǔ)加葡萄糖的情況下對(duì)法夫酵母細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用。結(jié)合發(fā)酵液殘?zhí)堑淖兓€可知，每24 h補(bǔ)加5 g/L葡萄糖并未被法夫酵母JMU-MVP14菌株所利用，而是在發(fā)酵液中累積，從而造成發(fā)酵液中葡萄糖的濃度升高。且每24 h補(bǔ)加葡萄糖，較對(duì)照組并未使菌體的生物量增加，但促進(jìn)了蝦青素的合成，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相一致，高C/N導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)減慢，但有利于蝦青素的積累[30]。法夫酵母JMU-MVP14菌株的3種補(bǔ)料方式中，從蝦青素質(zhì)量濃度變化曲線可知，乙醇和葡萄糖的補(bǔ)加能都促進(jìn)蝦青素的合成，以控制恒定2 g/L乙醇質(zhì)量濃度并每24 h補(bǔ)加5 g/L葡萄糖的培養(yǎng)條件下，蝦青素產(chǎn)量達(dá)到最大值55.3 mg/L，與對(duì)照組比顯著提高44.4%，比只補(bǔ)加乙醇顯著提高了17.4%。圖4-d表明：同時(shí)補(bǔ)加乙醇和葡萄糖，法夫酵母在發(fā)酵120 h其蝦青素細(xì)胞產(chǎn)率為19.7 mg/g，比對(duì)照組(14.1 mg/g)顯著提高，達(dá)到39.7%，比只補(bǔ)加葡萄糖(17.7 mg/g)提高了11.3%，比只補(bǔ)加乙醇16.3 mg/g提高了20.9%。由此可知，同時(shí)補(bǔ)加葡萄糖和乙醇有利于法夫酵母JMU-MVP14菌株細(xì)胞內(nèi)蝦青素的合成。

3　結(jié)論

考察乙醇對(duì)高產(chǎn)蝦青素的法夫酵母菌株JMU-MVP14合成蝦青素的影響，在10 g/L和20 g/L兩種葡萄糖質(zhì)量濃度下，向培養(yǎng)基中添加1 g/L和2 g/L的乙醇時(shí)，均可提高蝦青素的產(chǎn)量；而添加20 g/L的乙醇時(shí)，則會(huì)抑制法夫酵母的細(xì)胞生長(zhǎng)和蝦青素的產(chǎn)生。在法夫酵母培養(yǎng)基中初始葡萄糖質(zhì)量濃度10 g/L的條件下，通過(guò)補(bǔ)加乙醇控制發(fā)酵液中乙醇的質(zhì)量濃度恒定為2 g/L，蝦青素質(zhì)量濃度為50.1 mg/L，比只在發(fā)酵初始階段添加2 g/L的乙醇，蝦青素質(zhì)量濃度提高了20.3%，蝦青素細(xì)胞產(chǎn)率提高了7.4%，說(shuō)明恒定乙醇控制策略更有利于法夫酵母蝦青素的合成。在較低糖質(zhì)量濃度(10 g/L)培養(yǎng)基中，添加乙醇，蝦青素質(zhì)量濃度最高水平達(dá)到40.0 mg/L，在高糖質(zhì)量濃度(20 g/L)培養(yǎng)基中，添加乙醇，蝦青素質(zhì)量濃度達(dá)到42.0 mg/L，后者比前者多了5%，說(shuō)明乙醇對(duì)法夫酵母產(chǎn)蝦青素的作用與葡萄糖質(zhì)量濃度密切相關(guān)。以10 g/L的葡萄糖質(zhì)量濃度為初始培養(yǎng)基，補(bǔ)料控制整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中乙醇質(zhì)量濃度為2 g/L，并每24 h補(bǔ)加5 g/L葡萄糖，蝦青素產(chǎn)量顯著提高，最大值為55.3 mg/L，比對(duì)照組提高了44.4%，比只補(bǔ)加乙醇提高了17.4%；并且法夫酵母在發(fā)酵120 h其蝦青素細(xì)胞產(chǎn)率為19.7 mg/g，比對(duì)照組(14.1 mg/g)提高了39.7%，比只補(bǔ)加葡萄糖(17.7 mg/g)提高了11.3%，比只補(bǔ)加乙醇16.3 mg/g提高了20.9%。由此可知，同時(shí)補(bǔ)加葡萄糖和乙醇有利于法夫酵母JMU-MVP14菌株細(xì)胞內(nèi)蝦青素的合成。但是每24 h補(bǔ)加5 g/L葡萄糖并未被法夫酵母JMU-MVP14菌株所利用，而是在發(fā)酵液中累積，從而造成葡萄糖最終利用率降低，因此后續(xù)試驗(yàn)，繼續(xù)對(duì)法夫酵母產(chǎn)蝦青素發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖補(bǔ)加的量和時(shí)間進(jìn)行條件優(yōu)化。

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