中草藥益生菌復合制劑對生長豬血液常規(guī)、血清生化和血清免疫指標的影響

段明房， 胡紅偉， 閆凌鵬，麻嘯濤，楊京娥，黨亞朋， 李自茹， 趙　帥，周振紅

（1.山西大禹生物工程股份有限公司，山西芮城044600；2.平陸縣宏遠養(yǎng)豬專業(yè)合作社，山西平陸044300）

中草藥用于動物保健，具有在動物體內(nèi)及其產(chǎn)品中無毒副殘留，對機體不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢（王冉，2015），同時中草藥資源豐富，使用成本不高。蒲公英和魚腥草均為藥食同源藥材，且具有清熱解毒、抗菌、抗炎的功效。蒲公英中的多種活性成分，如綠原酸、糖類、膽堿以及皂苷等，具有顯著抑菌、抑制腫瘤、抗氧化、抵抗炎癥等功效（林云等，2011；Budzianowski等，1997）， 而且能夠明顯地促進胃腸蠕動和泌乳 （劉杰等，2010；李玲等，1998）。魚腥草和蒲公英類似，性辛，味微寒，具有清熱解毒、消癰排膿和利尿通淋等功效（孫謙等，2014）。研究報道，切除脾臟小鼠灌胃魚腥草素能增強腹腔巨噬細胞的吞噬功能，提高血清溶血素水平，表明魚腥草素可以增強脾切除致免疫功能低下小鼠的特異性、非特異性免疫功能（邵蘭等，1999）。劉志昌等（2015）研究表明，合成魚腥草素能提高肉雞免疫器官指數(shù)、血清中白細胞介素-2、4含量和抗體滴度。另外，大量研究表明，益生菌具有提高動物免疫器官指數(shù)，增強血液免疫因子的活性，加強動物機體綜合免疫能力的作用（劉輝等，2015；劉虎傳等，2012）。但中草藥和益生菌共同作用對動物機體免疫影響的報道較少，因此本研究以蒲公英和魚腥草等中草藥材為主體，復配益生菌，研究復合制劑對生長豬血液常規(guī)、血清生化和血清免疫指標的影響，為中草藥和益生菌的綜合開發(fā)提供一定參考。

1　材料與方法

1.1試驗材料中草藥益生菌復合制劑 （活抗，HK）由山西大禹生物工程股份有限公司生產(chǎn)。HK是以蒲公英（62%）、魚腥草（23%）等中草藥材細粉碎以后與糞腸球菌、枯草芽孢桿菌和酵母細胞壁多糖等混合而成。除中草藥材以外產(chǎn)品主要成分及衛(wèi)生指標見表1。

1.2試驗設(shè)計試驗選取體重為 （55±5）kg的健康杜×長×大三元雜交豬100頭，隨機分為對照組和試驗組兩組，每組5個重復，每個重復10頭豬。對照組飼喂玉米豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗組在每1000 kg基礎(chǔ)日糧中加入3 kg HK。飼養(yǎng)管理按照試驗場日常管理進行，試驗周期40 d。

表1　HK主要組成成分及衛(wèi)生指標

試驗結(jié)束當天，每個重復隨機選 1頭豬，共10頭豬，前腔靜脈采血，先用普通真空采血管采血 5 mL（3500 r/min離心 5 min，分離血清，保存在-20℃ 冰箱），用于測定血清指標，然后用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管采血5 mL，用于血液常規(guī)指標檢測。

基礎(chǔ)日糧參考中國豬飼養(yǎng)標準 （NY/T 65-2004）中的生長育肥豬標準設(shè)計，日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2　日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

1.3指標測定及方法

1.3.1血常規(guī)指標、血清生化指標檢測樣品送至芮城縣中醫(yī)院檢測。

白細胞、淋巴細胞、中間細胞、粒細胞、淋巴細胞百分比、中間細胞百分比、粒細胞百分比、紅細胞、血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白含量、紅細胞平均體積、紅細胞分布寬度CV、紅細胞分布寬度SD、紅細胞壓積、血小板、血小板平均體積、血小板分布寬度、血小板壓積、大血小板比率用全自動血液細胞分析儀檢測。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比、尿素氮、葡萄糖、鈣用全自動生化分析儀檢測。

1.3.2血清免疫指標檢測免疫球蛋白A、M、G，α-腫瘤壞死因子 （TNF-α）、β-干擾素 （IFN-β）、CD3、CD4、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-6（IL-6）用 ELISA 方法檢測，試劑盒由上海紀寧實業(yè)有限公司提供；酶標儀（Multiskan FC）為賽默飛世爾科技（中國）有限公司生產(chǎn)。

1.4統(tǒng)計分析采用Excel和SAS 9.0對數(shù)據(jù)進行計算和方差分析。

2　試驗結(jié)果與分析

2.1HK對生長豬血常規(guī)指標的影響從表3可知，在生長豬飼料中添加HK后血小板壓積顯著下降了48.20%（P＜0.05），但是對其他血常規(guī)指標沒有顯著性影響。

表3　HK對生長豬血常規(guī)指標的影響

2.2HK對生長豬血清生化指標的影響從表4可知，生長豬飼料中添加HK組血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和白蛋白濃度提高58.58%和13.80%（P＜0.01）；血清白球比顯著提高 19.40%（P＜0.05）；但是血清葡萄糖濃度顯著下降了21.24%（P＜0.05）。然而對其他指標沒有顯著影響。

表4　HK對生長豬血清生化指標的影響

2.3HK對生長豬血清免疫指標的影響從表5可知，在生長豬飼料中添加HK后，血清中免疫球蛋白M含量提高了15.27%（P＜0.05）；白細胞介素-4、白細胞介素-6、β-干擾素的含量分別極顯著提高了 33.32%、33.30%、76.77%（P ＜ 0.01）；但是血清中CD3含量顯著降低了 11.19%（P＜0.05）。另外，其他指標兩組之間差異不顯著。

表5　HK對生長豬血清免疫指標的影響

3　討論

3.1HK對生長豬血常規(guī)指標的影響血液中各種生化組分是新陳代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量的變化可反映動物機體內(nèi)新陳代謝機能和生理活動的規(guī)律。影響這些指標變化的因素也很多，例如，運動、飲食、疾病以及一些藥物等。

研究表明，藥物在消化道消化吸收后，可通過血液循環(huán)輸送到各臟器以及組織，藥物的功能組分可以利用影響造血功能、激素分泌及直接破壞血細胞等方式致使血細胞數(shù)量或形態(tài)改變，而且有些是可逆的（王付等，2015）。血小板在身體正常狀態(tài)下的數(shù)量及形態(tài)分布變化較小，其功能主要表現(xiàn)在止血、血栓形成、傷口閉合、炎癥發(fā)生等方面。胡興義等（2017）研究證實，給哺乳仔豬灌服復合益生菌制劑可以顯著提高血小板壓積（PCT），但血小板平均體積（MPV）和血小板總數(shù)（PLT）雖有提升趨勢，但差異不顯著。由于PCT＝MPV×PLT，因此PCT變化應(yīng)該是PLT或MPV變化所致，本試驗結(jié)果表明，生長豬飼料中添加HK后，顯著降低了PCT，但PLT或MPV變化不顯著，而且對其他血常規(guī)指標均沒有顯著性影響。因此，HK導致的PCT變化對動物機體實質(zhì)性影響還需進一步研究。

3.2HK對生長豬血清生化指標的影響血液生化指標可以反映動物各組織器官的功能狀態(tài)、營養(yǎng)代謝水平和生產(chǎn)性能?？偟鞍?、球蛋白、白蛋白、白球比、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等指標主要可反映機體的肝功能健康狀況；尿素氮可反映機體腎功能健康狀態(tài)和蛋白質(zhì)代謝狀況。血清白蛋白的生理功能主要體現(xiàn)在維持膠體滲透壓，體內(nèi)代謝物質(zhì)運輸、免疫、修復受損組織等方面，而且血清白蛋白含量與動物生長速度呈正相關(guān)（周洪松等，1994）。血清球蛋白含量反映了動物機體的免疫水平。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是廣泛存在于動物線粒體中的重要氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，其活性變化可以反映肝細胞和心臟細胞受損傷程度。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶可參與機體蛋白質(zhì)新陳代謝的酶，可以促進機體內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸轉(zhuǎn)化。機體未受到損傷時，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度很低，且非常靈敏。當心臟和肝臟組織細胞受損時，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶大量進入血清，因此活性升高。但一般認為，當乙肝患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高到正常值上限的2倍以上時才有診斷價值 （呂學琴等，2012）。

研究發(fā)現(xiàn)，魚腥草和蒲公英均具有抗炎作用，能夠有效減輕機體損傷（陳婧等，2014；杜軍英等，2012）。然而本試驗中，添加HK后，豬血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著提高了58.58%，但沒達到對照組上限的2倍，說明這種變化是非病理性的，原因可能是中草藥和益生菌共同作用促進了丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶分泌。另外，血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著提高能夠促進氨基酸代謝，進而提高蛋白質(zhì)合成的速率，同時白蛋白和白球比水平均顯著提高，進一步說明了HK可以促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收利用。然而，血糖濃度顯著下降了21.24%，原因可能是蒲公英和魚腥草能夠阻礙胰島素生成以及抑制腸道中葡萄糖吸收，進而導致了血糖濃度有所降低（李雪石等，2013；趙堅華等，2010；劉艷旭等，2010）。總之，在生長豬飼料中添加HK后可以促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

3.3HK對生長豬血清免疫指標的影響體液免疫是機體特異性免疫的一個重要組成部分，抗體對病原及毒素清除、免疫調(diào)節(jié)、吞噬功能等作用均與免疫球蛋白含量成正相關(guān)關(guān)系。血清中Ig A、Ig G、Ig M含量的多少決定機體體液免疫水平。Ig M主要由B細胞產(chǎn)生，是B細胞表面表達分泌最早的抗體，而且在機體早期免疫防護中起重要作用（楊帆等，2011；Nordtveit等，1994）。楊銳等（2013）研究證實，生長肉兔日糧中添加蒲公英多糖可以提高免疫蛋白M、G含量。另外，研究表明益生菌也具有提高豬免疫水平功效，在豬日糧中添加益生菌可以顯著提高免疫球蛋白A、M和G含量（劉輝等，2015；王博等，2015；劉虎傳等，2012）。本試驗中，添加HK顯著提高了免疫蛋白M的濃度，可能是由于魚腥草和蒲公英中魚腥草素、綠原酸、多糖等活性成分具有一定的免疫調(diào)節(jié)能力，協(xié)同酵母細胞壁多糖（Shen等，2009），益生菌及其代謝物共同作用動物機體，從而提高了免疫蛋白M的含量。

CD3和CD4分子均是T細胞重要的表面標志，也是T細胞系發(fā)揮作用的最早信號（Edward等，1996）。因此CD3和CD4分子含量可以間接反映機體的細胞免疫水平。CD3＋、CD4＋T淋巴細胞在輔助B淋巴細胞免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)、自身免疫、超敏反應(yīng)、調(diào)節(jié)炎癥和抗腫瘤等方面發(fā)揮著重要作用（Swain 等，2012；李曉英等，2012；Zhu等，2008； Nurieva等，2008；Veldhoen 等，2008）。 研究表明，添加蒲公英多糖，可以提升雞血液T淋巴細胞表達和CD4＋T淋巴細胞水平（王坤等，2014；陳文英等，2011）。另外，黃俊文等（2005）在斷奶仔豬使用甘露寡糖和納豆菌復合制劑，顯著提高了CD3＋、CD4＋T淋巴細胞含量。然而本試驗在生長豬飼料中添加HK后顯著降低了CD3含量，而CD4分子沒有顯著性變化，可能與中草藥使用量和益生菌種類有關(guān)，機理需要進一步研究。

細胞因子在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。IL-2主要促進T細胞增殖、介導細胞免疫和炎癥反應(yīng)。IL-4和IL-6具有刺激B細胞生長增殖，產(chǎn)生免疫球蛋白，從而促進體液免疫應(yīng)答功能（Smith等，2013；Diehl等，2000），同時能夠抑制 Th1型細胞的分化而促進Th2型細胞分化，起免疫抑制的作用。干擾素是機體受到滅活的或活的病毒作用于易感細胞后，由易感細胞基因組編碼而產(chǎn)生的一種多功能活性糖蛋白。IFN-β可以通過抑制某些病毒的吸附、脫殼、轉(zhuǎn)錄、釋放等不同環(huán)節(jié)來起到抗病毒作用。炎癥和免疫是機體對外界刺激的兩種不同機理的應(yīng)答，兩者雖然開始時間不同，但在炎癥發(fā)生的部位、細胞、分子水平上是密切結(jié)合、共同作用的。魚腥草、蒲公英等中草藥對免疫調(diào)節(jié)是個雙向過程，既具有促進抗體分泌，提高免疫功效，又可以抑制炎癥的發(fā)生 （Du等，2012；杜軍英等，2012；Kim等，2009）。本試驗結(jié)果表明HK可顯著提高血清中IL-4、IL-6和IFN-β含量，說明HK具有促進B細胞分泌，抑制炎癥過度反應(yīng)的作用，又可以顯著提高血清中IFN-β含量，增強動物機體抗病毒的能力。總之，在生長豬飼料中添加HK后可以提高豬免疫力，而且具有雙向調(diào)節(jié)功能。

4　結(jié)論

在生長豬日糧中添加0.3%HK不僅對其血液常規(guī)沒有實質(zhì)影響，而且能夠促進營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化，提高動物免疫因子含量。

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