不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉多酚物質(zhì)含量及抗氧化活性研究

李曉英，薛 梅，樊汶樵，黃 科

（重慶文理學(xué)院a.林學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院；b.特色植物研究院，重慶 永川 402160）

藍(lán)莓（blueberry）在我國(guó)有著十分豐富的資源，目前重慶已有多處藍(lán)莓種植基地。藍(lán)莓葉作為藍(lán)莓種植的副產(chǎn)物具有巨大的開發(fā)利用價(jià)值。許多研究結(jié)果表明，藍(lán)莓葉中的酚類化合物具有抗氧化、抑菌、改善血液循環(huán)、生物防御[1-3]諸多生物活性，其風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值均高[4-6]，其多酚含量及部分抗氧化性能均高于其果實(shí)，可作為茶飲用，亦可入藥[7-8]，很多商家把藍(lán)莓葉直接烘干作為茶出售，亦有人研制成保健茶[9]。Harris 等[10]利用高效液相色譜質(zhì)譜儀分析檢測(cè)矮叢藍(lán)莓根、莖、葉和果實(shí)中的酚類物質(zhì)，結(jié)果得出，藍(lán)莓葉提取物中的綠原酸含量最高，約為100 μg·mg-1；LI Chunyang等人[11]研究發(fā)現(xiàn)，兔眼藍(lán)莓葉的乙醇提取物中多酚類物質(zhì)含量較高，且抗氧化能力強(qiáng)于兔眼藍(lán)莓果；Turhan 等[12]對(duì)藍(lán)莓果和藍(lán)莓葉中的多酚含量進(jìn)行了比較分析，結(jié)果表明，藍(lán)莓葉中的多酚含量高于藍(lán)莓果，且藍(lán)莓葉多酚清除DPPH 自由基的能力和還原能力均強(qiáng)于藍(lán)莓果。Ehlenfeldt 等[13]對(duì)81 種藍(lán)莓的研究結(jié)果表明，藍(lán)莓葉中多酚的平均含量為44.80 mg·g-1，其對(duì)超氧自由基的清除能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）的平均值為490 μmol·g-1，遠(yuǎn)高于藍(lán)莓果實(shí)（其分別 為1.79 mg·g-1、15.9 μmol·g-1）。WANG S Y 等人[14]在對(duì)藍(lán)莓、樹莓、草莓和黑莓的果實(shí)和葉片的研究中發(fā)現(xiàn)，其葉片比果實(shí)均有更高的價(jià)值，果 實(shí) 中ORAC 值 的 范 圍 為35.0～162.1 μmol·g-1（干物質(zhì)），而葉片中ORAC 值的范圍為205.0～728.8 μmol·g-1（干物質(zhì)），隨著樹葉變得衰老，其ORAC 值和總酚含量均下降。

藍(lán)莓葉含水較多，對(duì)其開發(fā)利用必須在采摘后立即進(jìn)行干燥處理。微波干燥技術(shù)具有干燥速率大、生產(chǎn)效率高、清潔生產(chǎn)、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制等優(yōu)點(diǎn)，且不影響被干燥物料的色、香、味及有效成分，可起到滅酶、殺菌的作用，在需要干燥處理的各個(gè)生產(chǎn)領(lǐng)域越來(lái)越受到重視[15-16]。有關(guān)不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉的多酚含量及其功能活性方面的研究報(bào)道很少，國(guó)內(nèi)僅見到楊貴云等[17]對(duì)5、6月藍(lán)莓葉中總酚含量的比較研究報(bào)道，其研究結(jié)果表明，以乙醇提取法得到的總酚含量及其對(duì)DPPH 自由基的清除能力，5月大于6月（南金品種），而南大品種則與之相反；國(guó)外僅見Routray等[18]對(duì)北美高叢藍(lán)莓葉在不同生長(zhǎng)期其總酚、花青素的含量及抗氧化能力進(jìn)行了研究?；诖耍緦?shí)驗(yàn)在比較分析微波與傳統(tǒng)干燥法對(duì)藍(lán)莓葉總酚和總黃酮的影響情況的基礎(chǔ)上，采用較好的干燥方法對(duì)不同生長(zhǎng)時(shí)期采摘的藍(lán)莓葉進(jìn)行干燥處理，測(cè)定其酚類物質(zhì)的含量及抗氧化活性，以期為藍(lán)莓葉的適時(shí)采摘并進(jìn)一步綜合開發(fā)與利用，提高藍(lán)莓種植的經(jīng)濟(jì)價(jià)值提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)莓葉：南金3#（兔眼高叢藍(lán)莓），采自重慶市永川區(qū)五間種植基地。分別于5月初（新生枝條，長(zhǎng)出數(shù)十葉片）、6月底（花蕾開始凋謝，初見小果）、8月初（藍(lán)莓果實(shí)采摘之后）、9月底（當(dāng)年新枝生長(zhǎng)季末，葉片顏色發(fā)生改變）此4 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期采集無(wú)蟲蛀、無(wú)機(jī)械損傷、色澤鮮亮的新鮮藍(lán)莓葉，均平鋪為一層，分別采用自然干燥、微波干燥（微波輸出功率800 W，每次干燥1 min，間歇干燥10 次）、常規(guī)熱風(fēng)干燥（鼓風(fēng)，溫度50 ℃）方法處理樣品，至其含水量均低于8%時(shí)，粉碎后過(guò)60 目篩，密封，置于-80 ℃的冰箱中保藏。使用前，將樣品置于干燥器中平衡過(guò)夜。

蘆丁、沒食子酸（純度在95%以上），美國(guó)Sigma 公司；VC標(biāo)準(zhǔn)品、DPPH，上海金穗生物科技有限公司；2,4,6-三吡啶基三嗪（TPTZ），南京都來(lái)生物有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

FA2104 電子天平，上海精科天平有限公司；RZ-50 高速微量離心機(jī)，長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司；RRH-200 型高速多功能粉粹機(jī)，上海緣沃工貿(mào)有限公司；754 型紫外可見分光光度計(jì)，上海舜宇恒平開學(xué)儀器有限公司。

1.3 方 法

1.3.1 藍(lán)莓葉醇提物（ethanol extraction of blueberry leaf，EEBL）的制備

稱取0.5 g 左右藍(lán)莓葉粉末（精確到0.001 g），以料液比為1 ∶100（m∶V）的比例，分別加入50 mL 酸化甲醇水溶液（VHCl∶V70%甲醇＝0.1 ∶100.0），在40 ℃條件下水浴超聲提取30 min，放冷，用70%的酸化乙醇補(bǔ)足減輕的質(zhì)量。以4 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清濾紙過(guò)濾后即得10 mg·mL-1（以藍(lán)莓葉質(zhì)量計(jì)的醇提物質(zhì)量濃度）的醇提物，裝入棕色瓶中，于4 ℃條件下保存以備用。

1.3.2 總酚含量的測(cè)定

參照（有所改進(jìn)）Cai Yizhong 等人[19]的福林-酚法進(jìn)行測(cè)定。分別取樣液1 mL，加入1 mL 的福林-酚試劑，用7.5%的碳酸鈉水溶液定容至25 mL，混勻后在室溫條件下靜置4 min，在暗處放置2 h 后，取上清液，然后用分光光度計(jì)在750 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下測(cè)定吸光度，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下，結(jié)果以沒食子酸當(dāng)量（mg·g-1，以干質(zhì)量計(jì)，下同）表示：

y＝3.989 0x＋0.091 3，R2＝0.999 2。

1.3.3 總黃酮含量的測(cè)定

采用Chun 等人[20]改良的比色法進(jìn)行測(cè)定。分別取樣液1 mL，加入5%的亞硝酸鈉水溶液1 mL，混勻，6 min 后加入10%的硝酸鋁水溶液1 mL，6 min 后加入0.04 g·mL-1氫氧化鈉水溶液10 mL 并混勻，用去離子水定容至25 mL，靜置15 min，將反應(yīng)液充分混勻，15 min 后，取上清液在510 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，在相同條件下測(cè)定吸光度，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下，結(jié)果以蘆丁當(dāng)量（mg·g-1）表示：

y＝0.477 2x＋0.040 6，R2＝0.999 8。

1.3.4 還原力的測(cè)定

采用Venkatachalam U 等人[21]的方法進(jìn)行測(cè)定。在試管中依次加入2.5 mL 磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS，0.2 mo1·L-1、pH值為6.6），分別量取不同生長(zhǎng)期的EEBL、抗壞血酸溶液各1 mL，再分別加入1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL 混勻，于50 ℃水浴保溫20 min 后快速冷卻，再加入10%的三氯乙酸溶液 1 mL，以5 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液2.5 mL，依次加入蒸餾水2.5 mL、0.1%的FeCl3溶液0.5 mL，充分混勻，靜置10 min 后，在700 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），鐵還原能力用吸光度表征，以提取劑的吸光度作為空白值（A0）。

鐵還原能力＝A－A0。

1.3.5 清除DPPH 自由基能力的測(cè)定

采用李曉英等人[22]改良的方法進(jìn)行測(cè)定。分別取不同濃度的EEBL 各 2 mL 加入試管中，加入0.2 mmol·L-1的DPPH 乙醇溶液2 mL，混勻，在避光條件下反應(yīng)30 min，于517 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度（A1）；將2 mL 的EEBL 分別與2 mL 的無(wú)水乙醇混勻反應(yīng)后測(cè)定其吸光度（A2）；再將2 mL 的DPPH 和70%的乙醇溶液（酸化）2 mL混勻反應(yīng)后測(cè)得其吸光度（A2）。按照下面的公式計(jì)算樣品對(duì)DPPH 自由基的清除率（%）。

清除率(%)＝[1－(A1－A2) /A2]×100%。

半數(shù)清除濃度（median elimination concentration，EC50）為清除50%的自由基所需樣品的質(zhì)量濃度，可通過(guò)已獲得的DPPH 自由基清除率的回歸方程計(jì)算所得；以待測(cè)樣品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），以清除率為縱坐標(biāo)（Y），得到待測(cè)樣品對(duì)DPPH 自由基的清除率的關(guān)系曲線，據(jù)此曲線方程可計(jì)算得到待測(cè)樣品的EC50值。

1.3.6 總抗氧化能力的測(cè)定（FRAP 法）

參照盧引等人[23]的方法進(jìn)行測(cè)定。取TPTZ溶液（用40 mmol·L-1的鹽酸配置）10 mmol·L-1、氯化鐵20 mmol·L-1和pH 值為3.6 的醋酸鈉緩沖液0.3 mol·L-1，將此3 種溶液按1 ∶1 ∶10 的比例混合后制成現(xiàn)配現(xiàn)用的FRAP 工作液。分別吸取不同濃度的EEBL 各0.3 mL 加入試管中，再分別加入3 mL 的工作液，于70 ℃下反應(yīng)10 min，測(cè)定593 nm處的吸光度，并且以VC作為陽(yáng)性對(duì)照。同時(shí)，配制濃度為0.05～0.40 mmol·L-1的硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的回歸曲線方程為：

y＝1.704 4x＋0.113 7，R2＝0.998 6。

以所測(cè)吸光度值對(duì)應(yīng)的硫酸亞鐵毫摩爾數(shù)表示樣品總抗氧化活力的FRAP 值。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 不同干燥方法對(duì)藍(lán)莓葉酚類物質(zhì)含量的影響

采用自然干燥、常規(guī)熱風(fēng)干燥和微波干燥這3 種方法對(duì)4 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的藍(lán)莓葉分別進(jìn)行干燥處理，并采用乙醇提取酚類物質(zhì)，測(cè)定并計(jì)算得到總酚和總黃酮含量，結(jié)果見圖1。由圖1可知，不同干燥方法對(duì)藍(lán)莓葉中總酚、總黃酮的含量均有不同程度的影響。微波干燥法對(duì)藍(lán)莓葉酚類物質(zhì)的影響最小，其次是熱風(fēng)干燥，自然干燥的效果最差。以熱風(fēng)干燥法處理的藍(lán)莓葉其總酚含量與以微波干燥法處理的相當(dāng)，僅在5月時(shí)存在顯著差異（P＜0.05），這可能因?yàn)檫@個(gè)時(shí)期的葉片含水量較高，熱風(fēng)干燥處理時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致酚類物質(zhì)被氧化。以微波干燥法處理的藍(lán)莓葉在4 個(gè)生長(zhǎng)期其總黃酮含量均大于熱風(fēng)干燥處理的樣品，且每個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的總黃酮含量間均存在顯著差異（P＜0.05），說(shuō)明微波快速干燥處理能較好地保留原材料中的活性成分，因此以下實(shí)驗(yàn)樣品均采用微波干燥方法進(jìn)行處理。

圖1 不同干燥法對(duì)不同生長(zhǎng)時(shí)期藍(lán)莓葉中總酚和總黃酮含量的影響Fig.1 Effect of different drying methods on total phenolic and total flavonoid contents in blueberry leaves during different growth periods

2.2 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物鐵還原力的比較

還原力的測(cè)定是檢驗(yàn)樣品是否為良好的電子供體的方法，還原力強(qiáng)的樣品是良好的電子供應(yīng)者，其供應(yīng)的電子不僅能使Fe3+還原為Fe2+，也可以與自由基反應(yīng)[24]。不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的鐵還原力見圖2。從圖2中可以看出，不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提取物（EEBL）的鐵還原能力隨著其質(zhì)量濃度的提高而升高，當(dāng)EEBL 的質(zhì)量濃度在0.625～2.500 mg·g-1的范圍內(nèi)，EEBL對(duì)Fe3+還原力的升高趨勢(shì)較為明顯，而當(dāng)EEBL的質(zhì)量濃度大于2.500 mg·mL-1后其增幅較?。划?dāng)其質(zhì)量濃度達(dá)到最高（10.000 mg·mL-1）時(shí)，VC的鐵還原能力大于嫩葉，除此之外，其他情況下嫩葉提取物的鐵還原力均大于其他生長(zhǎng)時(shí)期藍(lán)莓葉及VC的還原力，在測(cè)定的濃度范圍內(nèi)，5月EEBL 的鐵還原力與6、8、9月EEBL 的鐵還原力間存在顯著差異（P＜0.05）；6月和9月的鐵還原能力基本相當(dāng)，總體大于8月藍(lán)莓葉醇提物的鐵還原能力，且在2.500～10.000 mg·mL-1的范圍內(nèi)與8月藍(lán)莓葉醇提物間存在顯著差異（P＜0.05）。

圖2 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的鐵還原力Fig.2 Reducing ability to Fe3+ of ethanol extraction of blueberry leaves during different growth periods

2.3 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物清除DPPH 自由基能力的比較

DPPH 是一種穩(wěn)定的自由基，廣泛用于測(cè)定生物試樣、酚類物質(zhì)和食品的抗氧化能力，常用來(lái)評(píng)估抗氧化物的供氫能力[25]。不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物（EEBL）對(duì)DPPH 自由基的清除率見圖3。

圖3 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物對(duì)DPPH 自由基的清除能力Fig.3 Scavenging capability to DPPH radicals of ethanol extractions of blueberry leaves during different growth periods

由圖3可知，隨著藍(lán)莓葉醇提物的質(zhì)量濃度的升高，其對(duì)DPPH 自由基的清除能力也升高，且在12.5～100.0 μg·mL-1的濃度范圍均有較好的劑量—效應(yīng)關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R2均在0.94～0.99 之間，但當(dāng)其質(zhì)量濃度為100.0～200.0 μg·mL-1時(shí)，5月和6月采摘的藍(lán)莓葉EEBL 對(duì)DPPH 自由基的清除能力的變化趨勢(shì)均明顯，而8、9月采摘的藍(lán)莓葉醇提物及VC對(duì)DPPH 自由基的清除能力的增幅卻均變緩。在相同濃度下，總體上看，5、8 及9月此3 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期采摘的藍(lán)莓葉EEBL 對(duì)DPPH 自由基的清除能力相當(dāng)，而6月的相對(duì)較低，當(dāng)EEBL 的質(zhì)量濃度為50～200 μg·mL-1時(shí)，6月與其他生長(zhǎng)時(shí)期及VC的清除率間呈顯著差異（P＜0.05）；當(dāng)EEBL濃度最低（12.5 μg·mL-1）時(shí)，VC對(duì)DPPH 的 清除能力最弱，且其與所有生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉EEBL對(duì)DPPH 自由基的清除能力間均存在顯著差異（P＜0.05）。5、8 和9月采摘的藍(lán)莓葉其EEBL 的EC50值相當(dāng)，分別為 （62.04±1.34）（63.12±1.38）（61.59±1.31）μg·mL-1，而6月的EC50值最大,為（96.31±2.08）μg·mL-1；4 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期藍(lán)莓葉EEBL 的EC50值均大于對(duì)照品VC，VC對(duì)DPPH 自由基的EC50值為（57.46±1.20）μg·mL-1。

2.4 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉總抗氧化能力的比較

測(cè)定總抗氧化能力的FRAP 法即“亞鐵還原能力實(shí)驗(yàn)”，是一種在低pH 值的條件下利用亞鐵離子與TPTZ 生成藍(lán)紫色復(fù)合物來(lái)測(cè)量樣品抗氧化能力的實(shí)驗(yàn)，廣泛運(yùn)用于食品與保健品的抗氧化能力分析之中[23]。FRAP 值的大小代表著抗氧化能力的強(qiáng)弱，數(shù)值越大則說(shuō)明抗氧化能力越強(qiáng)，不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的FRAP 值見圖4。

圖4 不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的總抗氧化能力（FRAP 值）Fig.4 Total antioxidant capacity (FRAP values) of ethanol extractions of blueberry leaves during different growth periods

由圖4可知，隨著藍(lán)莓葉醇提物質(zhì)量濃度的提高，F(xiàn)RAP 值也逐漸增大，4 個(gè)生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的FRAP 值均小于VC溶液的FRAP 值。在4 個(gè)生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提物的FRAP 值中，9月的FRAP 值最大，6月的最小，當(dāng)其醇提物的質(zhì)量濃度在40～100 μg·mL-1的范圍內(nèi)時(shí)，9月與6、8月的FRAP 值間均存在顯著差異（P＜0.05）。將9月的FRAP 值與5月的FRAP 值進(jìn)行比較，當(dāng)醇提物的質(zhì)量濃度在低濃度范圍內(nèi)時(shí)，兩者間存在顯著差異（P＜0.05）；而當(dāng)醇提物的質(zhì)量濃度在高濃度（80～100 μg·mL-1）范圍內(nèi)時(shí)，兩者間的差異卻不顯著。5月嫩葉醇提物的FRAP值在其低濃度范圍內(nèi)時(shí)小于6月和8月的；但當(dāng)其在高濃度（80～100 μg·mL-1）范圍內(nèi)時(shí)，其FRAP 值與6月和8月的FRAP 值間均存在顯著差異（P＜0.05）。但是，8月的FRAP 值總體上高于6月的FRAP 值。

3 討論與結(jié)論

隨著我國(guó)藍(lán)莓種植業(yè)的不斷發(fā)展，可利用的藍(lán)莓葉資源日益豐富。植物多酚是植物的次生代謝物，廣泛存在于植物體內(nèi)，諸多研究結(jié)果都表明，藍(lán)莓葉多酚含量高于其果實(shí)和花[1-3,22]，因此，對(duì)藍(lán)莓葉的開發(fā)利用有利于提高藍(lán)莓種植業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。隨著藍(lán)莓生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)藍(lán)莓葉中總黃酮、總酚的含量均逐漸升高，5月和6月的總酚含量基本相當(dāng)，但果實(shí)采摘后藍(lán)莓葉中的總黃酮含量開始明顯升高，8月總黃酮含量為72.52 mg·g-1，顯著大于6月的總黃酮含量（52.72 mg·g-1），到9月可達(dá)96.76 mg·g-1，極顯著高于前3 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的。這與李曉英等人[22]對(duì)藍(lán)莓花與嫩葉、老葉中的總黃酮及總酚含量的比較研究結(jié)果基本吻合，藍(lán)莓花中的黃酮含量是多酚含量的2 倍多，而嫩葉中黃酮的含量是多酚的1.5 倍左右，老葉中的黃酮含量又接近多酚含量的2 倍。Routray 等[18]對(duì)兩個(gè)品種藍(lán)莓葉在不同生長(zhǎng)期的多酚及花青素含量變化情況的研究結(jié)果也表明，5月二者的含量均較高，之后均降低，到9月才均基本回升到5月的含量水平。此研究結(jié)果表明，藍(lán)莓在從自然生長(zhǎng)到成熟的過(guò)程中，葉片中的總酚、總黃酮含量均增加，且總黃酮含量高于總酚含量，總黃酮含量在藍(lán)莓成熟采摘之后迅速升高，老熟葉片中的總黃酮含量最多。這一結(jié)果說(shuō)明，5月藍(lán)莓開花前，酚類代謝產(chǎn)物積累于藍(lán)莓葉中；花開和著果時(shí)，多酚和黃酮在花和果實(shí)中積累，且黃酮類物質(zhì)的積累多于多酚類物質(zhì)，這可能因?yàn)椋{(lán)莓葉中的酚類物質(zhì)部分向花和果實(shí)中轉(zhuǎn)移，及至6—7月，高溫、氣體分壓低等不利生長(zhǎng)環(huán)境造成這個(gè)時(shí)期藍(lán)莓葉次級(jí)代謝活動(dòng)的減弱[26-27]，從而使得總酚類物質(zhì)含量有所減少或持平，果實(shí)采摘后則開始增加。有關(guān)學(xué)者對(duì)忍冬葉[28]、桃樹葉[29]、桑葉[30]、山杏葉[31]等在不同生長(zhǎng)期的生物活性物質(zhì)的研究結(jié)果表明，6月采摘的忍冬葉其綠原酸等酚類物質(zhì)的含量最高，桃樹嫩葉和9月底到10月初桃子采收后其葉片中的黃酮含量高，而桑葉中黃酮含量的變化不大，僅在10月后明顯下降；落葉期山杏葉中總?cè)扑?、樺木酸、齊墩果酸和熊果酸等生物活性物質(zhì)含量均高于非落葉期。徐友等人[32]的研究結(jié)果表明，2年生盆栽銀杏葉中黃酮類化合物的合成與增量存在顯著的光強(qiáng)效應(yīng)和溫度、光強(qiáng)的交互效應(yīng)。這一研究結(jié)果說(shuō)明，酚類物質(zhì)代謝及基因表達(dá)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，不同品種、不同栽培期及不同月份，園林植物葉片中的酚類物質(zhì)含量均隨之變化。

不同生長(zhǎng)期植物葉片的活性物質(zhì)含量及抗氧化能力與植物品種有關(guān)，但其功能活性最高的時(shí)期均是在其花或果實(shí)采摘之后的一段時(shí)期。吳丹丹等[28]采用HPLC 法對(duì)不同生長(zhǎng)期忍冬葉中的綠原酸、木犀草苷、蘆丁等9 種化合物的含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)其抗菌活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，忍冬葉6月所測(cè)的各種活性成分含量均較高，且其抑菌效果最好，而6月正值忍冬花采摘（一般4、5月采摘）后的1 個(gè)月左右。本研究結(jié)果表明，不同生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提取物提供電子的還原能力的大小順序?yàn)?月＞8月≈9月≈VC＞6月；其對(duì)DPPH 自由基的清除能力，6月的最低，其余3 個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的均極顯著強(qiáng)于6月的，且與VC的相當(dāng)；其總抗氧化能力即FRAP 值的大小順序?yàn)?月＞5月＞8月＞6月，均極顯著低于VC。由此說(shuō)明，各生長(zhǎng)期藍(lán)莓葉醇提取物對(duì)DPPH 自由基的清除能力均較強(qiáng)，而其還原能力均相對(duì)較弱，這與TURHAN 等人[12]的研究結(jié)果類似；Routray等人[21]的研究結(jié)果也顯示，不同季節(jié)藍(lán)莓葉對(duì)DPPH 自由基的清除能力和FRAP 值的大小順序均為10月＞9月＞5月＞7月，這與本研究結(jié)果也基本一致，說(shuō)明藍(lán)莓葉的抗氧化活性受季節(jié)的影響，這可能是在不同的季節(jié)，環(huán)境條件的不同導(dǎo)致其次生代謝能力不同，其所生成的代謝物質(zhì)的含量也不同，而活性物質(zhì)的含量與其抗氧化能力間存在量效關(guān)系[33]。植物葉片中活性物質(zhì)的含量不僅與其抗氧化能力有關(guān)，而且與植物葉片的抑菌及抗病力有關(guān)[34]。王明等人[35]通過(guò)調(diào)查、統(tǒng)計(jì)和分析，建立了9 種園林植物葉片的抗病蟲害能力與葉片中總多酚含量的關(guān)系的數(shù)學(xué)模型，結(jié)果表明，葉片中的多酚含量越高，其抗病蟲害能力就越強(qiáng)。

綜合不同季節(jié)藍(lán)莓葉醇提取物的酚類物質(zhì)含量和抗氧化能力分析可知，開花期和著果期不適于藍(lán)莓葉的采摘及對(duì)其活性物質(zhì)的利用，較適宜的采摘與利用時(shí)期應(yīng)為9—10月，春梢上的藍(lán)莓葉盡管也有較高的酚含量和較強(qiáng)的功能活性，但不適于大量采摘。當(dāng)然，本研究?jī)H針對(duì)4～5 個(gè)月采摘的1 個(gè)品種的藍(lán)莓葉進(jìn)行了探討，顯然存在一定的局限性，今后可對(duì)不同樹齡、不同品種在一年之內(nèi)其葉片酚類物質(zhì)的含量變化情況進(jìn)行深入的研究。