氯化琥珀膽堿的分析檢測綜述

彭慧飛,姜兆林,陳 陽,李 棟,王慶威

(1.中國刑警學(xué)院 法化系, 遼寧 沈陽 110000;2.青藏鐵路公安局刑事技術(shù)處 ，青海 西寧 810000))

氯化琥珀膽堿(又名司可林，SUX)屬于國家管制的B級(jí)有機(jī)劇毒藥品，主要作為獸藥或者手術(shù)麻醉誘導(dǎo)劑，其注射液為無色或者無色透明狀的粘液[1]，臨床上主要用于氣管插管和麻醉手術(shù)中使肌肉保持松弛狀態(tài)，代謝速度快，半衰期為2～4min。[2]但近年不法分子使用氯化琥珀膽堿制作弩箭，用于盜竊家犬，也有致人死亡事故發(fā)生，對于這類案件的偵破，如何檢測氯化琥珀膽堿固定犯罪證據(jù)，是此類案件偵破的關(guān)鍵[3]。

本文主要介紹已發(fā)表的生物體內(nèi)的氯化琥珀膽堿的檢測方法。目前，SUX 檢測的方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、酶法電極法、離子交換分離結(jié)合電導(dǎo)檢測的方法。

1 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)

張?jiān)品錥4]等人精確稱取氯化琥珀膽堿標(biāo)準(zhǔn)品加乙腈定容，配成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，存放于-20℃冰箱中冷凍，取空白血0. 5mL，加入3mL氨水調(diào)節(jié)pH值=8，渦旋混勻。使用Oasis WCX柱(3cc/60mg)柱依次甲醇，氨水活化。取血液樣品上清液過柱，用離子水、甲醇淋洗雜質(zhì);然后使用含甲酸∶水∶乙腈( 1∶50∶49，v /v) 溶液洗脫;洗脫液用0.22μm 微孔濾膜過濾，用液質(zhì)聯(lián)用檢測。通過一系列的試驗(yàn)確定色譜最優(yōu)條件為，色譜柱：以20mmol/L甲酸銨緩沖液( 含0.2% 甲酸) -乙腈作為流動(dòng)相梯度洗脫，質(zhì)譜為ESI，氯化琥珀膽堿的分子量為290，生成雙電荷的母離子為145.1，選擇145.1作為檢測的定性離子對，其中115.6為定量離子。該方法也對空白干擾進(jìn)行檢測，排除了血液中內(nèi)源性物質(zhì)對氯化琥珀膽堿測定沒有干擾。對液質(zhì)聯(lián)用的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)數(shù)值分別符合規(guī)范。證明此方法不存在基質(zhì)效應(yīng)，可以用于檢測血液中的氯化琥珀膽堿，但是有文獻(xiàn)報(bào)道，對于死亡之后的生物體血液，胃內(nèi)容物無法檢測出琥珀氯化膽堿。

宣宇[5]等人同樣采用OasisR WCX 固相萃取柱預(yù)處理檢測樣品，采用液質(zhì)檢測，均檢出琥珀膽堿，獲取良好的線性范圍，檢出限，精密度。宣宇等人同時(shí)論證了氯化琥珀膽堿的分解問題，將標(biāo)準(zhǔn)樣品存放于塑料瓶，玻璃瓶內(nèi)，10日內(nèi)分別檢測，證明在塑料容器中存儲(chǔ)穩(wěn)定，而在玻璃容器中其降解幾乎達(dá)90%，證明玻璃種的SiO2容易引起對琥珀膽堿的吸附并使其降解，對于氯化琥珀膽堿贏存儲(chǔ)于塑料瓶內(nèi),注意防止愛檢測中因保管不當(dāng)造成陰性結(jié)果。

周興旺[6]等人采取市場上毒狗肉進(jìn)行檢測，用碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖鹽震蕩超聲提取狗肉的氯化琥珀膽堿，過WCX固相萃取柱凈化，液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜定性、定量，證明線性關(guān)系，檢出線均良好，適合快速檢測市場上的毒狗肉。此外，周興旺等人通過多組平行試驗(yàn)，證明對WCX固相萃取柱進(jìn)行活化后，上標(biāo)準(zhǔn)溶液25ng時(shí)，最佳的洗脫液為甲酸-乙腈-水溶液(1∶8∶1)體積為2.0mL。

李 祎[7]等人采用高效液相色譜 -飛行時(shí)間質(zhì)譜，采取2mL血液加乙腈沉淀蛋白質(zhì)后進(jìn)樣分析，這樣樣品前處理簡單，僅需5min。此方法同樣獲取了良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。此方法具有良好的線性關(guān)系，檢出限低，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確可靠，也排除了生物質(zhì)干擾，但是相對前處理復(fù)雜，操作復(fù)雜。

2 離子色譜法

陳祥國[8]等采取死者針孔部位的肌肉，加入高氯酸酸化和去離子水，超聲5min后，過濾，取濾液檢測，采用抑制性陽離子交換色譜法，手動(dòng)進(jìn)樣:25μL ，采取的檢測方式為:電導(dǎo)檢測。在死者組織中檢測出氯化琥珀膽堿。此方法能滿足快速的定性需要。此方法具有分析時(shí)間快，靈敏度高，樣品前處理相對簡單等優(yōu)點(diǎn)。但是需要考慮常見生物質(zhì)中的陽離子，在檢測之前需要配置標(biāo)準(zhǔn)溶液，對于個(gè)案，在檢測前需要配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和設(shè)置儀器條件，相對繁瑣。

3 紅外光譜的方法

喬文濤[9]等人取現(xiàn)場的飛鏢內(nèi)液體0.1 mL， 存放于蒸發(fā)皿中揮干，以KBr壓片法制備試樣，譜庫檢索比對發(fā)現(xiàn)與氯化琥珀膽堿相似度達(dá)96%以上，可以達(dá)到定性目的，此方法可以作為公安理化鑒定的有效輔助手段。據(jù)查此法源于藥典對純品的檢測。

胡浩浪，裴茂清，施文兵[10]等人，利用傅立葉變換紅外光譜對“飛鏢”上的白色結(jié)晶性粉末進(jìn)行紅外光譜儀檢測，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比，與氯化琥珀膽堿的匹配率達(dá)90.65%，確定成分為氯化琥珀膽堿。

此法只適用于對純品的檢驗(yàn)和定性，方法簡單易，準(zhǔn)確定性也相對高，效果較好，快速?？梢宰鳛槎ㄐ曰蛘吡己玫妮o助手段，但是不適用于生物檢材。

4 酶電極法

孫士青[11]等人通過設(shè)計(jì)一個(gè)精密的檢測電極——膽堿氧化酶電極，以固定化膽堿氧化(EC5896)結(jié)合H2O2電極構(gòu)成電流型酶電極生物傳感分析儀,利用酶的專一性檢測氯化琥珀膽堿。同時(shí)通過對比試驗(yàn)排除了乙二胺四乙酸二鈉、D-葡萄糖等物質(zhì)的干擾，最優(yōu)響應(yīng)pH值為7.8，故采取硼酸作為緩沖溶液，同時(shí)也論證了氯化鈉與磷酸氫二鈉對電極活性具有抑制作用。

此類方法利用專一性高、固定化酶的穩(wěn)定性，靈敏性高，能滿足注射液的快速定性、定量分析。但僅僅主要針對氯化琥珀膽堿注射劑進(jìn)行分析，是否適用于生物檢材，文中暫未論述，個(gè)人感覺此方法專業(yè)強(qiáng)，無法滿足公安工作需要。

5 薄層色譜法

武向鋒[12]等人用薄層色譜法檢查注射液中的氯化琥珀膽堿含量。首先利用微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉制作薄層的玻板,晾干后,活化。選取正丁醇-水-無水甲酸(67∶25∶20)作為展開劑，噴以稀碘化鉍鉀試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。通過這種方法對琥珀膽堿注射液及其雜質(zhì)、分解產(chǎn)物做了檢測。通過點(diǎn)樣顯色確定氯化膽堿的最低檢出量為0.2μg。

此方法需要制作薄層色譜，而且相關(guān)試劑種類繁雜，操作麻煩，而且僅針對注射劑這類比較純的純品做檢測，不適用公安理化鑒定中。

總結(jié)，針對目前的公安機(jī)關(guān)的儀器條件，推薦使用液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜檢測生物檢材中氯化琥珀膽堿，該方法成熟，報(bào)道文獻(xiàn)數(shù)目最多，同時(shí)達(dá)到定性定量檢測目的，不過諸如離子色譜檢測，紅外檢測也都是良好的輔助檢測手段。目前的報(bào)道主要針對肌肉組織檢測，有文獻(xiàn)報(bào)道，根據(jù)氯化琥珀膽堿的代謝情況，在生物尸體在心、肝、脾、腎和膈肌中均可檢測到琥珀膽堿，其中腎臟中的藥物濃度始終最高，對于肌肉組織未檢出的情況下，可以對腎臟進(jìn)行檢測[13]。

[1] 冒理雄，葉光華，范琰琰，等.注射氯化琥珀膽堿致人死亡1 例[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志, 2014,29(03)： 272-273.

[2] 張延波，鄭偉明，羅郁風(fēng)，等.注射氯化琥珀膽堿殺人后自殺1 例[J].法醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(1):75-76.

[3] 方俊杰，秦 明，韓志杰，等.氯化琥珀膽堿弩箭殺人的法醫(yī)學(xué)鑒定3例[J].刑事技術(shù),2013(3):64-65.

[4] 張?jiān)品?，趙 森，王 炯，等.超高效液相色譜- 質(zhì)譜法分析人全血中的氯化琥珀膽堿[J]．中國法醫(yī)學(xué)雜志，2013(6):475-477．

[5] 宣 宇，孫 楠，傅得鋒，等.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測血液和尿液中的琥珀膽堿及對標(biāo)樣的穩(wěn)定性評價(jià)[J].分析試驗(yàn)室，2011,30(8):112-114.

[6] 周興旺,康紹英,張繼紅,等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定狗肉中的氯化琥珀膽堿[J].食品與機(jī)械，2015,31(6 ):102-104.

[7] 李 祎，舒 科，申秀華，等.高效液相色譜 -飛行時(shí)間質(zhì)譜用于琥珀膽堿的快速檢測[J].刑事技術(shù),2016,41(2):120-122.

[8] 陳祥國，王淑真，呂紀(jì)忠，等.離子色譜法分析生物檢材中的氯化琥珀膽堿[J]．刑事技術(shù)，2010(6):17-18．

[9] 喬文濤,黃彬晏,黃克建，等.離子色譜法結(jié)合紅外光譜法檢驗(yàn)氯化琥珀膽堿[J].化學(xué)分析計(jì)量,2014(S1):38-40.

[10] 胡浩浪,裴茂清,施文兵.氯化琥珀膽堿致人死亡一例[J].廣東公安科技,2014(1):78-79.

[11] 孫士青，王 寧，葛淑蘭.酶電極法測定氯化琥珀膽堿注射液氯化膽堿及氯化琥珀膽堿含量[J]．中國藥學(xué)雜志，1997，32(10):609-611.

[12] 武向鋒,靳守東,沈 娟,等.氯化琥珀膽堿注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢查[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009,25(4):355-357.

[13] 竺 凌，聞 俊，周婷婷，等.琥珀膽堿的體內(nèi)過程及其法醫(yī)毒物分析研究[J].藥物分析雜志，2015，35(5):849-855.