針刺捻轉(zhuǎn)補瀉手法對自發(fā)性高血壓大鼠頂葉皮質(zhì)NO、5HT的影響*

戰(zhàn) 河 王 赫 楊芳媛 郭秋蕾 洪性勛 袁靜云 王紫娟 劉清國

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

近年來，高血壓已成為危害人們健康的首要因素之一，其發(fā)病機制非常復(fù)雜，可造成心、腦、腎損害并可誘發(fā)腦血管意外等危急重癥。針刺治療高血壓在臨床的應(yīng)用日益增多，準(zhǔn)確運用補瀉手法是臨床取效的重要環(huán)節(jié)，捻轉(zhuǎn)補瀉可通過不同途徑對機體產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。研究表明，針刺原發(fā)性高血壓病患者太沖穴激活的主要腦區(qū)包括左側(cè)頂葉［1］，王葳等研究針刺太沖穴的腦功能成像，發(fā)現(xiàn)針刺期與針刺后效應(yīng)期激活的腦區(qū)包含頂上小葉與頂下小葉［2］。反過來，高血壓亦會對頂葉皮質(zhì)造成損害，Michael L.Alosco等人的研究表明高血壓可致腦灌注減少、包括頂葉在內(nèi)的腦皮質(zhì)厚度減少［3］。臨床報道顯示高血壓誘發(fā)的腦出血頂葉出血數(shù)量亦不稀少。綜上，在針刺調(diào)控血壓的中樞整合機制中，頂葉為重要一環(huán)，其中神經(jīng)遞質(zhì)的差異表達(dá)具有重要影響；高血壓亦可使頂葉皮質(zhì)受累，造成損害。以往對調(diào)控血壓的研究少有涉及腦皮質(zhì)層面，故此次欲初步探索，運用微板法與酶聯(lián)免疫吸附試驗，觀察捻轉(zhuǎn)補瀉手法對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）頂葉皮質(zhì)一氧化氮（NO）、5-羥色胺（5-HT）的影響及其血壓值變化，探討針刺調(diào)控血壓的中樞機制中，活躍腦區(qū)頂葉重要神經(jīng)遞質(zhì)NO、5-HT的含量變化與血壓變化的相關(guān)性，同時研究針刺調(diào)控血壓的效果，為高血壓的防治提供借鑒與思路?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SHR 40只，WKY（Wistar-Kyoto）大鼠10只，雄性，9周齡，體質(zhì)量（210±15） g。 WKY 大鼠 10只作為空白組對照。均購自北京維通利華實驗動物養(yǎng)殖中心，許可證號：SCXK（京）2012-0001。50只大鼠均飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院動物房，SPF級。每日自由進(jìn)食及飲水，喂養(yǎng)飼料由北京維通利華實驗動物中心提供。實驗過程中對動物的處置符合2006年科技部發(fā)布的 《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》［4］。所有實驗操作經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)動物保護與使用委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：BUCM-3-2016090301-3003）。

1.2 實驗儀器 毫針：中研太和牌一次性30號0.5寸毫針，北京中研太和醫(yī)藥有限公司提供；動物無創(chuàng)血壓測試儀 （BP-6），成都泰盟生物儀器有限公司提供；ELISA定量檢測試劑盒，慧佳生物科技有限公司提供；NO試劑盒（微板法），南京建成生物有限公司提供；可見光分光光度計，上海菁華科技有限公司提供。

1.3 造模與分組 造模：以收縮壓持續(xù)在150~175 mmHg的雄性Wistar京都種大鼠與收縮壓為130~140 mmHg的雌性Wistar京都種大鼠交配，得到收縮壓都大于150 mmHg的子代，再選用血壓較高的大鼠進(jìn)行近親交配，依次進(jìn)行這種選擇性近親交配20代而獲得穩(wěn)定的高血壓遺傳性，從而建立了SHR品種。本實驗SHR按照隨機數(shù)字表法隨機分為模型組、針刺組、捻轉(zhuǎn)補法組、捻轉(zhuǎn)瀉法組各10只。

1.4 干預(yù)方法 取穴：針刺各組均取 “太沖穴”（雙側(cè)），取穴參照《實驗針灸學(xué)》［5］：于后肢足背 1、2 趾骨間凹陷處取“太沖穴”。干預(yù)方法：實驗動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始治療，采用中研太和牌一次性30號0.5寸毫針直刺1~2 mm。針刺時讓大鼠完全鉆入鼠套內(nèi)固定，從鼠套設(shè)計好的孔洞中露出下肢，以便于針刺操作?？瞻捉M：每日進(jìn)行與針刺治療組相同的抓捉固定刺激，不施以針刺。模型組：每日進(jìn)行與針刺治療組相同的抓捉固定刺激，不施以針刺。針刺組：針刺雙側(cè)太沖穴，留針20min，期間不進(jìn)行任何處理。捻轉(zhuǎn)補法組：針刺雙側(cè)太沖穴，以右手為刺手，大拇指作用力向前用力捻轉(zhuǎn)，然后輕力退回，每次捻轉(zhuǎn)幅度360°，60次/min，持續(xù)捻轉(zhuǎn)3 min，共留針17 min。捻轉(zhuǎn)瀉法組：針刺雙側(cè)太沖穴，以右手為刺手，大拇指作用力向后用力捻轉(zhuǎn)，然后輕力向前退回，每次捻轉(zhuǎn)幅度360°，60次/min，持續(xù)捻轉(zhuǎn)3 min，共留針17 min。各組共治療28 d，每隔6 d休息1 d，每日下午治療1次。所有針刺操作均由同一人實施。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 1）測量血壓。在室溫（22±2）℃條件下，將清醒狀態(tài)下的大鼠于36℃下預(yù)熱（用溫控器調(diào)節(jié)溫度恒定）約15 min，用無創(chuàng)血壓儀測量大鼠安靜、清醒狀態(tài)下的尾壓，連續(xù)測量3次，取其均值，避免噪音等外界環(huán)境刺激對血壓的影響。于開始針刺前1 d測量血壓1次，針刺治療開始后，于針刺的第3、8、13、18、23、27日測量血壓值。正式測血壓前訓(xùn)練若干次，每日測血壓訓(xùn)練1次，連續(xù)3 d。2）NO、5-HT的測定。動物麻醉狀態(tài)下，鍘刀斷頭，剝離取出其頂葉皮質(zhì)，4℃0.9%氯化鈉溶液沖洗，濾紙吸干，迅速放入儲存管中，移入-80℃冰箱待檢，采用ELISA法測定其中5-HT的含量，運用微板法測定NO的含量，其計算公式為：組織中 NO含量=（測定 OD-對照 OD）/（標(biāo)準(zhǔn)OD-空白OD值）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度/測定樣本蛋白濃度。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間差異如方差齊則采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠針刺治療前后收縮壓比較 見表1。治療前空白組與其余各組大鼠收縮壓比較具有顯著差異（P＜0．05）；針刺第 3日，捻轉(zhuǎn)瀉法組與模型組之間收縮壓的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；針刺第 8日，捻轉(zhuǎn)補法組、捻轉(zhuǎn)瀉法組與模型組、針刺組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；針刺組與模型組比較有明顯差異（P＜0．05）；針刺第13日開始，各組大鼠收縮壓之間均有顯著差異（P＜0．05），捻轉(zhuǎn)瀉法組大鼠收縮壓明顯降低，捻轉(zhuǎn)補法組次之，亦有所降低。在組內(nèi)比較中，空白組從針刺第8日起與針刺前1 d比較有顯著差異（P＜0．05）；模型組從針刺第8日起與針刺前1 d比較有顯著差異（P＜0．05）；針刺組從針刺第 18天起與針刺前1 d比較有顯著差異（P＜0．05）；捻轉(zhuǎn)補法組從針刺第8日起與針刺前1 d比較有顯著差異 （P＜0．05）；捻轉(zhuǎn)瀉法組從針刺第8日起與針刺前1 d比較有顯著差異（P＜0．05）。

2.2 各組大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT、NO含量比較 見表2。5-HT含量模型組與空白組比較有明顯差異 （P＜0．05）；捻轉(zhuǎn)補法組與其余各組比較均有明顯差異（P＜0．05）；捻轉(zhuǎn)瀉法組與捻轉(zhuǎn)補法組、模型組、針刺組比較有顯著差異 （P＜0．05），捻轉(zhuǎn)瀉法組大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT含量明顯升高。NO含量模型組與空白組比較有顯著差異（P ＜ 0．05）；與模型組、針刺組、捻轉(zhuǎn)補法組比較，捻轉(zhuǎn)瀉法組大鼠頂葉皮質(zhì)NO含量明顯升高（P＜0．05）。

表1 各組大鼠針刺治療前后收縮壓比較（mmHg，±s）

表1 各組大鼠針刺治療前后收縮壓比較（mmHg，±s）

與本組針刺前 1 d 比較，▼P＜0．05；與空白組比較，*P＜0．05；與模型組比較，◆P＜0．05；與針刺組比較，○P＜0．05；與捻轉(zhuǎn)補法組比較，□P＜0．05；與捻轉(zhuǎn)瀉法組比較，△P＜0．05。 下同。

組 別 n 針刺前1 d 針刺第3日 針刺第8日 針刺第1 3日 針刺第1 8日 針刺第2 3日 針刺第2 7日空白組 1 0 1 0 9.6 3±3.0 1 1 1 2.3 4±2.7 1 1 1 4.9 6±2.1 8△□▼ 1 1 7.2 5±1.5 0△□◆○▼ 1 1 9.5 3±1.2 0△□◆○▼ 1 2 1.1 0±1.2 2△□◆○▼ 1 2 2.9 9±1.3 6△□◆○▼模型組 1 0 1 6 5.9 4±3.9 3*1 6 9.1 1±3.0 2*△ 1 7 1.9 4±2.2 0*△□▼ 1 7 3.7 4±2.2 5*△□○▼ 1 7 5.7 4±2.3 4*△□○▼ 1 7 7.5 8±2.5 5*△□○▼ 1 7 9.3 9±2.4 6*△□○▼針刺組 1 0 1 6 5.0 4±4.4 2*1 6 6.2 6±3.5 4* 1 6 7.8 9±3.1 9*△□ 1 6 8.6 3±3.2 0*△□◆ 1 6 9.5 0±3.0 3*△□◆▼ 1 7 0.3 4±2.6 8*△□◆▼ 1 7 1.0 8±2.4 5*△□◆▼捻轉(zhuǎn)補法組 1 0 1 6 6.7 9±1.4 2*1 6 5.8 2±1.9 5* 1 6 4.8 8±1.6 0*▼ 1 6 3.4 7±1.5 0*△◆○▼ 1 6 2.3 9±1.5 8*△◆○▼ 1 6 0.7 8±1.8 0*△◆○▼ 1 5 8.8 4±1.6 6*△◆○▼捻轉(zhuǎn)瀉法組 1 0 1 6 7.4 4±3.0 6*1 6 5.2 9±3.0 5* 1 6 2.3 1±2.8 5*▼ 1 5 9.7 9±2.6 2*□◆○▼ 1 5 7.4 2±3.0 8*□◆○▼ 1 5 5.8 8±3.2 3*□◆○▼ 1 5 3.3 3±3.0 5*□◆○▼

表2 各組大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT、NO含量比較（±s）

表2 各組大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT、NO含量比較（±s）

組 別 n 5-H T（n g/m L） N O（n m o l/m g）空白組 1 0 9.0 6±1.6 2□ 1 0.1 1±2.0 2模型組 1 0 4.8 6±1.2 8*△□ 6.5 2±1.9 3*△針刺組 1 0 5.1 1±1.2 1*△□ 7.5 3±1.3 7*△捻轉(zhuǎn)補法組 1 0 6.4 2±1.0 2*△ 7.9 7±1.5 3*△捻轉(zhuǎn)瀉法組 1 0 8.0 5±1.3 5□ 9.6 2±1.2 6

3 討 論

太沖穴是治療高血壓病的要穴。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)［6］對患者雙側(cè)太沖穴施針刺捻轉(zhuǎn)瀉法有良好的降壓效果，良性刺激作用于軀體感覺神經(jīng)末梢及交感神經(jīng)末梢，良性信息作用于大腦皮質(zhì)，激發(fā)高級神經(jīng)中樞的整合［7］。本實驗采用SHR作為模型組。SHR出生后血壓隨鼠齡不斷升高，為最適合進(jìn)行高血壓研究的成熟模型。WKY大鼠是用Wistar大鼠培育而成，為SHR的正常血壓對照品系，本實驗用之作為空白組的實驗動物，觀察其與各組SHR之間血壓的差異。

空白組大鼠從第8日起血壓較針刺前1 d逐漸升高，因每天對其進(jìn)行與其他組大鼠相同的抓捉固定刺激會引起應(yīng)激反應(yīng)，久之造成空白組大鼠應(yīng)激性血壓升高。模型組從第8日起血壓較針刺前1 d逐漸升高，因SHR隨周齡增加而血壓升高，且抓捉刺激亦對其血壓升高有影響。針刺組從針刺第18日起血壓與針刺前1 d比較有顯著差異，開始有明顯升高的時間晚于模型組10 d，可見針刺延緩了針刺組大鼠血壓升高進(jìn)程。捻轉(zhuǎn)補法組與瀉法組大鼠血壓均從針刺第8天起開始逐漸降低，說明捻轉(zhuǎn)補法與瀉法可有效降低SHR血壓，捻轉(zhuǎn)手法的降壓效果明顯優(yōu)于單純針刺。捻轉(zhuǎn)瀉法組與補法組相比，血壓下降更快，降壓幅度更大，從針刺第13日起即差異顯著，降壓效果最好。

5-HT對人體生理功能具有重要調(diào)節(jié)作用［8］。在1954年P(guān)age就提出5-HT與高血壓的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。5-HT有復(fù)雜的心血管效應(yīng)，可通過激活中樞5-HT1A受體、降低交感神經(jīng)興奮性、提高迷走神經(jīng)興奮性而降低血壓和心率［9］。有研究表明給大鼠ICV注射5,6-雙羥色胺可建立中樞5-HT缺損的實驗性高血壓大鼠模型，該模型的形成與中樞5-HT含量減少密切相關(guān)，提高內(nèi)、外源性5-HT含量能降低EHR的平均動脈壓，且其降壓作用主要是通過5-HT1A受體介導(dǎo)的［10］。當(dāng)血壓發(fā)生變化時，中樞5-HT1A受體結(jié)合容量發(fā)生繼發(fā)性改變。不同腦區(qū)中樞5-HT1A受體結(jié)合容量可能與高血壓的發(fā)生相關(guān)［9］。

本實驗結(jié)果顯示大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT含量模型組較空白組明顯降低，表明SHR的血壓升高可能與頂葉皮質(zhì)5-HT含量的降低有關(guān)。捻轉(zhuǎn)瀉法組大鼠頂葉皮質(zhì)5-HT含量較模型組與各治療組明顯升高。

NO對腦血管張力、血壓及腦血流的調(diào)節(jié)起重要作用［11-12］。中樞 NO 和一氧化氮合成酶（NOS）異常與許多疾病的發(fā)生有關(guān)［13］。NOS是生成NO的關(guān)鍵酶，所以NOS的分布對NO的產(chǎn)生部位與生物學(xué)效應(yīng)至關(guān)重要［14］。大腦皮質(zhì)內(nèi)的NOS神經(jīng)元及其陽性終末參與皮質(zhì)微循環(huán)的調(diào)節(jié)，NOS陽性神經(jīng)元在皮質(zhì)各層散在分布，額、頂葉約半數(shù)的NOS神經(jīng)元直接與皮質(zhì)血管構(gòu)成接觸，額、頂葉的終末數(shù)量明顯多于枕、顳葉［15］。NO能夠降低全身平均動脈血壓，控制全身各種血管床的靜息張力，增加局部血流，是血壓的主要調(diào)節(jié)因子［16］。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)NOS的抑制或NO合成的減少，則可能誘發(fā)血壓升高以及神經(jīng)細(xì)胞的破壞。

實驗結(jié)果顯示，大鼠頂葉皮質(zhì)NO含量模型組較空白組顯著降低，表明SHR的血壓升高可能與頂葉皮質(zhì)NO含量的降低有關(guān)。捻轉(zhuǎn)瀉法組大鼠頂葉皮質(zhì)NO含量較模型組與各治療組明顯升高。

綜上所述，在高血壓發(fā)病的復(fù)雜中樞機制中，在腦皮質(zhì)層面，頂葉皮質(zhì)中5-HT與NO含量的降低可能是原因之一，對SHR大鼠“太沖穴”進(jìn)行針刺捻轉(zhuǎn)瀉法可以使頂葉皮質(zhì)中降低的5-HT、NO含量顯著升高，有效降低血壓水平，即在腦皮質(zhì)層面頂葉區(qū)域，針刺降壓效應(yīng)可能是通過使其中的重要神經(jīng)遞質(zhì)NO、5-HT含量重新升高介導(dǎo)的，這可能是針刺調(diào)控血壓的中樞機制之一，捻轉(zhuǎn)瀉法對這兩種神經(jīng)遞質(zhì)含量的上調(diào)幅度最大，降壓效果最佳。針刺治療高血壓的中樞機制十分復(fù)雜，中樞不同層面、不同神經(jīng)遞質(zhì)的差異表達(dá)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等仍有待進(jìn)一步研究。

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