放置時(shí)間對(duì)免疫熒光干式定量法測(cè)定超敏CRP的影響

黎宇 龍庭燕 楊況甜

（廣西柳州市工人醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣西 柳州 545005）

C反應(yīng)蛋白（CRP）是機(jī)體受到病菌入侵或組織損傷等炎癥性刺激時(shí)肝細(xì)胞合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。因此，CRP的檢測(cè)可用于臨床對(duì)機(jī)體感染、組織傷害和炎性疾病的評(píng)價(jià)，也可為各種疾病的診斷、治療和監(jiān)控提供依據(jù)[1]。在日常的工作中會(huì)發(fā)現(xiàn)有部分標(biāo)本的測(cè)定結(jié)果與實(shí)際情況不符，究其原因發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)本是由于工作量的原因未能將檢測(cè)反應(yīng)板按規(guī)定的時(shí)間及時(shí)放入儀器檢測(cè)，而放置時(shí)間是否會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果造成影響，就這一問題來(lái)做次實(shí)驗(yàn)，觀察放置時(shí)間對(duì)免疫熒光法測(cè)定CRP的影響狀況。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本

選取2017年7月至2017年8月間來(lái)我院住院經(jīng)診斷為各類感染性疾病的患者200例作為研究對(duì)象，包括自身免疫性疾病，心力衰竭，肺炎，支氣管炎，急性胰腺炎，尿路感染，手術(shù)，創(chuàng)傷患者，冠心病等疾病，要求標(biāo)本無(wú)溶血，脂血，黃疸等現(xiàn)象。

1.2 儀器與試劑

韓國(guó)Boditech MED Inc公司生產(chǎn)的i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀，韓國(guó)Bodi Tech Med Incorporated C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

每天收集符合要求的患者血標(biāo)本，并按照實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行測(cè)定并記錄好數(shù)據(jù)，每天每個(gè)標(biāo)本均重復(fù)測(cè)定4次，將加好檢測(cè)混合樣本的反應(yīng)板按照標(biāo)準(zhǔn)操作要求室溫放置3分鐘測(cè)定為對(duì)照組，記錄數(shù)據(jù)；再將檢測(cè)好的反應(yīng)板繼續(xù)室溫放置至5分鐘測(cè)定為試驗(yàn)1組，記錄數(shù)據(jù)；室溫放置至10分鐘測(cè)定為試驗(yàn)2組，記錄數(shù)據(jù)；室溫放置至30分鐘測(cè)定為試驗(yàn)3組，記錄數(shù)據(jù)。用i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀檢測(cè)CRP的濃度，計(jì)算并比較實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組的差異。以上所有操作均嚴(yán)格按照廠家提供的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操做。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS11.0進(jìn)行處理，C反應(yīng)蛋白含量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異顯著。

2.結(jié)果

同一測(cè)試板在不同的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定結(jié)果之間的比較，如表1所示。試驗(yàn)1、2組的CRP檢測(cè)結(jié)果分別與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試驗(yàn)3組的CRP與對(duì)照組比較，差異顯著（P＜0.05）。

表 1 樣本在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的CRP（mg/L）

3.討論

臨床檢測(cè)超敏CRP常用的方法有免疫散射比濁法，免疫透射比濁法，干式定量免疫熒光法等[2-3]。免疫散射比濁法與免疫透射比濁法均具有較好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，比較適合用于大型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行批量檢測(cè)，但這兩種方法也存在檢測(cè)所需的血量要足夠才能確保其準(zhǔn)確性，檢測(cè)需要一定的反應(yīng)時(shí)間，只能局限在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作，不能隨時(shí)隨地檢測(cè)診斷的急救需求。而免疫熒光法因具有用血量少，反應(yīng)時(shí)間快速，操作簡(jiǎn)便，儀器小巧，可移動(dòng)攜帶的特點(diǎn)使其運(yùn)用于急診的急救需求。尤其是將干式定量免疫熒光法檢測(cè)超敏CRP應(yīng)用在某些危急重病患者的救助上，縮短了檢驗(yàn)結(jié)果的等待時(shí)間[4]。

然而對(duì)于需要做大量急救標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室而言，標(biāo)本排序的囤積，導(dǎo)致部分標(biāo)本因等候而未能及時(shí)檢測(cè)，使得結(jié)果的準(zhǔn)確性不得而知。放置時(shí)間是否會(huì)影響免疫熒光法檢測(cè)超敏CRP的結(jié)果？通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，試驗(yàn)1、2組的CRP檢測(cè)結(jié)果分別與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；試驗(yàn)3組的CRP與對(duì)照組比較，差異顯著（P＜0.05）。C反應(yīng)蛋白的測(cè)定值隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)而呈現(xiàn)下降的局勢(shì)。分析其原因可以先從原理上分析，免疫熒光法測(cè)定超敏CRP的原理是將檢測(cè)緩沖液與血液樣本在檢測(cè)瓶中混合，緩沖液中的CRP抗體和血液樣本中的CRP抗原形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)混合樣本加到反應(yīng)板上經(jīng)滲透作用擴(kuò)散至硝化纖維基質(zhì)的測(cè)試帶上，測(cè)試帶上的抗CRP抗體會(huì)捕獲該復(fù)合物。因此，血液樣本中含有的CRP越多，測(cè)試帶上的復(fù)合物積聚得越多，信號(hào)就越大。熒光抗體的信號(hào)強(qiáng)度反應(yīng)了CRP被捕獲的數(shù)量，經(jīng)過i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀色處理，就能夠反應(yīng)出血液樣本中的CRP濃度。而在整個(gè)反應(yīng)體系過程中，熒光強(qiáng)度會(huì)因外界物質(zhì)的干擾，而導(dǎo)致熒光強(qiáng)度的不斷減弱；此外，熒光能量的不斷釋放會(huì)隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減弱甚至消失，最終導(dǎo)致儀器接收到的熒光信號(hào)減弱，呈現(xiàn)出血液樣本中的CRP結(jié)果也會(huì)逐漸降低的結(jié)果。

總之，放置時(shí)間過長(zhǎng)可對(duì)免疫熒光法測(cè)定超敏CRP造成影響，因此為了確保實(shí)驗(yàn)室發(fā)送的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，檢驗(yàn)科應(yīng)加派人手，加裝儀器數(shù)量或合理分流調(diào)配相關(guān)門急診超敏CRP標(biāo)本等方法解決標(biāo)本多，儀器少，標(biāo)本不能及時(shí)處理的問題。

[1]張亞蘭,王建利,王靜利,等.免疫熒光法與免疫散射比濁法測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白的相關(guān)性及其在感染中的重要意義[J].山西醫(yī)藥雜志,2015,44,20:2360-2361.

[2]劉建康,萬(wàn)敏才,李耀軍.2種方法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白結(jié)果的比對(duì)分析[J].中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)2014,22(12):179-180.

[3]馮暉,趙進(jìn),馬晶.3種C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法的比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(11):1470-1470.

[4]梁丹荔.C反應(yīng)蛋白方法學(xué)相關(guān)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(2):214-215.