特異性皮炎患者外周血Th1/Th2平衡的意義

胡俊青* 袁 青

（金華市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 金華 321000）

特異性皮炎是一種免疫紊亂的炎性皮膚病，臨床表型各異，其機(jī)制可能與患者易感基因、環(huán)境因素、皮膚屏障完整性破壞及免疫失調(diào)有關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞的自身免疫功能紊亂在其中發(fā)揮重要作用。輔助性T細(xì)胞（Th）參與介導(dǎo)自身免疫反應(yīng)過(guò)程，因此有必要研究Th細(xì)胞平衡在特異性皮炎發(fā)病過(guò)程中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象：選自2016年4月至2017年1月在我院門診就診的特異性皮炎患者20例作為病例組，年齡20～36歲。20例正常體檢者作為對(duì)照組，年齡22～34歲采集靜脈肝素抗凝血2 mL。

1.2 方法

1.2.1 Th1/Th2細(xì)胞百分率頻數(shù)檢測(cè)：AD患者及健康體檢者均于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血3～5 mL，以肝素鈉抗凝。向96孔細(xì)胞培養(yǎng)板吸取200 μL加入含10%小牛血漿的1640細(xì)胞培養(yǎng)液，加入200 μL肝素抗凝血等體積稀釋，充分混勻，加入植物血凝素、離子霉素及蛋白轉(zhuǎn)移抑制劑莫能霉素工作液各10 μL，置二氧化碳培養(yǎng)箱（37 ℃，5%CO2）培養(yǎng)6 h后，吸取200 μL加入流式試管，以PBS緩沖液洗滌2次后，棄上清加入CD4-FITC，CD8-PE、CD3-PECY5抗體各20 μL，放暗處避光反應(yīng)20 min后，加入細(xì)胞膜固定劑100 μL，充分混勻，再次放入暗處避光固定15 min后以PBS洗滌2次，傾去上清液，再加入破膜劑100PBS洗滌后，再次傾去上清液，加入IFN-γ-APC、IL-4-APC-CY7抗體各20 μL充分混勻，重懸細(xì)胞，染色后流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)。

1.2.2 Th1/Th2細(xì)胞因子檢測(cè)：將以上所取靜脈血3500RPM離心5 min，分離血漿。采用ELISA法測(cè)定血漿中IL-2、IFN-γ、IL-6和IL-10的表達(dá)水平。以Synergy H4全功能酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司生產(chǎn)）檢測(cè)，抗人IL-4、IFN-γ、IL-6及IL-10等ELISA試劑盒由美國(guó)Ebioscience公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用最新版本的SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二組比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 二組Th1和Th2細(xì)胞頻數(shù)檢測(cè)：特異性皮炎患者靜脈血的Th1輔助細(xì)胞水平和Th1/Th2相對(duì)比率明顯高于正常人，Th2輔助細(xì)胞水平明顯低于正常人，Th1/Th2比率失衡（表1）。

2.2 二組血清細(xì)胞因子水平的表達(dá)比較：特異性皮炎患者血清的白細(xì)胞介素-2和γ-干擾素蛋白含量明顯高于正常人，白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-10蛋白含量明顯低于正常人（表2）。

3 討 論

特異性皮炎發(fā)病機(jī)制是自身免疫功能紊亂，機(jī)制可能與免疫功能失調(diào)、皮膚屏障破壞、微生物變遷、環(huán)境因素及基因易感性有關(guān)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外報(bào)道AD發(fā)病率逐年上升，在歐美發(fā)達(dá)國(guó)家兒童患病率為10%～20%，成年人l%～3%[1]。先天性的免疫不足和后天的外界環(huán)境因素可能是導(dǎo)致本病發(fā)病的重要原因[2]。輔助T細(xì)胞主要功能是分泌具有免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)功能的細(xì)胞因子，在免疫反應(yīng)發(fā)揮重要作用，主要分為Th1、Th2兩種功能性亞群。Thl/Th2細(xì)胞的主要功能就是調(diào)控免疫反應(yīng)，Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ和白細(xì)胞介素-2等細(xì)胞因子，Th2細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-4等，主要介導(dǎo)體液免疫[3]。國(guó)內(nèi)外有學(xué)者認(rèn)為Th1/Th2失衡會(huì)導(dǎo)致特異性皮炎發(fā)病，Th1/Th2細(xì)胞此免疫過(guò)程主要是通過(guò)分泌不同的細(xì)胞因子，相互抑制達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。在機(jī)體正常狀態(tài)下，Th1/Th2細(xì)胞處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，如果動(dòng)態(tài)平衡被破壞，偏向其中一方，機(jī)體便會(huì)因?yàn)門h1細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)或Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)形成Th1/Th2“漂移”狀態(tài)從而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病[4]。馬蕾等通過(guò)檢測(cè)外周血中Th細(xì)胞發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)可能是特應(yīng)性皮炎發(fā)病中免疫功能紊亂的重要原因[5]。本研究發(fā)現(xiàn)特應(yīng)性皮炎患者體內(nèi)存Th1/Th2的病理性失衡，這與文獻(xiàn)一致。

表1 特異性皮炎患者與對(duì)照組外周血Th1和Th2細(xì)胞比率表達(dá)（%，±s）

表1 特異性皮炎患者與對(duì)照組外周血Th1和Th2細(xì)胞比率表達(dá)（%，±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.01；b與對(duì)照組比較，P＜0.05

分組 n Th1(%) Th2(%) Th1/Th2特異性皮炎組 20 12.38±5.82a 2.46±1.28a 8.64±3.28a對(duì)照組 20 7.68±3.72 5.16±3.16 4.26±1.78

表2 特異性皮炎患者與對(duì)照組外周血Th1/Th2細(xì)胞因子蛋白含量的表達(dá)比較（ng/mL，±s）

表2 特異性皮炎患者與對(duì)照組外周血Th1/Th2細(xì)胞因子蛋白含量的表達(dá)比較（ng/mL，±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.01；b與對(duì)照組比較，P＜0.05

分組 n IL-2 IFN-γ IL-6 IL-10特異性皮炎組 20 386.21±114.36a 246.76±75.32a 58.82±42.52a 48.57±24.42a對(duì)照組 20 146.72±66.32 112.74±74.26 108.25±58.64 112.54±72.82

Th1/Th2細(xì)胞病理性失衡在特異性皮炎的發(fā)病的復(fù)雜的病理過(guò)程扮演者重要角色，檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞的平衡，有助于AD的診斷及觀察患者病情變化，通過(guò)人工干預(yù)AD患者機(jī)體Th1/Th2比值讓機(jī)體恢復(fù)正常免疫功能狀態(tài)，達(dá)到治療疾病的目的。

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[3]Magombedze G,Reddy PB,Eda S,et al.Cellular and population plasticity of helper CD4(+) T cell responses[J].Front Physiol,2013,16(4):206.

[4]蔣有讓,刁慶春,史丙俊,等.特應(yīng)性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2016,45(18):2482-2483.

[5]馬蕾.特應(yīng)性皮炎患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與Th17細(xì)胞平衡狀態(tài)分析[J].中華皮膚科雜志,2012,45(7):481-484.