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      小型豬胃經(jīng)與腎經(jīng)經(jīng)脈不通病理模型的比較觀察?

      2018-03-22 06:23:34李宏彥王燕平佘銳萍賈術(shù)永周文婷王廣軍田宇瑛張維波
      關(guān)鍵詞:胃經(jīng)腎經(jīng)經(jīng)脈

      李宏彥,王燕平,佘銳萍,賈術(shù)永,周文婷,4,李 恒,張 洋,王廣軍,田宇瑛,王 澤,張維波△

      (1. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所,北京 100700; 2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,北京 100029; 3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 100094; 4. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所,北京 100700)

      證候是中醫(yī)學(xué)特有的概念,由一系列具有內(nèi)在聯(lián)系的癥狀或體征組成,這些疾病的外候稱為病候[1]。與西醫(yī)強(qiáng)調(diào)病菌致病不同的是,中醫(yī)認(rèn)為經(jīng)絡(luò)不通、氣血不調(diào)是疾病產(chǎn)生的主要原因,所引起的經(jīng)脈病候在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中記載頗多。那么,中醫(yī)理論的這個(gè)觀點(diǎn)能否被現(xiàn)代科學(xué)所證明,成為中醫(yī)基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵問(wèn)題之一。

      經(jīng)絡(luò)研究是我國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)研究的重要內(nèi)容。針對(duì)經(jīng)絡(luò)的實(shí)質(zhì),張維波等使用連續(xù)流阻測(cè)量、組織液壓波傳播測(cè)量和同位素示蹤等方法,發(fā)現(xiàn)循經(jīng)低流阻通道(low hydraulic resistance channel along meridians, LHRCM)[2],其中“低流阻通道”縮寫為L(zhǎng)HRC,研究其運(yùn)行組織液及內(nèi)含物質(zhì)的基本功能,并對(duì)各種中醫(yī)療法調(diào)節(jié)該通道的機(jī)制進(jìn)行了分析[3]。隨后又對(duì)LHRCM進(jìn)行了相關(guān)的病理研究,建立了“經(jīng)脈不通”病理模型[4]。研究發(fā)現(xiàn),凝膠堵塞小型豬的LHRCM后,其痛閾較注入凝膠前顯著降低[5],堵塞胃經(jīng)LHRC并飼養(yǎng)一段時(shí)間后剖檢發(fā)現(xiàn),胃腸有明顯臌氣的現(xiàn)象[6],初步表明由LHRCM代表的經(jīng)脈不通與癥狀相關(guān)。但堵塞不同經(jīng)脈的LHRC,其癥狀反應(yīng)是否不同?是否表現(xiàn)出與文獻(xiàn)描述的經(jīng)脈病候特點(diǎn)?本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,選擇容易操作及觀察的胃經(jīng)和腎經(jīng)的LHRC進(jìn)行造模并設(shè)對(duì)照組,觀察造模前后相關(guān)指標(biāo)的變化,探索LHRCM與經(jīng)脈病候的關(guān)系。

      1 材料與方法

      1.1 動(dòng)物及飼養(yǎng)方法

      選用中國(guó)實(shí)驗(yàn)用雄性小型豬(北京市琉璃河科興實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心)19只,體質(zhì)量(9±2) kg,毛色黑(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(京)2011-0014)。使用大型動(dòng)物專用籠具(1.3×2.2 m2,連續(xù)觀察組為1×0.7×0.8 m3)單籠飼養(yǎng)。每日提供濃縮飼料(希望飼料有限公司),8∶00給料150 g,20∶00給料100 g,飲水不限量。動(dòng)物房溫度(20±2) ℃,濕度(50±10)%Rh。

      1.2 主要儀器及試劑

      經(jīng)絡(luò)測(cè)定儀(576F30型,東華電子儀器廠)、連續(xù)流阻測(cè)定儀(針灸所研制)、干燥箱(202系列,上海圣科儀器設(shè)備有限公司)、電子天平(T-2000型,精度0.5 g)、Macrolane穩(wěn)定性透明質(zhì)酸(凝膠,瑞典Uppsala公司)、阿利新藍(lán)8GX(美國(guó)SIGMA公司)、豬源纖維蛋白黏合劑(悅靈膠,杭州普濟(jì)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司)、戊巴比妥鈉(德國(guó)分裝,含量>99%)、速眠新Ⅱ(吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司)、安特固強(qiáng)力膠(新加坡安特固化學(xué)有限公司),備皮刀、量杯、軟尺、游標(biāo)卡尺、體重秤、手術(shù)器材以及消毒酒精等。

      1.3 動(dòng)物分組

      實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為胃經(jīng)不通組(胃經(jīng)組)7只、腎經(jīng)不通組(腎經(jīng)組)7只和對(duì)照組5只,不同觀察指標(biāo)的動(dòng)物數(shù)量略有不同,具體數(shù)目見結(jié)果表中N值。從3組小型豬中各選1只進(jìn)行每日測(cè)量的連續(xù)觀察(連續(xù)觀察組),分別為胃經(jīng)不通豬(胃經(jīng)豬)、腎經(jīng)不通豬(腎經(jīng)豬)和對(duì)照豬。

      1.4 造模方法

      使用濃度為3%的戊巴比妥鈉溶液(0.5 ml/kg)和速眠新Ⅱ(0.1 ml/kg)分別注射小型豬兩側(cè)臀部肌肉進(jìn)行麻醉。備皮后用經(jīng)絡(luò)測(cè)定儀測(cè)量循經(jīng)低電阻點(diǎn)[7],以點(diǎn)標(biāo)記,點(diǎn)間距離約1~2 cm,胃經(jīng)豬測(cè)量胃經(jīng)區(qū)域和腎經(jīng)區(qū)域,對(duì)照豬只做麻醉處理。用流阻測(cè)定儀在低電阻點(diǎn)的連線上測(cè)低流阻點(diǎn)[2, 8],測(cè)定后連接裝有凝膠(含少量阿利新藍(lán))的注射器,向低流阻點(diǎn)緩慢注入0.5~1.0 ml,胃經(jīng)單側(cè)4點(diǎn),雙側(cè)共8點(diǎn);腎經(jīng)單側(cè)3點(diǎn),雙側(cè)共6點(diǎn)。對(duì)于連續(xù)觀察組,為進(jìn)一步鞏固凝膠的阻斷作用,將少量(約0.3 ml)悅靈膠注入凝膠皮丘邊緣與低電阻線相交處的皮下組織,取出針頭后按壓針孔5 s[9],造模完成后送至動(dòng)物房飼養(yǎng)7~9周。

      1.5 觀察內(nèi)容及方法

      1.5.1 代謝觀察 測(cè)量各組在取材前1周每日的飲水量、尿量和糞便量;連續(xù)觀察組觀察造模前1周和造模后51 d每日飲水量、尿量和糞便量。飲水量:用量杯測(cè)量當(dāng)日剩余水量,計(jì)算倒入水量與剩余水量的差值;尿量:用量杯測(cè)量收集桶中的尿量;糞便量:直接稱量代謝盤中的糞便為糞便濕重;將糞便放入最高溫度為150 ℃、定時(shí)25 min的干燥箱,待溫度降至36 ℃取出糞便稱重,為糞便干重;計(jì)算糞便含水率=(糞便濕重-糞便干重)÷糞便濕重×100%。

      1.5.2 體質(zhì)量、體尺、牙齒的測(cè)量與計(jì)算 用體重秤和軟尺分別測(cè)量造模當(dāng)天和取材當(dāng)天各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體質(zhì)量和體尺(胸圍、腹圍、腰圍、體長(zhǎng)),計(jì)算造模前后的胸圍、腹圍和腰圍的體軀指數(shù),如胸圍體軀指數(shù)=胸圍÷體長(zhǎng)×100%。造模后第7~9周處死,取出下頜骨及牙齒,使用游標(biāo)卡尺測(cè)量雙側(cè)門齒和犬齒的長(zhǎng)度及前臼和臼齒的寬度[9]。

      1.5.3 臟器系數(shù)的計(jì)算 動(dòng)物處死后打開胸腹腔,取出心臟、肺、脾、胃、肝臟、腎臟、睪丸、前列腺、膀胱,并稱量各臟器的離體質(zhì)量。計(jì)算臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量÷體質(zhì)量×100%[10]。

      1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      2 結(jié)果

      2.1 飲水量及二便量

      表1顯示,連續(xù)觀察組造模前后自身比較,飲水量對(duì)照豬造模后比造模前極顯著升高37.45%(P<0.01),胃經(jīng)豬造模后比造模前極顯著升高49.31%(P<0.01),腎經(jīng)豬造模后比造模前降低1.38%(P>0.05)。尿量對(duì)照豬造模后比造模前顯著升高35.00%(P<0.05),胃經(jīng)豬造模后比造模前極顯著升高56.54%(P<0.01),腎經(jīng)豬造模后比造模前降低1.25%(P>0.05)。

      造模后組間比較,胃經(jīng)組飲水量顯著高于對(duì)照組30.57%(P<0.05),胃經(jīng)組極顯著高于腎經(jīng)組37.47%(P<0.01),腎經(jīng)組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);胃經(jīng)組尿量顯著高于對(duì)照組41.24%(P<0.05),胃經(jīng)組極顯著高于腎經(jīng)組57.40%(P<0.01),腎經(jīng)組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);胃經(jīng)組糞便含水率極顯著低于腎經(jīng)組35.10%(P<0.01),其他組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

      表1 各組飲水量、尿量和糞便含水率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

      注:造模前后自身比較:*P<0.05,**P<0.01;與胃經(jīng)組比較:△P<0.05,△△P<0.01

      2.2 體軀指數(shù)

      表2顯示,胃經(jīng)組腰圍體軀指數(shù)顯著大于對(duì)照組6.78%(P<0.05),胸圍體軀指數(shù)和腹圍體軀指數(shù)組間、腎經(jīng)組與其他2組腰圍體軀指數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

      表2 各組體軀指數(shù)統(tǒng)計(jì)表

      注:與對(duì)照組比較:*P<0.05

      2.3 牙齒

      表3顯示,腎經(jīng)組雙側(cè)第1門齒的長(zhǎng)度極顯著大于胃經(jīng)組(30.79%)和對(duì)照組(20.62%,P<0.01),其余各齒長(zhǎng)度及寬度組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

      表3 雙側(cè)門齒與犬齒長(zhǎng)度及前臼與臼齒的寬度測(cè)量比較

      注:與另外2組比較:**P<0.01

      2.4 臟器系數(shù)

      表4顯示,心臟臟器系數(shù)腎經(jīng)組顯著低于對(duì)照組24.14%(P<0.05)。腎臟臟器系數(shù)胃經(jīng)組極顯著高于對(duì)照組23.60%(P<0.01),腎經(jīng)組顯著高于對(duì)照組12.82%(P<0.05)。其他各臟器系數(shù)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

      一些臟器系數(shù)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但實(shí)際均值差異較大,如腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)比胃經(jīng)組低22.22%(P=0.054),比對(duì)照組低26.32%(P=0.36)。

      表4 各組臟器系數(shù)統(tǒng)計(jì)

      注:與對(duì)照組比較:*P<0.05,**P<0.01

      3 討論

      在疾病發(fā)生的早期,機(jī)體常無(wú)明顯的器質(zhì)性改變,只表現(xiàn)出某些功能和行為的異常變化,中醫(yī)則針對(duì)這些病候進(jìn)行診斷辨證。張維波等將這些在人體感官可觀察范圍內(nèi)的疾病表現(xiàn)稱為中醫(yī)宏觀物理表征[12]。本研究利用現(xiàn)代測(cè)量工具,量化原本定性的宏觀指標(biāo),并利用數(shù)學(xué)工具進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,建立宏觀定量法[9],使中醫(yī)的實(shí)驗(yàn)研究在不失整體觀的前提下觀察更為精確,為開創(chuàng)中醫(yī)特色的實(shí)驗(yàn)研究提供了新方法。

      中醫(yī)診斷學(xué)中的陽(yáng)明經(jīng)證及陽(yáng)明腑實(shí)證中,有“渴欲飲水,口干舌燥,大便秘結(jié)和腹脹滿”的癥狀[13]。與本實(shí)驗(yàn)中胃經(jīng)組口渴、便干、小便多及腹圍增大的表現(xiàn)相吻合。小型豬的腰圍位于下腹部水平,反映了腹部的大小[9],故腰圍體軀指數(shù)增大可作為“腹脹滿”的定量描述。前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),堵塞胃經(jīng)LHRC后,小型豬出現(xiàn)了腸胃臌氣的現(xiàn)象[6],該現(xiàn)象可能是胃經(jīng)組腰圍增大的原因。小便量多可能是因?yàn)樾⌒拓i的小汗腺不發(fā)達(dá),無(wú)法大量排汗(“潮熱、汗出”,陽(yáng)明腑實(shí)證)[14],故多飲的水液只能通過(guò)小便排出,造成小便多的現(xiàn)象。另外,前期對(duì)小型豬的行為學(xué)研究發(fā)現(xiàn),堵塞胃經(jīng)LHRC后,小型豬表現(xiàn)出煩躁及眠差的異常行為改變[15],與《靈樞·經(jīng)脈》中記載的胃經(jīng)病候“欲上高而歌,棄衣而走”及“胃不和則臥不安”的病候相吻合。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中胃經(jīng)組出現(xiàn)的陽(yáng)明經(jīng)證與陽(yáng)明腑實(shí)證的現(xiàn)象,說(shuō)明凝膠堵塞胃經(jīng)LHRC造成了與足陽(yáng)明胃經(jīng)和胃腑相關(guān)的病候。

      中醫(yī)認(rèn)為腎主水,與水液代謝關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)的腎經(jīng)組出現(xiàn)飲水、尿量均較少及便稀現(xiàn)象,其中飲水量與尿量并未像對(duì)照豬那樣隨其月齡的增加而升高,說(shuō)明堵塞腎經(jīng)引起了水液代謝障礙。腎藏精,主生殖,為先天之本,主宰機(jī)體的生殖功能。腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)較小,與胃經(jīng)組比較差異高達(dá)22.22%,雖然樣本量小,但統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果已相當(dāng)接近顯著性差異。在生物醫(yī)學(xué)研究中,動(dòng)物臟器系數(shù)是衡量動(dòng)物臟腑功能狀態(tài)的重要指標(biāo)[16],腎經(jīng)組睪丸臟器系數(shù)較低的現(xiàn)象,說(shuō)明堵塞腎經(jīng)LHRC影響了生殖器官的發(fā)育,進(jìn)而可影響其生殖功能,初步證明了中醫(yī)“腎主生殖”的理論。腎主骨,齒為骨之余,骨與齒均依賴腎中精氣的滋養(yǎng)濡潤(rùn)?!鹅`樞·經(jīng)脈》中多次提到腎經(jīng)(少陰經(jīng))與齒的關(guān)系,如“足少陰氣絕則骨枯,少陰者,冬脈也,伏行而濡骨髓者也,故骨不濡則肉不能著骨也。骨肉不相親則肉軟卻,肉軟卻故齒長(zhǎng)而垢”。因此,腎經(jīng)組第1門齒較長(zhǎng)可能與凝膠堵塞腎經(jīng)LHRC后,腎經(jīng)氣血虧虛導(dǎo)致齒齦分離、牙齦萎縮,使得裸露于牙齦外的部分相對(duì)變長(zhǎng)。腎經(jīng)組出現(xiàn)的水液代謝功能障礙、生殖器官發(fā)育不良和第1門齒裸露部分增長(zhǎng)的現(xiàn)象,說(shuō)明凝膠堵塞小型豬腎經(jīng)LHRC造成了與腎經(jīng)和泌尿生殖系統(tǒng)相關(guān)的病候。

      古人不僅對(duì)機(jī)體的宏觀物理表征進(jìn)行觀察,對(duì)臟器也進(jìn)行了解剖與測(cè)量。早在《靈樞·腸胃》中就有相關(guān)記載,如“舌重十兩……咽門重十兩”等,現(xiàn)代研究也常以臟器系數(shù)作為臟腑功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究中堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC主要對(duì)腎臟的臟器系數(shù)影響較為明顯,與對(duì)照組比較顯著增加,其原因可能與注射至動(dòng)物組織中的凝膠以及其中的阿利新藍(lán)染料有關(guān)。上述增加的物質(zhì),特別是阿利新藍(lán)被機(jī)體視為異物,需要通過(guò)腎臟排除,因此增加了腎臟的代謝負(fù)擔(dān),導(dǎo)致腎臟輕度水腫,使得其臟器系數(shù)增加,具體機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)觀察。另外腎經(jīng)組的心臟臟器系數(shù)較低,可能與中醫(yī)的“心腎相交”有關(guān)。

      表6顯示,根據(jù)堵塞小型豬胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC所得到的宏觀定量指標(biāo),結(jié)合以往的研究,將2組實(shí)驗(yàn)結(jié)果與中醫(yī)證候進(jìn)行比較。

      表6 堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與中醫(yī)證候比較

      4 結(jié)語(yǔ)

      在經(jīng)脈的組織液通道學(xué)說(shuō)及前期對(duì)小型豬行為及胃腸剖檢觀察的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)對(duì)凝膠堵塞小型豬LHRCM后的表現(xiàn)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明,堵塞胃經(jīng)與腎經(jīng)LHRC,小型豬分別出現(xiàn)與中醫(yī)胃、腎及所屬經(jīng)脈相關(guān)的不同病候,這種差異表現(xiàn)在水液代謝、體型變化、牙齒及生殖器官的臟器系數(shù)等方面,說(shuō)明堵塞不通的LHRCM對(duì)小型豬有相對(duì)特異性影響,“經(jīng)脈不通”是導(dǎo)致相關(guān)經(jīng)脈病候的病理機(jī)制,進(jìn)一步證明了LHRCM是經(jīng)絡(luò)解剖學(xué)結(jié)構(gòu)之一(致謝:感謝中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院的老師和同學(xué)們?cè)谛⌒拓i剖檢和病理觀察方面提供的幫助)。

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