口腔癌患者手術(shù)前后細(xì)胞免疫功能的變化及臨床意義

李天客 包 陽(yáng) 陳 中 張素欣 尹 克

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科，河北 石家莊 050071)

既往研究顯示〔1〕，在腫瘤患者發(fā)病初期、中期或晚期，機(jī)體免疫功能均出現(xiàn)不同程度的下降?？谇话┗颊卟∏榈倪M(jìn)展與機(jī)體的免疫系統(tǒng)存在密切關(guān)系，機(jī)體免疫系統(tǒng)能夠識(shí)別癌細(xì)胞表面抗原，激活免疫效應(yīng)細(xì)胞，釋放相關(guān)效應(yīng)分子發(fā)揮免疫應(yīng)答作用，攻擊并殺傷癌細(xì)胞〔2〕。Mehta等〔3〕研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是具有降低腫瘤免疫抑制反應(yīng)的亞群，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能異常與人類某些疾病的發(fā)生、發(fā)展存在緊密關(guān)系。隨著分子生物學(xué)技術(shù)及免疫學(xué)的不斷發(fā)展，多項(xiàng)研究證實(shí)〔4，5〕，在乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、肺癌及消化道腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞表型及相關(guān)輔助性T淋巴細(xì)胞因子均發(fā)生相應(yīng)變化，且能夠反映腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)。本研究旨在探討口腔癌患者手術(shù)前后細(xì)胞免疫功能變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年9月至2016年1月收治的口腔癌患者為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①被確診為口腔癌；②在納入研究前未進(jìn)行其他任何抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并免疫系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重心肝腎疾病及其他惡性腫瘤；②合并意識(shí)障礙、精神疾病及中途退出者。共收集口腔癌患者30例作為觀察組，男18例，女12例；年齡27～58〔平均(42.38±5.38)〕歲；發(fā)病部位：頰8例，舌6例，牙齦12例，口底4例；臨床分期：Ⅲ期21例，Ⅳ期9例。同期健康體檢者30例作為對(duì)照組，男15例，女15例，年齡24～56〔平均(41.47±6.74)〕歲。兩組性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。

1.2方法

1.2.1儀器 采用Epics-XL型流式細(xì)胞儀，購(gòu)于美國(guó)Beckman Coulter公司；紅細(xì)胞裂解液及單克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)Beckman Coulter公司。

1.2.2檢查指標(biāo) 兩組研究對(duì)象在納入研究24 h內(nèi)抽取空腹肘靜脈血3 ml，觀察組在手術(shù)結(jié)束1 w后再次抽取空腹肘靜脈血3 ml。將所有收集樣本加入肝素進(jìn)行抗凝處理，然后置于-80℃保存待檢。

1.2.2.1T細(xì)胞表型測(cè)定 取收集樣本做成4份100 μl樣本，每份均加入10 μl異硫氰酸熒光素標(biāo)記血液CD3單克隆抗體與CD4單克隆抗體；10 μl藻紅蛋白標(biāo)記血液CD8單克隆抗體與CD56單克隆抗體；置于25℃避光孵育1 h后，加入紅細(xì)胞裂解液10 min后，離心，取上清液加入1 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)血清T細(xì)胞各亞型百分比及CD4+/CD8+比值。

1.2.2.2T細(xì)胞內(nèi)γ干擾素(INF-γ)、白介素(IL)-2水平測(cè)定 取收集樣本做成4份100 μl樣本，每份中分別加入藻紅蛋白標(biāo)記的IL-2單克隆抗體，異硫氰酸熒光素標(biāo)記的血液CD4單克隆抗體，藻紅蛋白標(biāo)記的INF-γ單克隆抗體，藻紅蛋白標(biāo)記的INF-γ與異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD4單克隆抗體，置于25℃避光孵育1 h，加入紅細(xì)胞裂解液10 min后，離心，取上清液加入1 ml PBS后，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)IL-2陽(yáng)性，INF-γ陽(yáng)性，INF-γ、CD4雙陽(yáng)性，IL-2、CD4雙陽(yáng)性T細(xì)胞占總細(xì)胞的比例。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0軟件，多組計(jì)量資料間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1手術(shù)前后兩組T細(xì)胞亞群比較 觀察組在手術(shù)前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平顯著低于對(duì)照組，CD8+、CD56+水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；手術(shù)后，觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均顯著上升，CD8+、CD56+水平顯著降低(P<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于對(duì)照組，且CD8+、CD56+水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

2.2兩組手術(shù)前后T細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子水平比較 手術(shù)前觀察組IL-2陽(yáng)性、IL-2、CD4雙陽(yáng)性及INF-γ、CD4雙陽(yáng)性水平均顯著低于對(duì)照組，INF-γ陽(yáng)性水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；手術(shù)后，觀察組IL-2陽(yáng)性、IL-2、CD4雙陽(yáng)性及INF-γ、CD4雙陽(yáng)性水平顯著升高，INF-γ陽(yáng)性水平顯著降低(P<0.05)，且手術(shù)后觀察組各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 手術(shù)前后兩組T細(xì)胞亞群比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；與手術(shù)前比較：2)P<0.05；下表同

表2 兩組手術(shù)前后T細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子水平比較

3 討 論

口腔癌是嚴(yán)重影響人們健康的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居癌癥發(fā)病順位第六位，口腔癌以鱗狀細(xì)胞癌為主，約占80%以上〔6〕。由于口腔癌發(fā)病部位特殊，一方面影響患者的飲食，另一方面影響患者美觀，患者常常出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良或心理障礙。既往報(bào)道〔7〕，腫瘤常常導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，對(duì)疾病的進(jìn)展、轉(zhuǎn)歸均具有重要的影響。目前，口腔癌主要以手術(shù)治療為主，但在手術(shù)治療的基礎(chǔ)上給予免疫治療對(duì)患者的康復(fù)具有促進(jìn)作用，而掌握口腔癌患者手術(shù)治療對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響，對(duì)開展免疫治療具有重要的指導(dǎo)意義。

T細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤過程中重要的免疫細(xì)胞，依據(jù)表面分子標(biāo)志物的差異可分為不同的亞群，在抗腫瘤過程中分別扮演著抑制腫瘤發(fā)生、進(jìn)展的作用，如CD3+細(xì)胞數(shù)量可以反映細(xì)胞免疫功能，CD4+細(xì)胞能夠輔助機(jī)體抵御腫癌細(xì)胞，CD8+細(xì)胞反映機(jī)體免疫抑制的強(qiáng)度，而CD4+/CD8+比值降低可以反映疾病出現(xiàn)進(jìn)展，且預(yù)后不良〔8〕；而CD56+表達(dá)標(biāo)志著癌癥的進(jìn)展。此外，T淋巴細(xì)胞在抗腫瘤過程中除可以直接殺傷癌細(xì)胞外，還可以分泌細(xì)胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，如IL-2、INF-γ等〔9，10〕。本研究顯示，腫瘤患者免疫功能出現(xiàn)嚴(yán)重下降；手術(shù)治療能夠提升患者免疫功能，但仍未恢復(fù)到健康水平，其原因：一方面，手術(shù)清除腫瘤負(fù)荷，改善患者機(jī)體免疫功能；另一方面，手術(shù)能夠誘發(fā)機(jī)體創(chuàng)傷修復(fù)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，對(duì)免疫系統(tǒng)具有正向的促進(jìn)作用。機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子水平可以反映機(jī)體抗腫瘤反應(yīng)狀態(tài)，有研究顯示〔11〕，腫瘤患者外周血中細(xì)胞因子水平發(fā)生變化，如IL-2、INF-γ等細(xì)胞因子水平降低。本研究顯示，腫瘤可導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子下降，與既往研究一致〔12〕。手術(shù)患者細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能得到改善，其原因一方面由于IL-2、INF-γ抑制自身免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫耐受，阻止抗腫瘤免疫反應(yīng)的發(fā)生；另一方面，IL-2、INF-γ能夠抑制CD8+、CD56+等細(xì)胞的增殖，促進(jìn)CD4+等細(xì)胞增殖，提高機(jī)體免疫力。

綜上所述，口腔癌患者機(jī)體抗免疫抑制功能下降，手術(shù)治療能夠改善患者免疫水平及免疫調(diào)節(jié)功能，改善患者病情。

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