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    實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動物模型的應(yīng)用評價與中醫(yī)藥治療探討*

    2018-03-19 03:23:40宋慧榮任小巧羅亞敏高明慧陶曉華
    關(guān)鍵詞:動物模型偏頭痛中醫(yī)藥

    宋慧榮,任小巧,羅亞敏,李 冉,高明慧,頓 珠,陶曉華,*

    (1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 北京 100029;2.西藏藏醫(yī)學(xué)院 拉薩 850000)

    偏頭痛是一種常見且復(fù)雜的多因素、多基因疾病[1],屬于中醫(yī)學(xué)“頭風(fēng)”范疇,其表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)頭部反復(fù)發(fā)作的搏動性疼痛,可伴有惡心、嘔吐、視物異常等先兆性神經(jīng)癥狀和高敏反應(yīng),其發(fā)生與遺傳、內(nèi)分泌、飲食及精神因素等有一定關(guān)系。偏頭痛是一種疼痛綜合征,是人的一種主觀感受,其發(fā)病機(jī)理一直是學(xué)術(shù)界研究難點(diǎn)之一,如何更好的應(yīng)用動物模型來評價醫(yī)療技術(shù)的療效,是學(xué)術(shù)界研究探討的重點(diǎn),本文主要針對中醫(yī)藥治療研究偏頭痛時動物模型的選擇進(jìn)行探討,以期對中醫(yī)藥治療偏頭痛研究有所啟示。

    1 中藥治療偏頭痛動物模型的研究

    實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動物模型的研究是偏頭痛機(jī)理探討和藥物作用機(jī)制探討的重要手段,也是連接實(shí)驗(yàn)研究與臨床應(yīng)用的橋梁。中藥治療偏頭痛的有效性和安全性已經(jīng)得到了廣泛認(rèn)同,但由于中藥研究的特殊性,要求實(shí)驗(yàn)動物模型不但在發(fā)病機(jī)制方面與疾病本身有相似性,而且要有證候相似性,模型選擇正確與否,直接影響研究的成敗[2]。我國目前建立的偏頭痛模型[1-3]有:基于血管學(xué)說的硝酸甘油模型和利血平化低5-HT(5-羥色胺)模型,基于神經(jīng)血管源性學(xué)說的三叉神經(jīng)模型、硬腦膜模型和上矢竇區(qū)硬腦膜模型,基于皮層擴(kuò)散性抑制學(xué)說的皮層擴(kuò)散性抑制(Cortical Spreading Deprssion,CSD)模型,基于基因因素的基因工程模型以及原發(fā)性偏頭痛模型等。這些偏頭痛模型在偏頭痛機(jī)制及藥物研究方法的應(yīng)用起到了積極的作用?,F(xiàn)將中藥治療部分偏頭痛模型的研究整理如下:

    1.1 平抑肝陽、祛風(fēng)止痛類藥物的研究

    該型偏頭痛多由風(fēng)陽上擾或肝陽上亢,病人常見癥狀為兩側(cè)頭部脹痛、急躁易怒、面紅目赤等,這與“血管擴(kuò)張”[3]為機(jī)理的硝酸甘油模型動物癥狀“雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安”[3]相似。該模型多用于研究平抑肝陽、祛風(fēng)止痛類藥物,任永欣等人[4]用硝酸甘油模型進(jìn)行偏頭痛大鼠實(shí)驗(yàn)研究,顯示頭風(fēng)飲(川芎、天麻)能顯著抑制偏頭痛模型增強(qiáng)的c-fos、c-jun表達(dá),提示頭風(fēng)飲具有治療實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動物模型的作用。李智等[5]研究經(jīng)天麻鉤藤飲治療后偏頭痛肝陽上亢證大鼠下丘腦蛋白表達(dá)上具有差異,而所鑒定的這5個蛋白質(zhì)可能與天麻鉤藤飲的治療機(jī)制有關(guān)。

    1.2 溫經(jīng)散寒、活血化瘀類藥物的研究

    該型偏頭痛多由寒凝血瘀所致,病人常見癥狀為:頭痛如刺、固定不移、畏寒肢冷、精神不振等,與“血管擴(kuò)張后收縮痙攣”[2]為機(jī)理的利血平化低5-HT模型癥狀“閉目、倦伏少動、腹瀉、體溫降低、進(jìn)食量少、弓背、全身顫抖、強(qiáng)迫性偏頭、翻滾、抽搐”[6]相似。該類模型多用于研究溫經(jīng)散寒、活血化瘀類藥物,潘旭鳴等[7]研究發(fā)現(xiàn)少腹逐瘀湯、補(bǔ)陽還五湯及血府逐瘀湯3種活血化瘀方均能顯著提高偏頭痛小鼠痛閾值,升高肛溫,其中少腹逐瘀湯能升高腦組織5-HT的含量,證明此3種活血化瘀方對利血平所致偏頭痛模型小鼠均有一定的治療作用,其中少腹逐瘀湯的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)模型小鼠腦內(nèi)5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān),初步反證利血平所致偏頭痛小鼠模型中醫(yī)證型與寒凝血瘀證較為接近。吳燕川等[8]研究發(fā)現(xiàn)溫經(jīng)散寒,化濕降逆的吳茱萸湯能升高虛寒型模型鼠腦組織內(nèi)5-HT、DA(多巴胺),血清內(nèi)NO(一氧化氮)含量,降低腦組織內(nèi)NO含量,能有效治療偏頭痛。

    1.3 逐瘀通絡(luò)、熄風(fēng)化痰類藥物的研究

    該型偏頭痛多由痰瘀絡(luò)阻所致,病人常見癥狀為:頭痛攻沖作痛或刺痛、目眩畏光、惡心嘔吐、偏身麻木,或急躁易怒,反復(fù)發(fā)作,與“皮層電活動異常、腦血流量改變”為機(jī)理的CSD模型“偏身麻木、閃光幻覺、黑朦等先兆癥狀和亢奮性偏頭痛癥狀”,以及“刺激神經(jīng)血管系統(tǒng)釋放炎癥介質(zhì)”為機(jī)理的神經(jīng)血管源性模型先兆性癥狀和頭痛癥狀“惡心、嘔吐、畏光和頭部甩動、前肢頻繁撓頭”[1]相類似。該模型多用于研究逐瘀通絡(luò)、熄風(fēng)化痰類藥物。如楊洪軍等[9]用皮層擴(kuò)展性抑制模型研究發(fā)現(xiàn)5-HT可以明顯延長CSD的持續(xù)時間,具有祛風(fēng)通絡(luò)止痛作用的大川芎丸可以降低正常狀態(tài)CSD的幅度和出現(xiàn)個數(shù),縮短高5-HT狀態(tài)下的CSD持續(xù)時間,證明5-HT對CSD具有明顯的增強(qiáng)作用,大川芎丸可以抑制CSD,可能是其治療偏頭痛的作用機(jī)制之一。劉婷[10]采用電刺激三叉神經(jīng)模型研究發(fā)現(xiàn)具有熄風(fēng)滌痰、逐瘀止痛的頭痛寧膠囊可明顯抑制急性偏頭痛大鼠頸靜脈血CGRP的含量、減少腦膜血流量,從而有效地治療偏頭痛。

    1.4 清肝瀉火、解郁安神類藥物的研究

    原發(fā)性頭痛模型鼠和偏頭痛患者有以下相似性[1]:陣發(fā)性的三叉神經(jīng)痛閾值的改變;痛閾值降低的體征可以遺傳;對降鈣素基因相關(guān)肽CGRP等頭痛誘發(fā)劑高敏;對聲音敏感;能被臨床使用的發(fā)作期藥物和預(yù)防性藥物緩解。這些特征癥狀與中醫(yī)肝郁化火型偏頭痛癥狀(頭痛劇烈、急躁煩亂或精神抑郁、睡眠不安)相類似。肝為“將軍之官”,主疏泄條達(dá),主人之情志,主升主動,相火寄于肝臟之中,不良情緒刺激容易引起肝郁化火,即肝的疏泄功能失常,相火不得散布流通于全身,郁于經(jīng)脈之間,氣火沿肝經(jīng)逆沖,升發(fā)太過,而擾動清竅而病發(fā)。目前在中醫(yī)藥研究中的此模型應(yīng)用很少,從臨床研究[11]發(fā)現(xiàn),使用丹梔逍遙散化裁方治療后患者心煩、失眠、喜太息等精神癥狀的緩解明顯,該方能夠有效的改善不良心理狀態(tài),緩解精神壓力等疏肝理氣、調(diào)節(jié)情志以及促進(jìn)患者睡眠質(zhì)量提高的寧心安神作用。

    2 中藥治療偏頭痛實(shí)驗(yàn)?zāi)P偷脑u價

    上述所論偏頭痛模型的形成機(jī)理各不相同,與中醫(yī)偏頭痛的不同證型的病機(jī)尚不能完全對應(yīng),因此,基于中醫(yī)藥理論正確選擇合適的偏頭痛模型是中醫(yī)藥治療偏頭痛有效性、安全性評價的基本要求。

    2.1 硝酸甘油模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    文獻(xiàn)顯示,硝酸甘油模型是研究偏頭痛的首選模型,最大優(yōu)點(diǎn)是造模因素單一,只需注射定量硝酸甘油即可,簡單易操作、活體觀察,因此,應(yīng)用廣泛;但細(xì)究其用于中醫(yī)藥的研究卻存在理法方藥未明而差強(qiáng)人意。如在行為學(xué)指標(biāo)的采集方面,付先軍[12]等人建立了一套行為學(xué)評價體系,但耗時長、計(jì)數(shù)方法不明,人為計(jì)數(shù)觀察偏倚大;有些研究存在藥物作用機(jī)制與模型選擇不符的現(xiàn)象,如有學(xué)者[13]用該模型研究正天丸對偏頭痛的治療作用,正天丸中的當(dāng)歸、桃仁、紅花、細(xì)辛、麻黃、附片、雞血藤等藥物活血祛瘀、溫陽止痛,與硝酸甘油模型擴(kuò)張血管的機(jī)理有所差異。其引用文章[14]的表述為“正天丸能降低血管阻力、增加腦血流量、改善微循環(huán)”,但運(yùn)用的模型為多巴胺和硝酸甘油聯(lián)合造模,血管呈現(xiàn)先收縮后舒張,模擬血管收縮異常的偏頭痛癥狀,值得深究。

    2.2 利血平化低5-HT模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    利血平化低5-HT模型模擬了血管擴(kuò)張和收縮的全過程,但在實(shí)施過程中只著重了血管收縮:如上述“吳茱萸膠囊”和“少腹逐瘀湯”的偏頭痛實(shí)驗(yàn)研究主要針對該模型后期血管收縮,模糊了藥物在血管擴(kuò)張時的功效;再者,該模型造模方法周期長,操作技術(shù)要求高、繁瑣,既要用單胺類遞質(zhì)耗竭劑利血平誘發(fā)偏頭痛,又局部注射凝血塊誘發(fā)腦血管痙攣[2],動物死亡率較高,不適宜在實(shí)驗(yàn)中大批量復(fù)制。

    2.3 CSD模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    CSD模型會出現(xiàn)一系列的偏頭痛先兆癥狀,楊洪軍[9]等人在老鼠麻醉狀態(tài)下用鉆顱注射氯化鉀直接作用于皮層造成血流改變,模擬頭痛發(fā)作時的血液流變,技術(shù)要求較高,鉆顱過程中易可能引起炎癥,造成誤差,且大鼠始終處于麻醉狀態(tài),僅適用于研究實(shí)驗(yàn)指標(biāo)而無法觀察偏頭痛的先兆期和發(fā)作期癥狀特點(diǎn)。

    2.4 神經(jīng)血管源性模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    神經(jīng)血管源性模型中三叉神經(jīng)模型最為常見,通過刺激三叉神經(jīng)釋放降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、P物質(zhì)等神經(jīng)肽引起血管擴(kuò)張和通透性增加,有效模擬了偏頭痛的發(fā)作過程,劉婷[10]運(yùn)用電刺激三叉神經(jīng)節(jié),出現(xiàn)刺激側(cè)大鼠咀嚼肌收縮,口鼻分泌物增多前肢頻繁搔頭,煩躁不安等癥狀為造模成功,結(jié)果側(cè)腦膜血管擴(kuò)張,腦膜血流量增加,并實(shí)時監(jiān)測血流變化。但研究也有一定片面性,實(shí)驗(yàn)過程中不僅三叉神經(jīng)可產(chǎn)生疼痛,中樞疼痛調(diào)控紊亂也可產(chǎn)生疼痛;且電刺激法對技術(shù)操作和儀器設(shè)備要求較高,難以在短時間內(nèi)大量復(fù)制。

    2.5 基因工程模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    現(xiàn)已有通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立FHM1和FHM2兩種基因剔除小鼠的模型[1],研究發(fā)現(xiàn)血液中神經(jīng)遞質(zhì)的的增流與可能神經(jīng)興奮相關(guān),該模型從基因角度研究偏頭痛機(jī)理,發(fā)展前景廣闊,但技術(shù)要求高,研究正在進(jìn)展中。

    2.6 原發(fā)性偏頭痛模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用評價

    與上述五種人為造成的繼發(fā)性偏頭痛動物模型相比,該模型具有自發(fā)性特點(diǎn),無需人工干預(yù)即可還原偏頭痛發(fā)作性的痛、視、聽、嗅及面部觸覺敏感性增高的現(xiàn)象。此模型很可能幫助研究者回答偏頭痛是如何自發(fā)產(chǎn)生的,甚至提出新的假說,找到對聲、光等敏感的易患基因[1],是最有前景的動物模型。但這種大鼠模型如何獲取或如何復(fù)制也將是研究者需要解決的問題。

    3 討論與結(jié)論

    3.1 根據(jù)干預(yù)手段的主要作用機(jī)制選擇偏頭痛動物模型

    影響動物模型選擇的因素有研究內(nèi)容、研究藥物的特點(diǎn)和自身的實(shí)驗(yàn)條件等,不同的偏頭痛模型有不同的造模機(jī)制,中醫(yī)藥治療手段不同,其作用機(jī)制亦明顯不同,開展中醫(yī)藥干預(yù)偏頭痛作用機(jī)制研究時,應(yīng)該充分考慮藥物的作用機(jī)制與模型的造模機(jī)制是否相符,避免研究的盲目性。

    硝酸甘油模型的機(jī)理為腦血管過度擴(kuò)張,與肝陽上亢類偏頭痛類似,故此模型適用于研究某種收縮血管或平抑肝陽的藥物,又因?yàn)槟P蛣游锾幱谇逍褷顟B(tài)有利于行為學(xué)觀察方便,故著重觀察動物偏頭痛行為學(xué)變化時可選用,實(shí)驗(yàn)動物可選用易于觀察行為學(xué)的大鼠;利血平化低5-HT模型的機(jī)理為血管擴(kuò)張后又產(chǎn)生收縮和痙攣,與寒凝血瘀類偏頭痛類似,故此模型適用于研究某種擴(kuò)張血管或溫陽散寒的藥物,因?qū)嶒?yàn)中動物精神萎靡,不適合觀察行為學(xué),但可用于研究PGE2(前列腺素)、5-HT等外周血炎癥因子,其動物選用大鼠、小鼠皆可;CSD模型的機(jī)理為人為直接刺激皮層,造成神經(jīng)元紊亂、皮層電活動異常,神經(jīng)血管性模型的機(jī)理為人為直接刺激神經(jīng)血管系統(tǒng)釋放神經(jīng)肽引起血管擴(kuò)張和通透性增加,此兩類模型與痰瘀阻絡(luò)類偏頭痛類似,故適用于研究某種逐瘀通絡(luò)、熄風(fēng)化痰的藥物,因?qū)嶒?yàn)過程中動物處于麻醉或抑制狀態(tài),適合于實(shí)時觀測動物血流變化或是測定腦組織中CGRP、P物質(zhì)以及各類神經(jīng)激肽或受體的含量,從免疫組織化學(xué)技術(shù)或基因水平方面研究偏頭痛的機(jī)理,實(shí)施這兩類實(shí)驗(yàn)?zāi)P鸵邆浯笮蛯?shí)驗(yàn)設(shè)備和熟練的實(shí)驗(yàn)人員,其動物可選用易于操作的大鼠;基因工程模型和原發(fā)性偏頭痛模型偏向于基因和遺傳性,對偏頭痛的發(fā)病機(jī)理還原性高,但對技術(shù)要求高,高端深度研究者可量力選擇。

    3.2 根據(jù)偏頭痛動物模型特點(diǎn)選擇治療藥物

    臨床治療偏頭痛時患者往往希望快速止痛,因此對于治療偏頭痛藥物(主要是西藥)的起效時間要求較高。中醫(yī)藥治療偏頭痛效果的顯現(xiàn)往往需要較長的周期,因此,應(yīng)用偏頭痛模型研究中醫(yī)藥抗偏頭痛的療效時,需要考慮藥物的藥物作用特點(diǎn)和時效性。

    硝酸甘油模型著重于動物在一定的時間段內(nèi)的亢奮性行為變化,要從平抑肝陽、祛風(fēng)止痛類藥物中選用短時效藥物,如川芎之屬,其性辛溫又秉升散之性,善上行頭目而疏風(fēng)止痛;藥理方面研究表明其揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、改善血管功能、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、解熱等作用[15],而且經(jīng)口給藥方式可使川芎揮發(fā)油快速分布于腦部[16],故可快速改善頭部疼痛癥狀,不必長期用藥;利血平化低5-HT模型著重于偏頭痛發(fā)作抑制性行為表現(xiàn),癥狀持續(xù)時間長,選用溫經(jīng)散寒、活血化瘀類藥物,如吳茱萸、延胡索之屬,吳茱萸辛溫入脾經(jīng)而散寒止痛,現(xiàn)代藥理研究表明吳茱萸次堿具有舒張血管、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[17];延胡索辛散,行上下四經(jīng)活血散結(jié)止痛,《本草綱目》言之“能行血中氣滯,氣中血滯,故專治一身上下諸痛”,現(xiàn)代藥理研究認(rèn)為:延胡索生物堿具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、擴(kuò)張冠狀動脈,增加冠脈血流量等藥理作用[18],長期服用這類藥物均可改善腦部血流量,緩解頭痛癥狀;神經(jīng)血管源性模型和CSD模型都屬于直接刺激腦膜神經(jīng)或皮層,血流變化或頭痛癥狀持續(xù)存在,要從逐瘀通絡(luò)、熄風(fēng)化痰類藥物中選用起效時間快、作用時間長的藥物,如鉤藤、天麻之屬,兩者入肝經(jīng),可息風(fēng)止痙緩解急性頭痛,現(xiàn)代藥理研究表明鉤藤能阻斷鈣離子通道,保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞[19],且能降低偏頭痛狀態(tài)下產(chǎn)生的NO、前列腺素E、白細(xì)胞介素1β細(xì)等物質(zhì)[20],天麻素可以改善小腦前下動脈、小腦后下動脈、椎基底動脈、迷路動脈以及內(nèi)耳供血不足,保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞[21],兩類藥物均可改善血管內(nèi)環(huán)境,有效緩解偏頭痛癥狀,又可持續(xù)修復(fù)病灶;基因工程偏頭痛模型和原發(fā)性頭痛模型表現(xiàn)與臨床最接近,不可急于求成,需用補(bǔ)益肝腎、解郁養(yǎng)血安神類藥物,如何首烏、白芍、熟地之屬,這類藥物偏于長期服用以補(bǔ)益肝腎,改善自身頭痛敏感基因,改善體內(nèi)環(huán)境,逐漸恢復(fù)平和體質(zhì),達(dá)到治療效果。

    通過對各類偏頭痛模型應(yīng)用的評價以及對模型和藥物治療的選擇性建議,為本課題藏藥如意珍寶丸的藥效學(xué)研究做好前期工作,恰當(dāng)?shù)倪x擇偏頭痛動物模型進(jìn)一步研究如意珍寶丸對偏頭痛的治療作用。

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