固相萃取—平行濃縮法測(cè)定食品中合成著色劑的研究

李素媛 喻璽 劉恒

摘要 本試驗(yàn)利用PWAX混合型弱陰離子交換柱吸附食品中的合成著色劑，采用氨化甲醇溶液洗脫，結(jié)合平行濃縮儀，測(cè)定食品中的合成著色劑。與《食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB/T 5009.35—2016）相比，該測(cè)定方法濃縮時(shí)間短、回收率高、重復(fù)性好、穩(wěn)定性好，適用于大批量樣品的同時(shí)檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 固相萃??；弱陰離子交換柱；平行濃縮儀；食品；合成色素

中圖分類號(hào) O657.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）03-0252-02

Abstract The cleanert PWAX was used to absorb the synthetic colorants in food in this study.The mixture was eluted with ammonium methanol，and the synthetic colorants in food were determined combined with parallel concentrator.Compared with "Determination of synthetic colorants in foods" （GB/T 5009.35—2016），this determination method was suitable for its short concentration time，high recovery rate，excellent stability and reproducib-ility，for simultaneous testing of large quantiti es of samples.

Key words solid phase extraction；cleanert PWAX；parallel concentrator；food；synthetic colorant

為滿足消費(fèi)者對(duì)食品的感官需求，食品著色劑在食品加工工藝中有著廣泛的應(yīng)用，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)允許添加的合成著色劑種類及限量有明確的規(guī)定。目前，已有多種食品中色素的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，《食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB/T 5009.35—2016）中采用聚酰胺粉吸附食品中的合成著色劑，并用乙醇胺溶液進(jìn)行洗脫。聚酰胺對(duì)合成色素的吸附能力受溫度的影響，試驗(yàn)時(shí)需要對(duì)樣品和淋洗液進(jìn)行加熱處理，而加入聚酰胺粉的樣品抽濾及乙醇胺濃縮所需時(shí)間均較長(zhǎng)，不適合于大批量樣品同時(shí)處理?！妒称分姓T惑紅的測(cè)定》（GB 5009.141—2016）中采用層析紙色譜法檢測(cè)食品中的色素，樣品前處理較復(fù)雜，而且結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性均較差，《食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè)》（SN/T 1743—2006）中也是采用聚酰胺吸附法提取，同樣不適合于大批量樣品的處理。

常見的合成著色劑大多具有苯磺本鈉結(jié)構(gòu)，選用PWAX混合弱陰離子交換柱可以吸附食品中合成著色劑，再利用氨化甲醇溶液洗脫，用平行濃縮儀濃縮，可大大縮短樣品前處理時(shí)間，適用于大批量樣品的同時(shí)檢測(cè)。該方法可以同時(shí)檢測(cè)檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅8種合成色素[1-2]。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試驗(yàn)試劑包括0.02 mol/L乙酸銨溶液（稱取乙酸銨1.54 g，加水至1 000 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾）、甲醇-甲酸溶液（量取甲醇60 mL、甲酸40 mL，混勻）、檸檬酸溶液（稱取檸檬酸20 g，加水至100 mL溶解，混勻）、pH=6.0的水（水加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH值為6.0）、pH=4.0的水（水加檸檬酸溶液，調(diào)節(jié)pH值為4.0）、2%氨化甲醇溶液（量取甲醇980 mL、氨水溶液20 mL，混勻）、92 g/L亞鐵氰化鉀溶液（稱取亞鐵氰化鉀106 g，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL）、183 g/L乙酸鋅溶液（稱取乙酸鋅220 g溶于少量水中，加入冰乙酸30 mL，用水定容至1 000 mL）。所用試劑均為色譜純或優(yōu)級(jí)純。

儀器包括SPE小柱（Cleanert PWAX混合型弱陰離子交換柱，150 mg/6 mL）、正壓固相萃取儀（JPPM-0160-3.0）、自動(dòng)平行濃縮儀（BUCHI multivapor P-12）。

1.2 試樣提取

1.2.1 碳酸飲料、果汁飲料、果汁、果酒、配制酒類。稱取樣品10 g于100 mL燒杯中，加熱去除二氧化碳或乙醇。

1.2.2 肉制品、油脂、巧克力、含油調(diào)味料、油炸食品等高油脂試樣。稱取已均質(zhì)樣品10 g于50 mL離心管中，加入20 mL石油醚，渦旋2 min，離心，棄去石油醚層，殘?jiān)蹈?，加? mL 1%氨水溶液提取，重復(fù)提取至提取液為無(wú)色。合并上清液置于100 ℃水浴中濃縮至2 mL左右，水洗轉(zhuǎn)移至10 mL比色管中，用水定容。若試樣pH值偏高，用檸檬酸水溶液調(diào)節(jié)pH值至6左右[3-4]。

1.3 試液萃取凈化

依次用6 mL甲醇、6 mL水活化SPE小柱。加入試樣溶液10 mL，再依次用6 mL水（pH=4）、用6 mL甲醇-甲酸溶液、6 mL水（pH=6）淋洗。通入氮?dú)獯蹈尚≈? min，6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于平行濃縮儀小管中，濃縮至近干，用1 mL水定容，過(guò)0.45 μm水相過(guò)濾膜，待測(cè)。需注意的是若提取液呈堿性，在過(guò)柱前要將其pH值調(diào)至6左右，保證小柱對(duì)合成色素有更好的吸附；SPE小柱在凈化洗脫過(guò)程中應(yīng)控制流速在1 mL/min左右[5-6]。

1.4 試驗(yàn)條件

利用C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，波長(zhǎng)為254 nm，溫度為35 ℃，采用流動(dòng)相梯度淋洗，具體過(guò)程見表1。

2 結(jié)果與分析

色素標(biāo)準(zhǔn)液濃度與峰面積的關(guān)系如表2所示，檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅、赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)液濃度與峰面積的相關(guān)系數(shù)分別為0.999 7、0.999 4、0.999 5、1.000 0、1.000 0、0.999 9、0.998 9、1.000 0、0.999 9，具有良好的線性關(guān)系。色素標(biāo)準(zhǔn)溶液及果汁樣品色譜圖如圖1～2所示，果汁中色素加標(biāo)回收率為89.5%～98.5%（表3）。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB 5009.35—2016）中赤蘚紅采用的是液-液萃取的方法，而赤蘚紅為苯甲酸鈉結(jié)構(gòu)，在SPE小柱上保留較弱，在淋洗階段將淋洗液改為6 mL水（pH=6）、6 mL甲醇，其他條件不變，采用PWAX混合型弱陰離子交換柱（150 mg/6 mL）可用于赤蘚紅的檢測(cè)。赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液以及火腿腸樣品色譜圖如圖3～4所示，火腿腸加標(biāo)回收率為90.5%～91.3%（表4）。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用PWAX混合型弱陰離子交換柱（150 mg/6 mL）固相萃取，結(jié)合平行濃縮儀，可以同時(shí)、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中8種合成著色劑。在淋洗階段改進(jìn)后，還可以同時(shí)檢測(cè)食品中赤蘚紅的含量，該方法適用于大批量檢測(cè)食品中的合成著色劑。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 劉慧慧，宮向紅，徐英江，等.固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定海米中10種合成色素[J].食品科學(xué)，2014，35（4）：170-173.

[2] 蔣榮華，吳玉杰，溫和心，等.肉制品中6種人工合成色素快速測(cè)定方法[J].食品工業(yè)科技，2017，38（24）：278-281.

[3] 葛宇.食品中人工合成色素使用法規(guī)及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)展[J].質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)化，2011（9）：31-35.

[4] 宋丹萍，張宏，李琪.國(guó)內(nèi)外食用色素標(biāo)準(zhǔn)的比較及檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2014，35（3）：295-300.

[5] 李林，武術(shù)蘭，王震.食品中合成著色劑的測(cè)定方法研究：高效液相色譜法[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（17）：253-254.

[6] 李曉芹，徐振東.固相萃取-高效液相色譜法在食品中合成著色劑檢測(cè)中的應(yīng)用[J].食品工業(yè)，2014（6）：56-58.