貝牡莪消丸對(duì)PTU致甲狀腺腫伴甲減大鼠TSH值及行為學(xué)方面的影響

杜麗坤,楊超

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是一種常見的良性甲狀腺疾病，多是由于甲狀腺良性上皮細(xì)胞增生太過而形成[1]。本病發(fā)病率約為7%以上[2]，其中甲狀腺癌的比例為5%～15%左右，其影響因素多為年齡、自身免疫、放射線接觸史、碘攝入、遺傳及其他[3]。以女性和老年人群發(fā)病率高，多表現(xiàn)為不同程度的甲狀腺腫大,發(fā)病之初多為單個(gè)結(jié)節(jié)，隨著病情進(jìn)展，可觸摸到多個(gè)結(jié)節(jié), 大小不等，形態(tài)各異，患者僅有頸部不適感，甚至無自覺癥狀。中醫(yī)內(nèi)科將甲狀腺結(jié)節(jié)歸為 “癭病”的范圍，“癭”之稱呼源自于戰(zhàn)國(guó)《莊子 德充符》?！锻饪普凇ぐ`瘤論》認(rèn)為：“夫人生癭瘤之癥，非陰陽正氣結(jié)腫，乃五臟濁氣、瘀血、痰滯而成”[4]，認(rèn)為氣滯、血瘀、痰凝壅結(jié)于頸前乃本病的基本發(fā)病機(jī)理[5]。大量醫(yī)學(xué)研究報(bào)告顯示，以辨證論治及整體調(diào)節(jié)為基礎(chǔ)的中醫(yī)藥療法，在治療甲狀腺疾病方面有重要臨床意義，能從根本上改善患者體質(zhì)，藥物敏高度高，療效顯著。本文用PTU造成大鼠甲狀腺腫伴甲減的模型，觀察貝牡莪消丸、優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠TSH的恢復(fù)情況并進(jìn)行療效對(duì)比，評(píng)價(jià)兩種藥物在甲狀腺腫伴甲減大鼠空間認(rèn)知能力、探究行為、視覺記憶等方面的影響。旨在論證貝牡莪消丸治療甲狀腺腫伴甲減的作用機(jī)理，為其更好應(yīng)用于臨床提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

40只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量(123±8.5)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為8籠，每籠5只。

1.2 藥品

貝牡莪消丸(浙貝母30 g、莪術(shù)20 g、牡蠣30 g、玄參20 g、夏枯草20 g)由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室提供，每只大鼠2 ml，每日1次灌胃；PTU(上海朝暉藥業(yè)有限公司，50 mg×100片/瓶，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H31021082)；優(yōu)甲樂(德國(guó)默克公司，50 μg×100片/瓶，批號(hào)H20140052)。

1.3 試劑

TSH放免試劑藥盒購(gòu)于北京北方生物技術(shù)研究所有限公司(貨號(hào)：E-EL-R0976c)。

1.4 儀器

BS223S天平，低溫冰箱，Gc-1500型γ放射免疫計(jì)算器，光鏡，曠場(chǎng)場(chǎng)箱。

1.5 方法

造模：選取40只SD大鼠，喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取10只作為空白組，給予生理鹽水2 ml/d。其余30只予以PTU 0.15 mg/g，每日1次，連續(xù)灌胃40天。40天后利用彩色多普勒判斷，模型均制備成功。造模成功后，將30只大鼠隨機(jī)分為3組，即模型對(duì)照組、貝牡莪消丸組、優(yōu)甲樂組，分別給予生理鹽水(2 ml/d)、貝牡莪消丸(3 ml/d)、優(yōu)甲樂(0.08 μg/g)。給藥30天后，以10天為一個(gè)周期，分別于給藥前、給藥10天后、給藥20天后、給藥30天后，進(jìn)行大鼠行為學(xué)指標(biāo)檢測(cè)(敞箱實(shí)驗(yàn))及新奇事物認(rèn)知試驗(yàn)檢測(cè)，并于給藥30天后處死大鼠，鏡下觀察大鼠甲狀腺細(xì)胞形態(tài)，并取血清測(cè)定TSH。

敞箱實(shí)驗(yàn)：(又稱曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))曠場(chǎng)場(chǎng)箱采用長(zhǎng)100 cm，寬100 cm，高50 cm的木板，箱內(nèi)壁全部涂黑。箱底均分為25個(gè)正方格(長(zhǎng)20 cm，寬20 cm)，沿箱底周圍依次編號(hào)，其中序號(hào)1～16均為外周場(chǎng)區(qū)，序號(hào)17～24均為中央場(chǎng)區(qū)，25為正中央場(chǎng)區(qū)稱為正中格。實(shí)驗(yàn)時(shí)捏住大鼠尾巴根部將其輕放入25號(hào)正中格中，觀察4 min內(nèi)活動(dòng)情況，依次逐個(gè)測(cè)定其余大鼠，并于每次測(cè)定結(jié)束后清除箱內(nèi)動(dòng)物排泄物。統(tǒng)計(jì)各只大鼠正中格停留時(shí)間、穿格總數(shù)、直立次數(shù)。

新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)：在試驗(yàn)前5天，每日在鼠籠中放置2個(gè)物體，允許大鼠探究2 h，每天1次。試驗(yàn)時(shí)，將大鼠單獨(dú)放入一鼠籠中，同樣放置2個(gè)物體，一個(gè)與試驗(yàn)前探索相似，另一個(gè)為新物體，允許探索4 min，依次逐個(gè)測(cè)定其余大鼠。統(tǒng)計(jì)各個(gè)大鼠探索新奇物體的時(shí)間與總時(shí)間，并計(jì)算兩時(shí)間之比。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠TSH值的影響

由表1可見,與空白組相比，模型對(duì)照組的TSH值明顯增高(P<0.05)；而與模型對(duì)照組比較，貝牡莪消丸組的TSH值明顯降低(P<0.05)。

表1 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減 大鼠TSH值的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠行為學(xué)方面的影響

2.2.1 敞箱實(shí)驗(yàn)-正中格停留時(shí)間

如表2所示，給藥20天后貝牡莪消丸組與模型組相比在正中格停留時(shí)間顯著減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，給藥30天后其正中格停留時(shí)間較前幾組有下降趨勢(shì)，說明應(yīng)用貝牡莪消丸治療后，甲減模型大鼠異?？战嫡J(rèn)知能力得以明顯緩解。

表2 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-正中格停留時(shí)間的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2.2 敞箱實(shí)驗(yàn)-直立次數(shù)及穿越格數(shù)

如表3所示，大鼠直立次數(shù)及表4大鼠穿越格數(shù)所示，空白組、模型組、優(yōu)甲樂組、貝牡莪消丸組在各個(gè)給藥周期均無明顯差異，提示空白組、模型組、優(yōu)甲樂組、貝牡莪消丸組大鼠對(duì)陌生環(huán)境探究活動(dòng)未見明顯異常。

表3 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-直立次數(shù)的影響

表4 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-穿越格數(shù)的影響

2.2.3 新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-總時(shí)間及新事物優(yōu)先指數(shù)

如表5所示，優(yōu)甲樂組在給藥10天后及給藥20天后與空白組、模型組相比總時(shí)間顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，給藥30天后與模型組相比總時(shí)間顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表6所示，優(yōu)甲樂組在給藥30天后與模型組相比顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明空白組、模型組、貝牡莪消丸組大鼠在事物認(rèn)知上未見明顯異常。

表5 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-總時(shí)間的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

表6 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-新事物優(yōu)先指數(shù)的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

3 討論

甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺,是人體內(nèi)必不可少的器官[6-7]。甲狀腺疾病是內(nèi)分泌系統(tǒng)中的一種常見疾病，由于生活環(huán)境的變化，近年來甲狀腺疾病的發(fā)病率持續(xù)上升，而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是其中較為常見的疾病[8]?；颊叱３]有自覺癥狀，多是在體檢時(shí)經(jīng)觸診和檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，其中經(jīng)過觸診而發(fā)現(xiàn)的甲狀腺結(jié)節(jié)約占4%，在甲狀腺結(jié)節(jié)的影像學(xué)檢查中超聲占首要地位，其檢出率約為17%～67%[9-11]，本病可由缺碘、輻射、細(xì)胞因子、遺傳因素等引起[12-14]。對(duì)于本病，西醫(yī)預(yù)防應(yīng)做到補(bǔ)充足量碘元素、緩解壓力，舒暢情緒、早戒煙、以及及早進(jìn)行甲狀腺超聲檢查等方面，西醫(yī)治療多采用藥物和手術(shù)治療，其中手術(shù)治療的復(fù)發(fā)幾率高達(dá)18%～30%[15]，而甲狀腺激素是目前治療甲狀腺結(jié)節(jié)最為常用的藥物，并且能改善血液中TSH偏高的狀態(tài)，但一方面長(zhǎng)期服用甲狀腺激素副作用大，可能會(huì)影響甲狀腺正常的生理功能，并誘發(fā)動(dòng)脈纖維化以及骨質(zhì)疏松，另一方面激素替代療法應(yīng)用于臨床時(shí)，會(huì)因患者的個(gè)體差異較大，給藥劑量難以把握，若劑量補(bǔ)充不足，則效果欠佳，若劑量補(bǔ)充過量，則易導(dǎo)致甲亢并且增加心血管風(fēng)險(xiǎn)，尤其是對(duì)于患有心血管疾病的老年患者，一旦出現(xiàn)不良反應(yīng)，須停藥終止治療，可見其臨床應(yīng)用之局限性[16-17]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用PTU作用于大鼠的下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸系統(tǒng)，通過抑制甲狀腺分泌甲狀腺激素使大鼠體內(nèi)產(chǎn)生負(fù)反饋調(diào)節(jié)，促進(jìn)體內(nèi)分泌更多的TSH，TSH升高作用于甲狀腺，使其腫大，而作為體內(nèi)最重要內(nèi)分泌腺體之一的甲狀腺通過代償性增大來分泌更多的甲狀腺激素來補(bǔ)充自身的不足，以上雙重原因以致甲狀腺腫，可見應(yīng)用TSH抑制藥物是治療本病的手段之一，或者說TSH可以作為衡量本病治療進(jìn)展的一項(xiàng)指標(biāo)。單純從TSH抑制角度來說，易氏主張從“腎”論治，選用腎陽虛之主方右歸丸抑制亞臨床甲減患者的TSH，臨床療效顯示甲減患者臨床癥狀改善顯著并且TSH水平明顯下降[18]。潘氏應(yīng)用溫腎方改善亞臨床甲減雌鼠的TSH水平，實(shí)驗(yàn)證明溫腎方能使過高TSH水平抑制，使之明顯下降，臨床療效顯著[19]。劉氏自擬方劑益元癭消湯作用于甲減大鼠，經(jīng)過試驗(yàn)證明其有類甲狀腺激素作用，可使TSH明顯下降，能夠有效調(diào)整下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸系統(tǒng)，預(yù)后良好[20]。

敞箱實(shí)驗(yàn)又稱曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，以通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中某行為發(fā)生頻率與持續(xù)時(shí)間來評(píng)價(jià)其自主行為，探究行為及緊張度的一種方法。甲狀腺激素的合成過程需甲狀腺內(nèi)氧化物酶的參與，而PTU正是有抑制次酶的作用，從而阻止甲狀腺內(nèi)酪氨酸碘化及碘化酪氨酸縮合，致甲減的發(fā)生。甲減時(shí)，體內(nèi)甲狀腺激素水平下降，可出現(xiàn)中樞神經(jīng)功能異常，如空間認(rèn)知能力下降，探究性為異常，視覺記憶減退等。因此探究甲減大鼠的認(rèn)知行為，評(píng)價(jià)甲狀腺激素與大鼠認(rèn)知行為的關(guān)系，有助于闡明認(rèn)知功能障礙的機(jī)制，為治療認(rèn)知功能障礙提供新線索。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)貝牡莪消丸與優(yōu)甲樂在甲狀腺腫伴甲減大鼠行為學(xué)方面的影響，得出應(yīng)用貝牡莪消丸治療后大鼠異?？臻g認(rèn)知能力得以緩解，有一定臨床意義。

中醫(yī)藥治療結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴甲減歷史悠久，累積了豐富的經(jīng)驗(yàn)，大多數(shù)醫(yī)家應(yīng)用含碘量豐富的藥物，如海藻、昆布、貝母、牡蠣等治療本病[21]。杜麗坤教授在總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上提出以“活血行氣、消癭散結(jié)”為治療方法，針對(duì)其氣滯、痰凝、血瘀的主要病機(jī)，擬方貝牡莪消丸，標(biāo)本同治，其中貝母、莪術(shù)清熱化痰，消腫止痛，破血行氣；牡蠣、夏枯草軟堅(jiān)化痰，清肝瀉火，散結(jié)消腫，收斂固澀；玄參清熱涼血，滋陰解毒。本方寒溫并調(diào)，氣血并調(diào)，咸味藥和辛味藥聯(lián)合應(yīng)用，共奏活血行氣、消癭散結(jié)之功效。中藥能夠作用于多系統(tǒng)，多器官，具有副作用小，多靶點(diǎn)，療效持久等優(yōu)勢(shì)，因此應(yīng)用貝牡莪消丸治療甲狀腺腫伴甲減患者臨床療效更為明顯。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PTU能夠?qū)е麓笫蟮募谞钕倌[大伴甲減，貝牡莪消丸可以促使甲狀腺腫伴甲減大鼠的TSH值明顯降低，顯著改善甲減大鼠異?？臻g認(rèn)知能力。綜上所述，貝牡莪消丸在縮小甲狀腺結(jié)節(jié)、改善甲減癥狀等方面可取得較滿意的效果，有較好的發(fā)展前景。

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