桔梗多酚的提取及抗氧化研究

劉華麗，張 斌，劉思瑤，劉翔元，方爽爽，董樹國

(吉林醫(yī)藥學(xué)院:1.2015級(jí)藥物制劑本科班，2.2013級(jí)藥物制劑本科班，3.2016級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科班，4.分析化學(xué)教研室,吉林 吉林 132013)

桔梗別名土人參、鈴鐺花，為桔?？?、桔梗屬多年生草本植物，是一種兼有食用、藥用、觀賞價(jià)值的植物，其藥用部位為根。它易生長于氣溫較低的地區(qū)。我國大部分地區(qū)均產(chǎn)，主要產(chǎn)于安徽、河南、湖北、遼寧、吉林等地，以東北、華北產(chǎn)量最大。桔梗中含有皂苷、黃酮類化合物、酚類化合物、脂肪酸類、揮發(fā)油、多糖等活性成分，具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎、祛痰、降血脂、抗氧化等作用，可用于治療外感咳嗽、咽喉腫痛、肺痛吐痰等癥狀[1-2]。

多酚是植物中的一類重要活性成分，具有抗炎、抗腫瘤、防治糖尿病等生物活性作用，在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用[3-4]。本實(shí)驗(yàn)在前期工作的基礎(chǔ)上利用正交試驗(yàn)對(duì)桔梗多酚的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，并利用鄰苯三酚自氧化法和Fenton法對(duì)提取的桔梗多酚抗氧化性進(jìn)行研究，為桔梗中生物活性成分的深入研究提供基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

ESJ200-4B電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)；T6新世紀(jì)可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-D循環(huán)水式多用真空泵(鞏義英峪子華儀器廠)；KQ-250DE超聲波清洗儀(昆明超聲有限公司)。

桔梗；福林酚試劑(按照參考文獻(xiàn)[5]配制)；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 桔梗多酚的提取

桔梗多酚的提取工藝流程:干燥桔梗→粉碎→超聲波輔助提取→抽濾→濃縮→稀釋定容→桔梗粗多酚溶液→多酚含量測定。

根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取提取時(shí)間、提取溫度、料液比和乙醇濃度四個(gè)因素作為考察因素，以桔梗多酚的提取率為考察指標(biāo)，利用L9(34)正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，正交試驗(yàn)的因素水平設(shè)定見表1。

表 1 因素與水平表

1.3 桔梗多酚的含量測定

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精確稱量0.100 g沒食子酸對(duì)照品，置于50 mL燒杯中，以蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)移入100 mL容量瓶中，以蒸餾水定容，得濃度為1.00 g/L的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液置于25 mL容量瓶中，蒸餾水定容，得到濃度分別為40、60、80、100、120 mg/L的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別移取不同溶液的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5 mL置于10 mL容量瓶，依次加入1.0 mL福林酚試劑，靜置3 min之后，再加入4.0 mL的7.5% Na2CO3溶液，蒸餾水定容。

用蒸餾水作為空白對(duì)照，在766 nm波長處溶液的吸光度，以沒食子酸對(duì)照品溶液的濃度作為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明沒食子酸濃度在40～120 mg/L的范圍內(nèi)，溶液的吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系，擬合出回歸方程為:

y=0.005 1x+0.061 4，R2=0.999 2

1.3.2樣品多酚含量測定

測定樣品中多酚含量時(shí)，取0.5 mL桔梗多酚提取液，其余步驟按1.3.1的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行顯色，于766 nm處測定溶液的吸光度，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中多酚濃度，計(jì)算多酚的提取率。

1.4 桔梗多酚的抗氧化性研究

1.4.1清除超氧陰離子的能力

1.4.2清除羥基自由基能力

取10 mL容量瓶7個(gè)，在1號(hào)瓶中加入1.0 mL 7.5 mmol/L鄰二氮菲溶液，再一次加入1.0 mL pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液,1.0 mL 7.5 mmol/L硫酸亞鐵溶液，1.0 mL 0.1%的H2O2，以去離子水定容，在37 ℃下水浴1.0 h，在波長為536 nm處測吸光度值。在2、3、4、5、6號(hào)容量瓶中分別桔梗多酚提取物，使其濃度分別為50、100、150、200、250 mg/L，再按照1號(hào)容量瓶的操作過程操作，測得吸光度值。7號(hào)容量瓶中不加桔梗多酚提取物及H2O2，測得吸光度，計(jì)算羥基自由基(·OH)清除率為縱坐標(biāo)[7]。

2 結(jié) 果

2.1 桔梗多酚的提取工藝優(yōu)化

桔梗多酚的提取工藝優(yōu)化正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排與結(jié)果見表2。由表2可知提取溫度對(duì)提取率的影響最大，依次是乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、超聲時(shí)間,最佳提取溫度為70 ℃,提取時(shí)間為20 min,料液比為1∶25(g/mL),乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70%。

表 2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排與結(jié)果

2.2 清除能力

2.3 清除·OH的能力

桔梗多酚清除·OH的能力結(jié)果見圖2。由圖2可知,當(dāng)桔梗多酚濃度為50 mg/L，對(duì)·OH的清除率為26%，濃度升到250 mg/L時(shí)，清除率為76%?！H的清除率隨桔梗多酚濃度的升高而升高。

3 結(jié) 論

[1] 宋楊,齊云.桔梗的藥理研究進(jìn)展[J].中國藥房，2006，17(2):140-141.

[2] 金在久.桔梗的化學(xué)成分及藥理作用和臨床研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(2)：506-508.

[3] 馬力,陳永忠.植物多酚的生物活性研究進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械,2012(21):119-122.

[4] 龐道睿,劉凡,廖森泰,等.植物源多酚類化合物活性研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2013(4):91-94.

[5] 王曉利.生物化學(xué)技術(shù)[M].2版.北京:中國輕工業(yè)出版社,2014:172-173.

[6] 崔潔,潘倩,張喬會(huì),等.山杏仁種皮多酚的閃式提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化性研究[J].食品工業(yè)科技,2015，36(10)：273-277

[7] 李彩霞,焦揚(yáng),梁倩倩,等.黑果枸杞提取物抗氧化性研究[J].食品工業(yè)科技,2006,27(10):55-57.