在線凈化液相色譜-高分辨質(zhì)譜法快速篩查果蔬中212種農(nóng)藥殘留

張海超，艾連峰，馬育松，王 敬，李曉菲，徐牛生

(1.河北出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北 石家莊 050051；2.賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海 201206)

近年來，果蔬在生產(chǎn)、加工和儲(chǔ)運(yùn)過程中對農(nóng)藥的依賴性越來越強(qiáng)，農(nóng)藥殘留問題也日益增多[1]，導(dǎo)致居民急性中毒或慢性中毒事件時(shí)有發(fā)生，農(nóng)藥殘留對人類健康產(chǎn)生的威脅逐漸凸顯。為此，許多國家和地區(qū)都制定了更多數(shù)量、更為嚴(yán)格的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，2017年6月我國新實(shí)施的GB 2763-2016涵蓋的4140項(xiàng)限量標(biāo)準(zhǔn)中，果蔬類的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)占總數(shù)的65.1%，充分體現(xiàn)了我國對果蔬中農(nóng)藥殘留的重視。然而，隨著科技的發(fā)展，農(nóng)藥新品種越來越多，若采用單一或幾個(gè)不同農(nóng)藥殘留的檢測方法很容易漏檢。檢測指標(biāo)的不斷增多，限量標(biāo)準(zhǔn)值的逐漸降低，對果蔬中多種農(nóng)藥殘留的檢測能力提出了更大挑戰(zhàn)[2-4]。因此，研究更準(zhǔn)確、快速的農(nóng)藥多殘留檢測技術(shù)，是應(yīng)對當(dāng)今農(nóng)藥殘留分析形勢的關(guān)鍵。

對于多殘留分析，檢測技術(shù)是影響其發(fā)展的主要制約因素。目前針對多種農(nóng)藥殘留的同時(shí)分析主要以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5-8]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9-13]為主。但受儀器掃描速度及分辨率的限制，高通量的檢測仍具有一定的局限性。而靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)(Q-Obitrap)可采集更為全面的化合物信息，在定性方面優(yōu)勢突出，可測定的化合物不受數(shù)量限制，成為痕量化合物定性分析和篩查確證的有效手段[14-16]。本研究采用的TurboFlow在線凈化技術(shù)主要通過擴(kuò)散溶解、體積排阻等手段達(dá)到凈化目的，比傳統(tǒng)的固相萃取和基質(zhì)分散萃取更具優(yōu)越性，已在食品、生物領(lǐng)域得到了較好的應(yīng)用[17-20]。本文將Q-Obitrap的高分離定性能力和TurboFlow在線凈化技術(shù)快速、高效的特點(diǎn)充分結(jié)合，建立了果蔬中212種農(nóng)藥的快速篩查與確定方法，該方法操作簡單、檢測周期短、篩查通量高。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

TurboFlow在線凈化液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀Q-Orbitrap(美國 ThermoFisher 公司)，由CTC多功能自動(dòng)進(jìn)樣器(配有300 μL定量環(huán))、兩個(gè)耐壓1250 bar的四元梯度液相泵、六通閥切換裝置、多元柱切換裝置和Q-Orbitrap四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀組成。Sigma 3K-15型離心機(jī)(美國Sigma公司)，PT2100型均質(zhì)器(瑞士Kinematica公司)，渦旋混合器(美國Scientific Industries)，Milli-Q純化系統(tǒng)(美國Millipore公司)。

乙腈、甲醇、丙酮、異丙醇、甲酸、乙酸、乙酸銨和氨水為色譜純，無水MgSO4和NaCl為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q高純水。

212 種農(nóng)藥均購自Sigma和Dr.Ehrenstorfer公司，純度≥95%。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇配制，系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用0.1%乙酸水溶液-乙腈(體積比7∶3)配制。

梨、蘋果、黃瓜、白菜樣品均購自當(dāng)?shù)厥袌觥?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)部分

1.2.1樣品制備準(zhǔn)確稱取制備好的樣品約10.0 g(精確至0.01g)于50 mL塑料離心管中，加入20 mL 0.1%乙酸乙腈溶液，渦旋混勻2 min。加入4 g無水硫酸鎂和3 g氯化鈉，加蓋迅速搖勻，均質(zhì)提取1 min，以5 000 r/min離心5 min。分取2 mL上清液于40 ℃下氮吹至干，用300 μL乙腈充分溶解殘?jiān)偌尤?00 μL 0.1%乙酸水溶液混勻定容，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣測定。

1.2.2在線凈化色譜條件在線凈化程序分為凈化(TFC)和分離(HPLC)過程，凈化柱為Cyclone-P聚合物柱(0.5 mm×50 mm，60 μm粒徑,60 ?孔徑)，上樣泵的流動(dòng)相:A為10 mmol/L乙酸銨-0.02%乙酸水溶液、B為乙腈、C為丙酮-乙腈-異丙醇(1∶1∶1)，進(jìn)樣量為50 μL；HPLC的分析柱為Accucore aQ(150 mm×2.1 mm，2.6 μm)(Thermo Fisher公司，美國)；流動(dòng)相：A為0.5 mmol/L乙酸銨-0.1%乙酸水溶液，B為乙腈。梯度洗脫程序見表1，程序中各步所用流路模式見圖1。

表1 在線凈化梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure of Turboflow on-line cleanup

*no flow

圖1 在線凈化流路切換模式示意圖Fig.1 Schematic diagram of on-line cleanup flow channel switchingA：the mode of loading(step 1,3,4,5,6 and 7 );B：the mode of eluting(step 2)

1.2.3質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)溫度：320 ℃；毛細(xì)管電壓：3 200 V；加熱器溫度：300 ℃；鞘氣：30 arb；輔助氣：20 arb；掃描范圍：m/z100～700(正、負(fù)離子切換模式)；一級質(zhì)譜全掃描分辨率(R)：70 000；C-trap最大容量(AGC target)：5×105；C-trap最大注入時(shí)間：100 ms；數(shù)據(jù)依賴二級子離子全掃描(ddMS2)分辨率：R=17 500；歸一化碰撞能量：40 eV±50%；C-trap最大容量(AGC target)：5×104；C-trap最大注入時(shí)間：50 ms；動(dòng)態(tài)排除：5 s。正、負(fù)離子掃描切換時(shí)間：250 ms。其他信息見表2。

表2 212種農(nóng)藥的名稱、分子式、部分質(zhì)譜參數(shù)、定量下限和梨中的平均回收率、精密度(n=6)Table 2 Names,formula,some MS parameters,LOQ,average recoveries and RSDs(n=6) in pear of the 212 pesticides

(續(xù)表2)

No CompoundFormulatR/minm/zIonicmodeFragmention(m/z)12LOQ(μg/kg)Added10μg/kgRecovery/%RSD/%33Tebuconazole(戊唑醇)C16H22ClN3O8 5308 1524[M+H]+70 0408125 01554108 411 234Azoxystrobin(嘧菌酯)C22H17N3O58 2404 1241[M+H]+186 0528206 0816286 75 935Buprofezin(噻嗪酮)C16H23N3OS9 9306 1635[M+H]+372 0982344 10350 598 56 636Hexythiazox(噻螨酮)C17H21ClN2O2S9 6353 1085[M+H]+277 1729160 57071102 44 037Triadimefon(三唑酮)C14H16ClN3O28 3294 1004[M+H]+201 1058106 0652187 48 538Atrazine(阿特拉津)C8H14ClN57 1216 1010[M+H]+168 0577228 02440 584 66 939Propazine(撲滅津)C9H16ClN57 9230 1167[M+H]+69 0707197 0746494 68 740Prometryne(撲草凈)C10H19N5S8 4242 1434[M+H]+174 054396 0556497 86 041Propanil(敵稗)C9H9Cl2NO7 8218 0134[M+H]+146 0230188 0699595 87 442Thiamethoxam(噻蟲嗪)C8H10ClN5O3S3 0292 0266[M+H]+158 0497200 09670 599 73 743Dimethomorph(烯酰嗎啉)C21H22ClNO47 8388 1310[M+H]+211 0649181 05430 5103 04 244Molinate(禾草敵)C9H17NOS8 4188 1104[M+H]+165 0550301 0629196 15 645Phenthoate(稻豐散)C12H17O4PS27 9321 0379[M+H]+126 091883 0864285 97 346Piperonylbutoxide(增效醚)C19H30O59 6356 2431[M+H]+131 9671169 0547580 58 947Clothianidin(噻蟲胺)C6H8ClN5O2S3 6250 0160[M+H]+145 0650205 0864194 210 548Picoxystrobin(啶氧菌酯)C18H16F3NO49 0368 1104[M+H]+86 0609108 9610578 64 949Di?allate(燕麥敵)C10H17Cl2NOS9 6270 0481[M+H]+162 791591 0551198 76 850Benzyladenine(6?芐基腺嘌呤)C12H11N55 6226 1087[M+H]+216 1022302 17530 589 78 951Spirotetramat(螺蟲乙酯)C21H27NO58 0374 1962[M+H]+163 0629194 08140 598 67 552Pyraclostrobin(吡唑醚菌酯)C19H18ClN3O49 1388 1059[M+H]+212 0667194 0562585 46 453Pendimethalin(二甲戊靈)C13H19N3O49 8282 1448[M+H]+283 9225450 9364185 75 954Clethodim(烯草酮)C17H26ClNO3S9 4360 1395[M+H]+164 0704268 1361188 28 555Tolfenpyrad(唑蟲酰胺)C21H22ClN3O29 5384 1473[M+H]+197 0963145 05290 5104 89 656Rotenone(魚藤酮)C23H22O68 6395 1489[M+H]+213 0906192 0779187 96 257Sethoxydim(稀禾定)C17H29NO3S9 6328 1941[M+H]+135 0806123 11700 595 74 858Carboxin(萎銹靈)C12H13NO2S7 2236 0740[M+H]+178 0865282 15250 594 86 559Pyridaben(噠螨靈)C19H25ClN2OS10 1365 1449[M+H]+124 0215132 04431105 911 060Dimethenamid(二甲吩草胺)C12H18ClNO2S8 1276 0820[M+H]+147 1170309 08240 589 75 461Pretilachlor(丙草胺)C17H26ClNO29 4312 1725[M+H]+244 0558195 37490 598 46 662Flumetsulam(氟唑嘧磺草胺)C12H9F2N5O2S5 5326 0518[M+H]+252 1151176 14360 587 26 863Flutriafol(粉唑醇)C16H13F2N3O7 1302 1099[M+H]+129 0386262 09030 594 65 664Napropamide(敵草胺)C17H21NO28 5272 1645[M+H]+129 1146171 08020 598 54 765Iprobenfos(異稻瘟凈)C13H21O3PS8 5289 1022[M+H]+91 0543205 0085184 96 466Pyriproxyfen(蚊蠅醚)C20H19NO39 7322 1438[M+H]+96 0444185 06000 598 95 767Bupirimate(乙嘧酚磺酸酯)C13H24N4O3S8 9317 1642[M+H]+166 0973108 01120 594 88 968Fluoxastrobin(氟嘧菌酯)C21H16ClFN4O58 6459 0866[M+H]+427 0609188 0383484 79 069Ametryn(莠滅凈)C9H17N5S7 8228 1277[M+H]+186 081196 0557180 97 070Simazine(西瑪津)C7H12ClN56 3202 0854[M+H]+132 0325124 0870175 68 171Oxadixyl(霜靈)C14H18N2O46 3279 1339[M+H]+149 0231219 1124189 46 572Fenpyroximate(唑螨酯)C24H27N3O49 0422 2074[M+H]+366 1450138 06644106 89 573Pyrazosulfuron(百速隆)C14H18N6O7S8 0415 1030[M+H]+182 0566183 0593286 68 774Thiobencarb(禾草丹)C12H16ClNOS9 2258 0714[M+H]+125 0155100 0758197 17 075Warfarin(殺鼠靈)C19H16O47 9309 1121[M+H]+163 0392251 0705189 74 576Cloransulammethyl(氯酯磺草胺)C15H13ClFN5O5S7 6430 0383[M+H]+171 0083398 0123185 65 277Chloridazon(氯草敏)C10H8ClN3O4 6222 0429[M+H]+104 049592 04950 598 76 278Cyazofamid(氰霜唑)C13H13ClN4O2S8 8325 0521[M+H]+108 0112217 03990 587 48 879Ethirimol(乙嘧酚)C11H19N3O6 1210 1601[M+H]+140 106898 0599185 76 280Fenpropimorph(丁苯嗎啉)C20H33NO12 4304 2635[M+H]+147 1170130 12290 597 73 881Fenbuconazole(腈苯唑)C19H17ClN48 5337 1215[M+H]+125 015470 0400196 45 082Fenhexamid(環(huán)酰菌胺)C14H17Cl2NO28 2302 0709[M+H]+152 0505194 09740 5105 76 983Flufenacet(氟噻草胺)C14H13F4N3O2S8 6364 0737[M+H]+125 0151328 10920 5110 410 7

(續(xù)表2)

No CompoundFormulatR/minm/zIonicmodeFragmention(m/z)12LOQ(μg/kg)Added10μg/kgRecovery/%RSD/%84Mandipropamid(雙炔酰菌胺)C23H22ClNO48 3412 1310[M+H]+128 107186 06010 597 68 485EPTC(丙草丹)C9H19NOS8 9190 1260[M+H]+70 0401125 0155189 78 286Cyproconazole(環(huán)丙唑醇)C15H18ClN3O8 0292 1211[M+H]+128 045669 0700198 44 787Cymoxanil(霜脲氰)C7H10N4O34 8199 0826[M+H]+214 0856104 0011192 07 788Cyanazine(草凈津)C9H13ClN66 4241 0963[M+H]+295 0866241 03970 5104 38 589Cyflufenamid(環(huán)氟菌胺)C20H17F5N2O29 3413 1283[M+H]+171 0083398 01230 5110 27 990Fluopicolide(氟吡菌胺)C14H8Cl3F3N2O8 4382 9727[M+H]+172 9557364 96230 587 410 391Isoproturon(異丙隆)C12H18N2O7 3207 1492[M+H]+72 0445165 1026175 44 192Norflurazon(噠草伏)C12H9ClF3N3O7 4304 0459[M+H]+284 0400160 0373187 65 093Metamitron(苯嗪草酮)C10H10N4O3 9203 0927[M+H]+175 0981104 0495189 36 594Metribuzin(嗪草酮)C8H14N4OS6 4215 0961[M+H]+187 1009131 03840 598 23 095Spiroxamine(螺環(huán)菌胺)C18H35NO29 2298 2741[M+H]+144 1381100 11190 596 38 196Triflumizole(氟菌唑)C15H15ClF3N3O9 3346 0929[M+H]+278 055855 0545194 48 097Zoxamide(苯酰菌胺)C14H16Cl3NO29 0336 0319[M+H]+186 9710139 0308190 59 498Thidiazuron(噻苯隆)C9H8N4OS6 3221 0492[M+H]+102 0121127 9914284 95 399Tetraconazole(四氟醚唑)C13H11Cl2F4N3O8 3372 0288[M+H]+158 976570 04004123 86 7100Thiacloprid(噻蟲啉)C10H9ClN4S6 0253 0309[M+H]+126 0103186 01360 597 46 1101Methiocarb(甲硫威)C11H15NO2S7 2226 0896[M+H]+121 0647169 068287 58 3102Pirimicarb(抗蚜威)C11H18N4O27 2239 1503[M+H]+182 128472 04500 596 97 8103Carbofuran(克百威)C12H15NO36 7222 1125[M+H]+123 0443165 09100 5105 15 0104Carbaryl(甲萘威)C12H11NO26 3202 0863[M+H]+145 0649155 0605289 66 8105Isoprocarb(異丙威)C11H15NO27 4194 1176[M+H]+95 0495135 0439280 78 4106Propoxur(殘殺威)C11H15NO36 6210 1125[M+H]+111 0445168 0657489 57 7107Bendiocarb(惡蟲威)C11H13NO46 8224 0917[M+H]+149 0234150 0267295 06 3108Fenobucarb(仲丁威)C12H17NO28 9208 1332[M+H]+95 0497121 0166290 66 8109Indoxacarb(茚蟲威)C22H17ClF3N3O79 3528 0780[M+H]+203 0185249 0419287 95 8110Metolcarb(速滅威)C9H11NO26 3166 0863[M+H]+109 065094 0418189 06 5111Diethofencarb(乙霉威)C14H21NO48 0268 1543[M+H]+124 0396152 0707191 66 4112Chlorimuron?ethyl(氯嘧磺隆)C15H15ClN4O6S8 1415 0474[M+H]+186 0067184 99042104 76 9113Bensulfuron?methyl(芐嘧磺隆)C16H18N4O7S7 6411 0969[M+H]+149 0596182 0558285 65 0114Propaquizafop(草酸)C22H22ClN3O59 4444 1321[M+H]+299 0579371 0789480 56 8115Imazaquin(滅草喹)C17H17N3O35 9312 1343[M+H]+199 0502267 1119288 98 3116Cinosulfuron(醚磺隆)C15H19N5O7S6 7414 1078[M+H]+183 0512237 0278487 29 1117Triasulfuron(醚苯磺隆)C14H16ClN5O5S6 9402 0633[M+H]+167 0563141 0770484 911 5118Rimusulfuron(玉嘧磺隆)C14H17N5O7S26 9432 0642[M+H]+182 0559325 09612118 46 8119Flumetsulam(氟唑嘧磺草胺)C12H9F2N5O2S5 5326 0518[M+H]+129 0386130 04211100 86 3120Naptalam(抑草生)C18H13NO36 5292 0968[M+H]+144 0807149 0232485 28 3121Thifensulfuron?methy(甲基噻吩磺隆)C12H13N5O6S26 4388 0380[M+H]+167 0562204 9624195 75 8122Ethoxysulfron(乙氧嘧磺隆)C15H18N4O7S5 4399 0969[M+H]+236 0334279 0392288 96 7123Pyrazosulfuron?ethyl(吡嘧磺隆)C14H18N6O7S8 0415 1030[M+H]+182 0559183 0595294 45 0124Cyclsulfamuron(環(huán)丙醚磺隆)C17H19N5O6S8 4422 1129[M+H]+236 0333261 02852112 76 2125Flazasulfuron(啶嘧磺隆)C13H12F3N5O5S7 6408 0584[M+H]+182 0558157 0606295 36 9126Ethametsulfuron?methyl(胺苯磺隆)C15H18N6O6S6 7414 1081[M+H]+168 0515196 0828488 78 0127Pyroxsulam(甲氧磺草胺)C14H13F3N6O5S7 2418 0132[M+H]+174 9948140 02600 594 69 1128Azimsulfuron(四唑嘧磺隆)C13H16N10O5S7 1425 1099[M+H]+182 0559183 05962110 89 9129Sulfentrazone(甲磺草胺)C11H10Cl2F2N4O3S7 0386 9891[M+H]+273 0354306 9962192 310 8130Propoxycarbazone?sodium(丙苯磺隆)C15H17N4NaO7S5 4399 0969[M+H]+116 0457199 0058486 37 9

(續(xù)表2)

No CompoundFormulatR/minm/zIonicmodeFragmention(m/z)12LOQ(μg/kg)Added10μg/kgRecovery/%RSD/%131Trifloxysulfuron(三氟啶磺隆)C14H14F3N5O6S7 2438 0690[M+H]+182 0559257 0198287 97 4132Imazosulfuron(咪唑磺隆)C14H13ClN6O5S7 6413 0429[M+H]+156 0766257 9729292 111 8133Foramsulfuron(甲酰胺磺隆)C17H20N6O7S6 3453 1187[M+H]+182 0560183 0598297 69 5134Iamazapic(甲基咪草煙)C14H17N3O35 1276 1343[M+H]+231 1126216 0766275 38 1135Imazamethabenz?methyl(咪草酸)C16H20N2O36 2289 1547[M+H]+161 0708229 1335580 29 7136Nicosulfuron(煙嘧磺隆)C15H18N6O6S7 1411 1081[M+H]+182 0560213 0327279 69 4137Sulfosulfuron(磺酰磺隆)C16H18N6O7S27 3471 0751[M+H]+211 0535236 0333485 78 0138Imazethapyr(咪草煙)C15H19N3O35 9290 1499[M+H]+177 0659230 0920474 26 5139Mevinphos(速滅磷)C7H13O6P5 4225 0523[M+H]+127 0156193 0260284 07 3140Diazinon(二嗪磷)C12H21N2O3PS9 1305 1083[M+H]+169 0796153 1025186 59 4141Phosphamidon(磷胺)C10H19ClNO5P6 0300 0762[M+H]+127 0159174 0682287 27 0142Fonofos(地蟲硫磷)C10H15OPS29 2247 0375[M+H]+108 9877137 0188280 88 6143Isofenpho(異柳磷)C15H24NO4PS9 3346 1236[M+H]+216 9722245 0034274 36 5144Sulfotep(治螟磷)C8H20O5P2S29 2323 0300[M+H]+114 9614142 9924270 99 8145Malathion(馬拉硫磷)C10H19O6PS28 1331 0433[M+H]+138 9953176 1840485 614 2146Phoxim(辛硫磷)C12H15N2O3PS8 9299 0614[M+H]+129 0446147 0555592 37 4147Profenofos(丙溴磷)C11H15BrClO3PS9 4372 9424[M+H]+302 8646344 9134287 49 5148Edifenphos(敵瘟磷)C14H15O2PS27 5311 0324[M+H]+283 0022109 0112276 95 7149Fenthion(倍硫磷)C10H15O3PS27 9279 0273[M+H]+149 0236216 0006280 96 3150Pirimiphos?methy(甲基嘧啶磷)C11H20N3O3PS9 3306 1036[M+H]+108 0562164 11821101 54 6151Ethoprophos(滅線磷)C8H19O2PS28 4243 0637[M+H]+172 9856215 0326289 76 2152Dimethoate(樂果)C5H12NO3PS25 0230 0069[M+H]+170 9698198 9649292 35 4153Clorpyrifos(毒死蜱)C9H11Cl3NO3PS7 3349 9336[M+H]+197 9280114 9618196 83 5154Triazophos(三唑磷)C12H16N3O3PS8 6314 0723[M+H]+124 9824182 98781106 56 6155Quinalphos(喹硫磷)C12H15N2O3PS8 9299 0614[M+H]+162 0664178 0441292 32 8156Pyraclofos(吡唑硫磷)C14H18ClN2O3PS9 0361 0537[M+H]+147 0555163 03262105 75 9157Pyridaphenthion(噠嗪硫磷)C14H17N2O4PS8 3341 0719[M+H]+274 9981256 9891192 07 6158Bensulide(地散磷)C14H24NO4PS39 0398 0678[M+H]+189 0659205 0432287 49 2159Malaoxon(馬拉氧磷)C10H19O7PS6 6315 0662[M+H]+313 9740158 0272468 98 7160Dichlofenthion(除線磷)C10H13Cl2O3PS9 0314 9773[M+H]+141 0001158 0266564 88 7161Fosthiazate(噻唑磷)C9H18NO3PS27 02284 0538[M+H]+104 0170227 99154120 44 1162Fensulfothion(豐索磷)C11H17O4PS27 5309 0379[M+H]+157 0320173 0092582 63 0163Dimethylvinphos(甲基毒蟲畏)C10H10Cl3O4P8 2330 9455[M+H]+127 0159151 2292476 46 8164Chlorfenvinphos(毒蟲畏)C12H14Cl3O4P8 8358 9768[M+H]+98 9850127 0162487 59 2165Fenamiphos(苯線磷)C13H22NO3PS8 2304 1131[M+H]+217 0085201 9850486 27 9166Butamifos(抑草磷)C13H21N2O4PS9 3333 1032[M+H]+95 9674203 05522114 810 5167Paraoxon(對氧磷)C10H14NO6P7 4276 0631[M+H]+200 6163177 8128475 44 7168Etaconazole(乙環(huán)唑磷)C14H15Cl2N3O28 3328 0614[M+H]+158 9762257 4075483 66 7169Isofenphos?methy(甲基異柳磷)C14H22NO4PS9 1332 1080[M+H]+277 1729160 5707295 26 8170Etrimfos(乙嘧硫磷)C10H17N2O4PS8 5293 0719[M+H]+142 9928265 0408290 79 5171Azinphos?methyl(谷硫磷)C10H12N3O3PS28 1318 0130[M+H]+160 0396133 0286192 510 7172Clofentezine(四螨嗪)C14H8Cl2N49 1303 0199[M+H]+138 0108169 6580284 98 3173Ethion(乙硫磷)C9H22O4P2S48 5384 9949[M+H]+199 0020170 9700188 97 4174Diflubenzuron(除蟲脲)C14H9ClF2N2O28 5309 0248[M-H]-289 0171151 0048197 58 8175Chlorbenzuron(滅幼脲)C14H10Cl2N2O28 4307 0047[M-H]-154 0043156 3419194 17 6176Teflubenzuron(氟苯脲)C14H6Cl2F4N2O29 2378 9670[M-H]-195 9518338 9526186 014 2177Chlorfluazuron(氟啶脲)C20H9Cl3F5N3O39 7537 9557[M-H]-174 9575354 9404291 712 0178Diafenthiuron(丁醚脲)C23H32N2OS9 9383 2163[M-H]-323 1953304 1820487 37 5179Triflumuron(殺鈴脲)C15H10ClF3N2O38 8357 0259[M-H]-182 7572216 4744280 69 0180Hexaflumuron(氟鈴脲)C16H8Cl2F6N2O39 1458 9743[M-H]-174 9575275 9594184 312 6181Penfluron(氟幼脲)C15H9F5N2O28 7343 0511[M-H]-160 0357323 0431299 28 4

(續(xù)表2)

No CompoundFormulatR/minm/zIonicmodeFragmention(m/z)12LOQ(μg/kg)Added10μg/kgRecovery/%RSD/%182Novaluron(雙苯氟脲)C17H9ClF8N2O49 3491 0050[M-H]-305 0117470 9961288 58 9183Lufenuron(氟丙氧脲)C17H8Cl2F8N2O39 5508 9711[M-H]-174 9575325 9561296 04 8184Fluazuron(啶蜱脲)C20H10Cl2F5N3O39 5503 9943[M-H]-305 0117195 9761191 77 2185Flufenoxuron(氟蟲脲)C21H11ClF6N2O39 6487 0290[M-H]-304 0139329 0093188 04 6186Chlorsulfuron(氯磺隆)C12H12ClN5O4S6 6356 0226[M-H]-139 0612140 0656585 37 1187Dinoseb(達(dá)諾殺)C10H12N2O58 7239 0673[M-H]-194 0450193 0246476 28 9188Diclosulam(雙氯磺草胺)C13H10Cl2FN5O3S7 7403 9793[M-H]-153 0205181 0521192 78 2189Triflusulfuron?methyl(氟胺磺隆)C17H19F3N6O6S8 3491 0966[M-H]-236 0760196 06322109 29 4190Fomesafen(氟磺胺草醚)C15H10ClF3N2O6S7 5436 9827[M-H]-194 9822222 0294190 54 6191Prosulfuron(氟磺隆)C15H16F3N5O4S7 8418 0802[M-H]-139 0611140 6353283 96 7192Mesosulfuron?methyl(甲磺胺磺隆)C17H21N5O9S27 2502 0708[M-H]-267 0081288 9959494 67 2193Iodosulfuron?methyl(甲基碘磺隆)C14H13IN5O6S7 4505 9637[M-H]-139 0607307 8875287 48 9194Metsulfuron?methyl(甲磺隆)C14H15N5O6S6 4380 0670[M-H]-139 0611107 0348286 37 1195Halosulfuron(氯吡嘧磺隆)C13H15ClN6O7S8 3433 0339[M-H]-251 9849154 0608579 66 41962，4?D(2，4?滴)C8H6Cl2O36 1218 9621[M-H]-124 9788160 9560574 88 01972，4，5?T(2，4，5?涕)C8H5Cl3O36 8252 9232[M-H]-194 9175158 9403587 96 7198Bentazone(滅草松)C10H12N2O3S4 8239 0496[M-H]-132 0320197 00262104 35 9199Chlorpropham(氯苯胺靈)C10H12ClNO28 5212 0484[M-H]-151 990157 0333489 78 4200Fludioxonil(咯菌腈)C12H6F2N2O28 1247 0325[M-H]-180 0321126 034285 24 9201Fluroxypyr(氟草煙)C7H5Cl2FN2O34 8252 9588[M-H]-194 9532232 9532562 915 7202Mecoprop(2甲4氯丙酸)C10H11ClO37 1213 0324[M-H]-141 0107142 0141469 37 4203Linuron(利谷隆)C9H10Cl2N2O28 1247 0047[M-H]-159 9718174 1575474 113 5204Acifluorfen(三氟羧草醚)C14H7ClF3NO57 1359 9892[M-H]-354 0197321 5256285 85 4205Flonicamid(氟啶蟲酰胺)C9H6F3N3O3 0228 0390[M-H]-211 1003139 2211289 66 8206Flubendiamide(氟蟲雙酰胺)C23H22F7IN2O4S8 8681 0160[M-H]-254 0422543 8212294 59 9207Anilazine(敵菌靈)C9H5Cl3N48 3272 9507[M-H]-185 5195197 9747584 04 6208Fipronil(氟蟲腈)C12H4Cl2F6N4OS8 8434 9314[M-H]-329 9582249 9900192 610 0209Forchlorfenuron(氯吡脲)C12H10ClN3O7 2246 044[M-H]-127 005991 0289287 97 0210Fipronilesulfiny(氟甲腈)C12H4Cl2F6N48 9386 9644[M-H]-350 9878281 9920186 18 7211Fipronilsulfone(氟蟲腈砜)C12H4Cl2F6N4O2S8 8450 9263[M-H]-414 9497281 9920197 56 1212Fipronilsulfide(氟蟲腈硫醚)C12H4Cl2F6N4S8 5418 9365[M-H]-382 9598261 9588194 48 5

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方式的選擇

本文所檢測的212種農(nóng)藥種類較多，極性差異較大。乙腈的通用性較強(qiáng)，對農(nóng)藥的提取效率高并能有效減少油脂等對農(nóng)藥的干擾，通過適當(dāng)酸化，能促進(jìn)農(nóng)藥從組織中溶出而改善提取效率。因此采用0.1%乙酸乙腈溶液作為提取溶劑，回收率滿足相關(guān)要求，其中部分酸性農(nóng)藥如2,4-D、滅草松的回收率提高了20%～40%。在定容液的選擇上，采用300 μL乙腈先溶解殘?jiān)?，再加?00 μL 0.1%乙酸水溶液定容，不僅可以保證螺環(huán)菌胺、丁苯嗎啉等弱極性農(nóng)藥充分溶解，還可以保證極性較強(qiáng)化合物在凈化柱上的充分保留。采用的Turboflow在線凈化技術(shù)可有效避免傳統(tǒng)凈化方式中固相萃取填料石墨化碳及PSA對含平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥或酸性農(nóng)藥的吸附。

2.2 在線凈化條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)選定10 mmol/L乙酸銨+0.02%乙酸水溶液作為上樣溶液分析了C18、Cyclone和Cyclone-P對目標(biāo)化合物的保留情況，發(fā)現(xiàn)3種凈化柱對90%的化合物均有很好的保留。但Cyclone-P和Cyclone對極性稍強(qiáng)的化合物比C18柱保留更強(qiáng)，以滅草松、啶蟲脒、樂果、氟啶蟲酰胺為例，如圖2所示。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)具有極性修飾的Cyclone-P凈化柱比Cyclone凈化柱的基質(zhì)效應(yīng)更小，綜合考慮選用Cyclone-P作為凈化柱。然后選擇合適的流動(dòng)相將保留在凈化柱上的化合物洗脫進(jìn)入液相色譜體系分離。當(dāng)洗脫溶液中有機(jī)相比例高時(shí)能更有效地將化合物洗脫進(jìn)入色譜體系，但高有機(jī)相在色譜分離時(shí)易造成基質(zhì)效應(yīng)，因此盡量選擇較低比例的有機(jī)相作為洗脫溶液。實(shí)驗(yàn)考察了不同比例有機(jī)相條件下目標(biāo)化合物從凈化柱上洗脫的情況。首先比較了乙腈和甲醇的洗脫能力，發(fā)現(xiàn)乙腈比甲醇能夠更快地從凈化柱上將目標(biāo)化合物洗脫(比甲醇快0.02～0.3 s)，目標(biāo)化合物被洗脫進(jìn)入分析柱的時(shí)間為1～2.5 min，為保證分析靈敏度足夠多的目標(biāo)物被洗脫進(jìn)入分析，采用乙腈為洗脫溶劑。在此條件下，嘗試用不同比例的10 mmol/L乙酸銨+0.02%乙酸水溶液與乙腈洗脫分析物，以丁醚脲、氟啶脲、丁苯嗎啉、噠螨靈4種極性較弱化合物為例，比較了不同乙腈比例時(shí)4種化合物的洗脫情況，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙腈比例大于60%時(shí)洗脫無明顯變化，降至50%時(shí)，化合物的洗脫比例明顯變小。因此實(shí)驗(yàn)選擇10 mmol/L乙酸銨+0.02%乙酸水溶液與乙腈(體積比40∶60)作為洗脫溶劑，保證了分析物較好的峰形和較高的靈敏度。

2.3 質(zhì)譜條件的選擇及定性篩查數(shù)據(jù)庫的建立

本研究采用正負(fù)同時(shí)掃描的模式對212種化合物進(jìn)行檢測，在母離子響應(yīng)較高的離子化模式下，選擇強(qiáng)度大的準(zhǔn)分子離子峰以提高分析的靈敏度和數(shù)據(jù)庫檢索的穩(wěn)定性。本方法中采用正、負(fù)離子切換不分段的全掃描和全范圍二級質(zhì)譜掃描模式(Full Scan/ddMS2)，14 min可完成212種農(nóng)藥殘留的檢測，在多殘留分析時(shí)采用正、負(fù)離子切換方式可以提高分析檢測的通量，但正、負(fù)離子切換易出現(xiàn)采集掃描點(diǎn)過少而使重復(fù)性下降的現(xiàn)象，為避免該現(xiàn)象對結(jié)果造成影響，實(shí)驗(yàn)以10 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，相對質(zhì)量偏差均可保證在5 ppm之內(nèi)，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16%～2.6%，漂移時(shí)間均小于0.5 s。

在優(yōu)化的色譜-質(zhì)譜條件下進(jìn)樣，通過對212種化合物做一級質(zhì)譜全掃描，獲得目標(biāo)物的保留時(shí)間、母離子、同位素分布以及離子化形式等信息。在二級質(zhì)譜圖中獲得目標(biāo)物母離子在不同碰撞能量下(20、40、60 eV)采集的二級質(zhì)譜圖的疊加圖，低能量的質(zhì)譜圖有助于判斷主要碎片，高能量質(zhì)譜圖有利于判斷碎片細(xì)節(jié)。每種農(nóng)藥包含多個(gè)特征離子，結(jié)合化合物的結(jié)構(gòu)、裂解原理選用相對豐度較高的2個(gè)離子作為特征碎片離子，見表2。通過Exactfinder軟件導(dǎo)入包含化合物名稱、分子式、精確質(zhì)量數(shù)、保留時(shí)間和特征碎片的表格，并通過鏈接的Librarymanager軟件導(dǎo)入二級質(zhì)譜圖，建立了定性篩查數(shù)據(jù)庫。

圖3 多菌靈陽性樣品的確證圖Fig.3 Confirms of positive sample of carbendazimA:mass spectrum and isotope ratio of carbendazim[M+H]+m/z 192.076 75 with a mass tolerance of 5 ppm by full scan mode,#：the oretical value of isotope peak,*：measured values of isotope peak(1:192.076 75,2:193.073 79,3:193.080 11,4:194.077 18);B:fragment mass spectrum of [M+H]+ m/z 192.08 with 40% NCE by ddMS2 mode of standard solution(B1)and sample(B2)

2.4 定性分析

樣品經(jīng)過前處理、儀器測定后將數(shù)據(jù)導(dǎo)入定性篩查數(shù)據(jù)庫軟件進(jìn)行自動(dòng)檢索分析，軟件根據(jù)實(shí)測離子對數(shù)據(jù)庫中的精確質(zhì)量數(shù)、保留時(shí)間、同位素峰比、二級碎片進(jìn)行匹配，在設(shè)定偏差范圍的參數(shù)標(biāo)記為綠色，超出偏差范圍的標(biāo)記為紅色。只要精確質(zhì)量數(shù)標(biāo)記為紅色即可判斷為陰性。將各標(biāo)記均為綠色的化合物確定為疑似陽性樣品，再利用二級質(zhì)譜圖進(jìn)一步確證。為了考察本篩查方法的可靠性，將空白基質(zhì)10 μg/kg的加標(biāo)樣品數(shù)據(jù)導(dǎo)入篩查軟件。以梨基質(zhì)中的多菌靈為例，該化合物在5 ppm質(zhì)量數(shù)偏差范圍內(nèi)獲得的離子色譜圖的保留時(shí)間與數(shù)據(jù)庫中該化合物的保留時(shí)間在5%偏差范圍內(nèi)，其同位素峰形和碎片離子如圖3。圖3A為該化合物所獲得的母離子精確質(zhì)量數(shù)(192.076 75)及其同位素峰(193.073 79、193.080 11、194.077 18)與多菌靈理論同位素峰分布匹配圖(*代表實(shí)測值，#代表理論值)。而圖3B則為該化合物在質(zhì)量數(shù)為192.08時(shí)所觸發(fā)的ddMS2掃描，其在40%的高能量碰撞下獲得該化合物的二級質(zhì)譜圖，圖中具有數(shù)據(jù)庫中該化合物的特征二級質(zhì)譜碎片離子(160.05和132.06)。由此可看出篩查數(shù)據(jù)庫中用于定性的參數(shù)并未受到基質(zhì)干擾，可用于化合物的確證。

2.5 線性范圍、回收率與精密度

用0.1%乙酸水溶液-乙腈(7∶3)配制1、2、5、10、20、50 μg/L質(zhì)量濃度范圍的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按優(yōu)化方法進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，212種農(nóng)藥在0.5～50 μg/L范圍內(nèi)呈良好線性，相關(guān)系數(shù)均大于0.998。以能準(zhǔn)確測定空白基質(zhì)最小添加量的方式確定方法的定量下限(LOQ)，得212種農(nóng)藥的LOQ為0.5～5 μg/kg。因各國對果蔬中農(nóng)藥的最低限量標(biāo)準(zhǔn)為10 μg/kg，本研究的重點(diǎn)在于快速準(zhǔn)確篩查目標(biāo)化合物，所以對所有化合物進(jìn)行10 μg/kg加標(biāo)水平的回收實(shí)驗(yàn)，平行測定6次，方法的回收率為58.3%～129.4%，RSD為2.8%～16.0%，精密度和準(zhǔn)確度符合相關(guān)要求。表2列出了定量下限及梨基質(zhì)的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2.6 實(shí)際樣品的測定

經(jīng)過實(shí)際樣品驗(yàn)證，建立的方法也適用于菠菜、香麥菜、豇豆、葡萄、草莓等果蔬中多種農(nóng)藥殘留的篩查。對白菜、豇豆、梨、葡萄等20多批樣品進(jìn)行檢測，分別檢出豇豆中含有克百威、3-羥基克百威、多菌靈，梨中含有多菌靈、吡蟲啉、甲基硫菌靈和噻蟲嗪。對于檢出的化合物進(jìn)樣相應(yīng)的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液重新定量，并采用LC-MS/MS進(jìn)行確證，所篩查出的農(nóng)藥確實(shí)存在，且各農(nóng)藥含量基本相符。

3 結(jié) 論

本研究基于TurboFlow在線凈化技術(shù)和Q-Orbitrap高分辨質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合數(shù)據(jù)庫，建立了高通量篩查農(nóng)藥多殘留的分析方法，分析對象涵蓋了有機(jī)磷、氨基甲酸酯、煙堿、苯甲酰脲、苯并咪唑類等極性和溶解度差異較大的多類常用農(nóng)藥。該在線凈化技術(shù)簡化了前處理過程，提取后即可進(jìn)樣，操作簡單、快速。一次進(jìn)樣可同時(shí)獲得精確母離子和高靈敏度的二級碎片，可通過數(shù)據(jù)庫檢索排除假陽性結(jié)果。該方法大大提高了檢測效率，降低了對農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的依賴性，為果蔬的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測提供了一種有力的技術(shù)手段，可用于212種農(nóng)藥殘留的快速篩查與確證。

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