γ-干擾素釋放試驗在活動性結(jié)核病患兒診斷中的應(yīng)用

陳蓮姣,閻青青,王 丹

(1.海南省樂東黎族自治縣婦幼保健院兒科 572500；2.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科，?？?570102)

結(jié)核病是威脅人類健康的一大傳染病，相關(guān)研究顯示，全世界有1/3的人口感染結(jié)核分枝桿菌[1-2]。世界衛(wèi)生組織報道，截止2015年12月，全球新發(fā)結(jié)核病2 125萬病例，其中有100萬例為兒童。我國雖有較高的卡介苗接種率，但是每年仍然有60萬左右的新發(fā)病例[3-4]。肺結(jié)核的發(fā)病率和病死率居于我國傳染病首位，防治結(jié)核病的形勢依然非常嚴峻。在重癥肺結(jié)核和結(jié)核性腦膜炎中，兒童患者呈顯著上升趨勢。筆者綜合分析γ-干擾素釋放試驗在兒童肺結(jié)核的診斷效果及對臨床治療的指導(dǎo)意義，為治療肺結(jié)核患兒提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月至2016年10月海南省樂東黎族自治縣婦幼保健院收治的100例肺結(jié)核患兒作為研究對象，其中男66例、女34例；年齡6～14歲，平均(10.21±3.21)歲；體質(zhì)量(30～52)kg，平均(45.32±2.41)kg。疫苗接種：未接種卡介苗42例，接種卡介苗58例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會呼吸學(xué)組制訂的兒童肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)最終均確診為兒童肺結(jié)核；(3)所有入組患兒以及患兒家屬均對本次研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除原發(fā)性免疫缺陷性疾病和中途退出者；(2)合并嚴重心、肝、腎功能異常及明顯精神異常者；(3)難以遵循醫(yī)囑完成相關(guān)檢查者。

1.2 方法

1.2.1 試劑和設(shè)備 結(jié)核桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒購自武漢海吉力生物科技有限公司，結(jié)核菌素購自成都生物制品研究所，抗酸染色液購自珠海貝索生物科技有限公司。

1.2.2 γ-干擾素釋放試驗方法 采集所有患兒2～3 mL靜脈血，采用肝素鈉進行抗凝處理，在室溫下進行運輸和儲存， 在5 h內(nèi)進行樣品刺激，嚴格按照試劑盒說明書進行相關(guān)操作。

1.2.3 結(jié)核菌素皮膚試驗 所有患兒均于采血后24 h內(nèi)在手臂上注射0.1 mL結(jié)核菌素， 由醫(yī)院結(jié)核科的相關(guān)工作人員進行相關(guān)操作；3 d后檢測出最終結(jié)果，采用直尺來量取硬結(jié)塊平均直徑；以紅腫硬塊直徑>15 mm來判斷卡介苗接種者和未接種者；以紅腫硬塊直徑>5 mm作為判斷感染結(jié)核分枝桿菌的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 抗酸染色法 用接種環(huán)挑取帶血小塊，制成厚涂片之后，將制好的涂片進行抗菌染色處理，加溫使得菌體能夠著色，再使用亞甲藍溶液復(fù)染處理，在油鏡下進行觀察，抗酸性細菌呈現(xiàn)紅色，非抗酸性細菌呈現(xiàn)藍色。

1.3 觀察指標(biāo) 分析不同診斷方法的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值等參數(shù)指標(biāo)。

靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%； 陽性預(yù)測值=真陽性/(真陽性+假陽性)×100%；陰性預(yù)測值=真陰性/(真陰性+假陰性)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 不同診斷方法靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較 γ-干擾素釋放試驗的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(P<0.05)，見表1。

2.2 肺結(jié)核患者抗酸染色陽性率和陰性率比較 100例肺結(jié)核患者抗酸染色陽性有33例，陰性有67例，其中抗酸染色陽性肺結(jié)核患者的γ-干擾素釋放試驗陽性率為84.85%(28/33)，陰性肺結(jié)核患者的γ-干擾素釋放試驗陽性率82.09%(55/67)。

表1 兩種研究方法靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、 陰性預(yù)測值比較(%)

3 討 論

準(zhǔn)確診斷結(jié)核病，并進行規(guī)范化的治療，對控制結(jié)核病的流行非常重要。診斷結(jié)核病的過程比較復(fù)雜，由于卡介苗和結(jié)核分枝桿菌與其他肺結(jié)核分枝桿菌存在交叉反應(yīng)，所以在過去幾十年中所廣泛使用的結(jié)核菌素皮膚試驗在我國卡介苗的高接種地區(qū)使用價值非常有限。相比起結(jié)核菌素皮膚試驗使用的純化蛋白衍生物，γ-干擾素釋放試驗是近年來發(fā)展起來的新型結(jié)核病診斷手段[6-8]。

γ-干擾素釋放試驗是通過采用酶聯(lián)免疫吸附試驗定量檢測外周血單核細胞在結(jié)核菌特異性抗原刺激下釋放的γ-干擾素，再監(jiān)測機體是否存在結(jié)核菌感染[9-11]。結(jié)核病高負擔(dān)國家一直將卡介苗作為免疫規(guī)劃中的重要疫苗之一，診斷潛伏性結(jié)核感染時排除卡介苗接種的交叉干擾能夠提高肺結(jié)核疾病診斷的準(zhǔn)確率。即使γ-干擾素釋放試驗很難排除卡介苗的交叉反應(yīng)，但由于γ-干擾素釋放試驗具有價格低且經(jīng)濟實惠等特點，仍能夠作為篩查結(jié)核病患者的參考標(biāo)準(zhǔn)。γ-干擾素釋放試驗通過對T細胞經(jīng)結(jié)核特異性抗原刺激之后產(chǎn)生和釋放γ-干擾素水平進行定量檢測能夠判斷患者是否存在結(jié)核感染，在國際上被廣泛使用。本文所采取的國產(chǎn)γ-干擾素釋放試驗方法與結(jié)核菌素皮膚試驗方法基本相同，均通過直接刺激和培養(yǎng)外周血，從而區(qū)別抗原，明顯減少卡介苗接種因素干擾。

本研究結(jié)果顯示，γ-干擾素釋放試驗的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗(P<0.05)。γ-干擾素釋放試驗對肺結(jié)核的檢出率比較高，均超過80%[12-13]。本研究結(jié)果顯示，100例肺結(jié)核患者抗酸染色陽性有33例，陰性有67例，其中抗酸染色法陽性肺結(jié)核患者的γ-干擾素釋放試驗陽性率為84.85%(28/33)，陰性肺結(jié)核患者的γ-干擾素釋放試驗陽性率82.09%(55/67)。臨床中，當(dāng)患者具有顯著肺結(jié)核特點時，T細胞γ-干擾素釋放試驗為陽性時，肺結(jié)核的靈敏度和特異度均顯著提高，因此能夠為抗結(jié)核的治療提供有力的指導(dǎo)。除此之外，γ-干擾素釋放試驗在提高肺結(jié)核診斷效率時，耗費的成本也應(yīng)該引起高度重視。

綜上所述，γ-干擾素釋放試驗比結(jié)核菌素皮膚試驗診斷肺結(jié)核病有較高的靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、特異度，對抗酸染色陰性肺結(jié)核有較高的檢出率，有良好的臨床應(yīng)用前景。

[1]李紅，唐神結(jié)，史祥，等．全血γ-干擾素釋放試驗對涂陰肺結(jié)核診斷價值的研究[J/CD]．中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2012，6(16)：4894-4897．

[2]FORTUN J,MARTIN-DAVILA P,MENDEZ R,et al.CA-125:A useful marker to distinguish pulmonary tuberculosis from other pulmonary infections[J].Open Respir Med J,2013,20(3):123-127.

[3]宋其生，陳秀琴，趙琴，等．結(jié)核菌素純蛋白衍生物試驗凈增值與γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病群體感染中的診斷價值[J]．中華結(jié)核和呼吸雜志，2012，35(9)：669-672．

[4]ALVAREZ N,OTERO O,CAMACHO F,et al.Passive administration of purified secretory IgA from human colostrum induces protection against Mycobacterium tuberculosis in a murine model of progressive pulmonary infection[J].BMC Immunol,2013,14(Suppl 1):1-4.

[5]鄒琳琳，黎友倫．γ-干擾素釋放試驗在免疫受損合并肺結(jié)核患者中的應(yīng)用[J]．中國免疫學(xué)雜志，2016，32(6)：878-881．

[6]MESSEROTTI BENVENUTI S,PATRON E,ZANATTA P,et al.Change in behavioral functional capacity is associated with preexisting cognitive function rather than with cognitive decline in patients 1 year after cardiac surgery[J].Gen Hosp Psychiatry,2013,35(2):117-121.

[7]萬東勇，黃正谷，何靜．抗結(jié)核抗體與γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的臨床價值[J]．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37(20)：2912-2913．

[8]魏振宏，梁忠，馬守葉，等．γ-干擾素釋放試驗診斷終末期腎臟病患者潛伏結(jié)核感染的薈萃分析[J]．臨床檢驗雜志，2015，33(7)：550-553．

[9]袁凱，吳雪瓊，張強，等．結(jié)核桿菌抗原特異性γ干擾素釋放試驗在脊柱結(jié)核輔助診斷中的應(yīng)用研究[J]．實用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29(14)：2314-2316．

[10]趙磊，薛劍，杜君曉，等．干擾素釋放試驗在AIDS合并結(jié)核感染患者中的診斷價值[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2015，44(11)：1484-1486．

[11]母發(fā)光，何海蘭，譚泰昌，等．γ-干擾素釋放試驗對兒童結(jié)核性腦膜炎的診斷價值[J]．臨床兒科雜志，2015，18(3)：242-246．

[12]方明，陳海庚，李阿敏．γ干擾素釋放試驗聯(lián)合胸水腺苷脫氨酶在結(jié)核性胸膜炎中的診斷價值[J]．安徽醫(yī)學(xué)，2016，37(10)：1282-1283．

[13]KONDRUP J E,RASMUSSEN H H,HAMBERG O L,et al.Nutritional risk screening (NRS 2002):a new method based on an analysis of controlled clinical trials[J].Clinical Nutrition,2003,22(3):321-336.