趨化因子GRO-a在宮頸癌中的表達(dá)及意義

張隆英 葉永志 陳豪

宮頸癌是全球婦女僅次于乳腺癌的惡性腫瘤，在一些發(fā)展中國(guó)家其發(fā)病率居第1位［1］。我國(guó)每年新增宮頸癌病例＞11萬(wàn)，嚴(yán)重威脅女性的生命安全［2］。趨化因子是一類在生理?xiàng)l件下發(fā)揮重要作用的蛋白質(zhì)，負(fù)責(zé)細(xì)胞骨架的重構(gòu)、細(xì)胞遷移，參與免疫反應(yīng)等，近年研究表明較多趨化因子還參與癌癥的發(fā)生與惡化。其在腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)化、局部浸潤(rùn)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中可能起重要作用［3-4］。趨化因子中生長(zhǎng)相關(guān)癌基因（growth-related oncogene，GRO）表達(dá)與多種癌組織，如胃癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤等存在相關(guān)性，但與宮頸癌的關(guān)系目前尚不清楚。作者通過(guò)檢測(cè)手術(shù)后宮頸癌組織GRO-a的表達(dá)，探討其與宮頸癌的相關(guān)性，為臨床靶向治療宮頸癌提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2012年1月至2016年1月臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院宮頸癌患者23例，年齡28～75歲，平均年齡（48.45±12.57）歲。術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診。隨機(jī)抽取慢性宮頸炎［年齡21～69歲，平均年齡（47.12±11.69）歲］及宮頸上皮內(nèi)瘤變［年齡23～61歲，平均年齡（45.12±12.21）歲］患者活檢組織各40例作為對(duì)照。三組患者年齡差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》中關(guān)于慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室影像學(xué)檢查。（2）原發(fā)宮頸病變。（3）影像學(xué)資料齊全。（4）術(shù)前未行放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）宮頸轉(zhuǎn)移性腫瘤。（2）影像學(xué)資料不全。（3）有明顯手術(shù)禁忌證。

1.2 方法 多克隆兔抗人GRO-a抗體，購(gòu)自Biomedical Technologies公司，即用型SP試劑盒（PV-6000）購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化方法：采用SP法測(cè)定GRO-a的表達(dá)。主要步驟包括標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋切片，二甲苯脫蠟梯度酒精水化，3%過(guò)氧化氫滅活，抗原修復(fù)，兔血清液封閉，滴加Ⅰ抗、Ⅱ抗及鏈霉素抗生素蛋白-過(guò)氧化物酶復(fù)合物，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水封片。PBS代替Ⅰ抗進(jìn)行陰性對(duì)照?？贵w稀釋濃度為1：50。

1.3 結(jié)果判定 光鏡下觀察細(xì)胞著色情況。陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿呈棕色或棕黃色，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野（×200），取其平均值為每張切片的觀察結(jié)果。按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例判定結(jié)果分析。陰性（-）：陽(yáng)性細(xì)胞＜5%；弱陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5%～24%；陽(yáng)性（++），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為25%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿呈棕黃色。GRO-a主要表達(dá)在宮頸癌組織和正常宮頸上皮組織的胞漿內(nèi)。三組GRO-a蛋白的陽(yáng)性率1次為（73.91%，45.00%，30.00%），三組陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.13，P＜0.05）。宮頸癌與上皮內(nèi)瘤變比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.2，P＜0.05）；宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸炎比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.01，P＞0.05）。見(jiàn)表1。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者GRO-a蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率也高于無(wú)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.05，P＜0.05）。見(jiàn)表 2。

表1 GRO-a蛋白在病變宮頸組織中的比較

表2 伴或不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌中GRO-a 蛋白的比較

3 討論

趨化因子是對(duì)免疫細(xì)胞具有趨化作用的細(xì)胞因子，其分子量一般為8～10kD，氨基酸序列有20%～50%的同源性。幾乎所有的趨化因子都含有兩對(duì)相對(duì)保守的半胱氨酸殘基形成的分子內(nèi)二硫鍵，根據(jù)靠近N端的一對(duì)半胱氨酸殘基的排列順序?qū)②吇蜃臃譃镃X3C、CXC、CC、XC四個(gè)亞家族，GRO-a屬于CXC類［5］。GRO蛋白的受體為CXCR2，為鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白（guanylate binding protein，簡(jiǎn)稱G蛋白）偶聯(lián)受體。其是僅含一條肽鏈的糖蛋白，其N端在細(xì)胞外側(cè)，C端在細(xì)胞內(nèi)，中段形成七個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)［6］。GRO-a早期被發(fā)現(xiàn)主要趨化中性粒細(xì)胞至炎癥部位參與免疫反應(yīng)，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤的增殖與遷移起一定的作用，可能成為治療腫瘤的靶點(diǎn)。

惡性腫瘤的本質(zhì)是克隆性增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，趨化因子可能起著重要的作用。當(dāng)GRO-a與CXCR2結(jié)合后，激發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)轉(zhuǎn)而參與細(xì)胞的多種生物學(xué)過(guò)程，包括促進(jìn)立早基因的表達(dá)，引起細(xì)胞的持續(xù)增生［7］。Owen等［8］發(fā)現(xiàn)黑色素瘤中 GRO-a，GRO-β，GRO-γ持續(xù)高表達(dá)，在體外應(yīng)用抗GRO-a或抗CXCR2抗體可以抑制黑色素瘤的生長(zhǎng)。Folkman［9］研究表明，GRO-a是潛在的血管生成因子，可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞的趨向性，促進(jìn)腫瘤新生血管生長(zhǎng)。Haghnegahdar［10］報(bào)道，GRO-a可通過(guò)自分泌或旁分泌促進(jìn)腫瘤血管的形成而推動(dòng)腫瘤的生長(zhǎng)。Muller等［11］研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的轉(zhuǎn)移是在趨化因子引導(dǎo)下的一個(gè)有序、分步驟進(jìn)行的過(guò)程。首先，癌變組織克隆性增生，侵入局部組織，并誘導(dǎo)血管形成，同時(shí)在其表面表達(dá)相應(yīng)受體；繼之，癌細(xì)胞與原發(fā)瘤分離，通過(guò)血液或淋巴系統(tǒng)，定植與能產(chǎn)生高水平配體的器官，受體與配體結(jié)合，侵入遠(yuǎn)處組織，形成轉(zhuǎn)移性腫瘤。

本資料結(jié)果顯示，宮頸癌組織中GRO-a蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變的組織，這提示隨著腫瘤細(xì)胞的形成，GRO-a蛋白表達(dá)增強(qiáng)，這也提示GRO-a可能參與宮頸癌的進(jìn)程。本資料中，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者GRO-a蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)轉(zhuǎn)移組，這也提示GRO-a蛋白的高表達(dá)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移也有一定的關(guān)系。

綜上所述，宮頸癌組織中GRO-a蛋白表達(dá)水平增加，其可能參與宮頸癌組織生物進(jìn)程，故針對(duì)GRO-a的免疫治療有一定的價(jià)值，值得進(jìn)一步研究。

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