表沒食子兒茶素沒食子酸酯對慢性間歇性缺氧大鼠心肌cTnT及Ca2+-ATPase的影響

曾閔，易世江

（1.湖南省兒童醫(yī)院 心血管內(nèi)科，湖南 長沙 410007；2.廣西壯族自治區(qū)桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，廣西 桂林 541001）

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS）為臨床常見呼吸道疾患，長期間歇性低氧可導(dǎo)致機(jī)體靶器官慢性損傷及并發(fā)癥，如高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。⑿穆墒С＜靶墓δ芩ソ叩?。有研究證明中重度OSAHS患者茶多酚血清中的肌鈣蛋白水平較正常健康組明顯增高，并與缺氧程度有關(guān)[1]。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）是茶多酚中主要的活性成分[2]，具有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化以及保護(hù)心腦血管等作用。本研究以EGCG干預(yù)來研究其對慢性間歇性缺氧大鼠心肌cTnT及Ca2+-ATPase影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

常壓間歇缺氧箱（桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室）、超低溫高速離心機(jī)（產(chǎn)地：美國；型號：Allegra 64R）和紫外分光光度計(jì)（產(chǎn)地：上海；型號：ZF-7）；EGCG（Sigma），cTnT和 Ca2+-ATPase試劑盒均購自南京建成生物研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 慢性間歇性缺氧大鼠模型的制作 參照文獻(xiàn)[3]建立慢性間歇性缺氧模型。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 取桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心5周齡大鼠（Sprague-Dawley, SD）24只，體重110～120 g，按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為4組，具體為：常溫常壓生理鹽水組（A組）、間歇性缺氧生理鹽水組（B組）、間歇性缺氧50 mg/（kg·d）EGCG組（C組）和間歇性缺氧100 mg/（kg·d）EGCG組（D組）。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 ①A組6只，常溫常氧下飼養(yǎng)，每日予以3 ml生理鹽水灌胃飼養(yǎng)8周。②慢性間歇性缺氧組SD大鼠共18只，分為B、C和D組，每組各6只；每天9:00～17:00共8個小時為慢性間歇性缺氧時間；B組給予SD大鼠3 ml生理鹽水，灌胃；C組給予SD大鼠EGCG 50 mg/（kg·d），稀釋于3 ml生理鹽水，灌胃；D組給予以SD大鼠EGCG 100 mg/（kg·d），稀釋于3 ml生理鹽水，灌胃。所有研究對象均飼養(yǎng)8周后常氧下拉頸處 死。

1.2.3.1 大鼠心臟指數(shù)的檢測 用10%的水合氯醛（3 ml/kg）腹腔注射麻醉SD大鼠，分離出腹主動脈取血，取出心臟稱重。

1.2.3.2 SD大鼠心肌生化指標(biāo)的測定 分離出腹主動脈血5 ml，置于普通血清管中，室溫下靜置4 h后，3 000轉(zhuǎn)/min，離心15 min，吸取上清液（血清）負(fù)80℃冰箱保存，上機(jī)檢測心肌cTnT及Ca2+-ATPase。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組計(jì)量資料采用單因素方差分析，組間兩兩數(shù)據(jù)比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組SD大鼠心臟重量情況比較

A、B、C和D組心臟重量分別為（1.07±0.05） g、（1.41±0.13）g、（1.32±0.14）g和（1.26±0.11） g；B、C和D組與A組比較心臟重量均明顯增加（P＜0.05）；C、D組與B組比較心臟質(zhì)量均明顯降低（P＜0.01），以D組最明顯。

2.2 4組SD大鼠心肌組織cTnT及Ca2+-ATPase情況比較

C、D組與A組cTnT含量、Ca2+-ATPase活性比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；C、D組cTnT含量均明顯低于B組（P＜0.01），其中以D組最為明顯，表現(xiàn)為一定的劑量依賴性；C、D組Ca2+-ATPase活性均明顯高于B組（P＜0.05），D組Ca2+-ATPase活性增高尤為明顯。見表1。

表1 4組SD大鼠心肌組織cTnT及Ca2+-ATPase情況比較 （±s, n =6）

表1 4組SD大鼠心肌組織cTnT及Ca2+-ATPase情況比較 （±s, n =6）

注：1）與B組比較，P ＜0.01；2）與B組比較，P ＜0.05。

項(xiàng)目 A組 B組 C組 D組 F值 P值CTnT/(pg/L) 3.34±0.54 5.70±0.51 3.97±0.591） 3.47±0.411） 26.040 0.000 Ca2+-ATPase/(μmol/mg.h) 0.21±0.02 0.08±0.01 0.25±0.022） 0.29±0.032） 86.750 0.000

3 討論

隨著生活水平的提高，阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的發(fā)病率呈升高趨勢，嚴(yán)重危害人們的身體健康,尤其是心、腦、腎、肺重要器官。有研究發(fā)現(xiàn)OSAHS患者早期即存在心肌損傷，損傷水平與病情程度具有相關(guān)性[4]。

表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）是綠茶提取物茶多酚的主要成分，研究發(fā)現(xiàn)適量飲茶能降低心血管事件的發(fā)生率，對心肌具有明確的保護(hù)作用[5]；另有研究發(fā)現(xiàn)，兒茶素能通過抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的血管緊張素II、醛固酮和心鈉肽的濃度來降低大鼠全心和左心重量指數(shù)，從而改善心衰大鼠的心功能[6]。本研究結(jié)果顯示，EGCG能明顯降低心臟質(zhì)量，其中以D組尤為明顯，呈現(xiàn)劑量效應(yīng)，說明EGCG亦可能通過上述機(jī)制抑制心肌的肥厚，阻止心臟重塑。

cTnT是心肌損傷的一個敏感性指標(biāo)，有研究證實(shí)，慢性間歇性缺氧條件下，血cTnT含量會升高，其機(jī)制可能是：心肌的間歇性缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞膜通透性增加，使胞漿中CTnT漏出；缺氧嚴(yán)重時可導(dǎo)致心肌細(xì)胞的壞死心肌收縮蛋白的破壞，其中CTnT會釋放出來；動脈壓增大以及心肌收縮障礙的情況下導(dǎo)致心室擴(kuò)大、心肌細(xì)胞被機(jī)械性牽張、心肌細(xì)胞的破壞以及CTnT漏出[7-8]。本研究結(jié)果顯示，與常溫常氧生理鹽水組（A組）相比，EGCG組（C、D組）cTnT含量無明顯差異；與間歇性慢性缺氧生理鹽水組（B組）相比，EGCG組（C、D組）cTnT含量明顯降低，其中以EGCG 100 mg/kg組（D組）最為明顯，表現(xiàn)為一定的劑量依賴性。

正常生理?xiàng)l件下，心肌細(xì)胞外液鈣離子濃度是細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的1 000倍，這種濃度差主要依靠Ca2+-ATPase酶。當(dāng)心肌缺氧或損傷時使心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+-ATPase的活性降低，引起細(xì)胞內(nèi)鈣聚集，導(dǎo)致鈣超載，使細(xì)胞膜的通透性增加，血液中cTnT含量升高[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，芪丹通脈片通過增加Ca2+-ATPase活性來抑制心肌細(xì)胞線粒體中鈣超載及保護(hù)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，起到心肌的保護(hù)作用[9]。本研究結(jié)果顯示，EGCG組（C、D組）Ca2+-ATPase酶活性明顯增高，提示EGCG可能提高Ca2+-ATPase活性，降低胞內(nèi)鈣超載引發(fā)的細(xì)胞損傷，從而保護(hù)心肌組織。

綜上所述，在慢性間歇性缺氧大鼠模型中，EGCG能通過提高心肌細(xì)胞Ca2+-ATPase活性，減少心肌細(xì)胞的破壞，對心肌起保護(hù)作用；該實(shí)驗(yàn)研究為EGCG在鼾癥患者的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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