50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對3種水生生物的毒性與安全性評估

林昆

摘要 本文對嘧菌酯與烯酰嗎啉的復配殺菌劑對水生生物的毒性及安全性展開研究。根據(jù)國家《化學農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》中農(nóng)藥對水生生物的毒性等級，分別測定其對斑馬魚、大型溞、小球藻的急性毒性，對其安全性進行評價。結果表明，50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對魚類屬于中毒藥劑，對溞類有高毒性作用，對藻類低毒。因此，田間使用時仍應注意控制使用劑量和劑型選擇等，盡量減小其對環(huán)境的危害。

關鍵詞 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑；水生生物；毒性；安全性評估

中圖分類號 S481+.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）02-0186-02

Evaluation of Toxicity and Safety of 50% Dimethomorph·Azoxystrobin WP to 3 Kinds of Aquatic Organisms

LIN Kun

（College of Plant Protection，Hunan Agricultural University，Changsha Hunan 410128）

Abstract In this paper，the toxicity and safety of the compound bactericide of dimethomorph and azoxystrobin on aquatic organisms were studied. According to the toxicity grade of pesticides on aquatic organisms in "Test guidelines on environment safety assessment for chemical pesticides"，the acute toxicity were measured on zebrafish，daphnia and chlorella，the safety was evaluated. The results showed that 50% dimethomorph·azoxystrobin WP was a kind of medium toxic agent for fish，which was high toxicity for daphnia，and low toxicity for chlorella. Therefore，dosage and dosage form selection should be controlled in the field，so as to minimize the harm to the environment.

Key words 50% dimethomorph·azoxystrobin WP；aquatic organism；toxicity；safety evaluation

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑是目前全球市場銷量最大的一類殺菌劑，隨著使用年限的增加，使用單一成分殺菌效果越來越差，隨之越來越多與之進行復配的殺菌產(chǎn)品逐漸取代單一成分的使用。

嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類的主流應用成分之一，與之復配產(chǎn)生的殺菌劑產(chǎn)品層出不窮，其中與烯酰嗎啉的復配制劑在黃瓜霜霉病的防治上得到廣泛應用，且使用量逐年增加，隨之產(chǎn)生的殘留成分進入水體，可能會對水環(huán)境造成污染，并可能對生物造成不可預估的危害[1-2]。

為了評估嘧菌酯與烯酰嗎啉的復配類殺菌劑對水生生物的毒性及安全性，選用50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（30∶20）可濕性粉劑，根據(jù)國家《化學農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》中農(nóng)藥對水生生物的毒性等級，分別測定其對斑馬魚、大型溞、小球藻的急性毒性，并對其進行安全性評價，以期為正確評價其對水生系統(tǒng)可能造成的危害提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試生物。斑馬魚（Brachydonto rerlo H-B.），體長（3.0±0.5）cm、體重（0.3±0.1）g，由中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所提供。試驗前在室內(nèi)馴養(yǎng)1周，馴養(yǎng)期間斑馬魚生長正常，死亡率<2%，試驗用魚健康無病、大小一致。試驗前24 h停止喂食，整個試驗過程不進行喂食。

大型溞（Daphnia magna Straus），由實驗室保存的種溞經(jīng)馴養(yǎng)后用于試驗。在玻璃缸內(nèi)放入預先曝氣24 h以上的自來水，再放入數(shù)十個大型溞，然后以實驗室培養(yǎng)的小球藻、斜生柵藻混合液喂養(yǎng)大型溞。于（20±2）℃條件下培養(yǎng)，避免陽光直射。每隔幾天換一次水，每天注意觀察大型溞生長狀況并及時添加藻類，一旦發(fā)現(xiàn)有懷卵母溞即將其移至另外的缸內(nèi)培養(yǎng)[1]。每天定時將小溞移出。毒性試驗用的溞為實驗室培養(yǎng)的孤雌生殖三代以后的幼溞，溞齡為出生6～24 h以內(nèi)，幼溞健康活潑。

小球藻（Chlorella vulgarts Beij.），藻類購自中科院水生生物研究所淡水藻種庫。培養(yǎng)方法為將藻種接入盛有SE培養(yǎng)液的三角瓶，置于光照搖床中培養(yǎng)，培養(yǎng)至對數(shù)生長期即可用于毒性試驗[2]。

1.1.2 供試藥劑。50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（30∶20）可濕性粉劑，由湖南農(nóng)大海特農(nóng)化有限公司制備提供。

1.1.3 主要儀器設備。天平、溶解氧測定儀、溫度計、pH計、魚缸、量筒、天平、移液器、顯微鏡、高壓蒸汽滅菌鍋、光照搖床、血球計數(shù)板、玻璃器皿等。

1.2 試驗方法

1.2.1 魚類急性毒性試驗。試驗用水為經(jīng)活性炭過濾的自來水，試驗容器為15 L玻璃缸，試驗玻璃缸全部放入大水浴槽內(nèi)。每個試驗缸中配置10 L不同濃度的藥液，并投入斑馬魚10條，調(diào)節(jié)水浴溫度使水溫保持在（23±2）℃。endprint

試驗前按正式試驗條件預試，求出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對斑馬魚全部致死的最低濃度和全部存活的最高濃度。正式試驗在此濃度范圍內(nèi)，按級差設置5組不同濃度（2.00、2.40、2.88、3.46、4.15 mg/L）的藥液，另設一組空白對照（CK）。試驗采用每隔24 h更換一次藥液的半靜態(tài)法，定時測定各缸中試液的溶解氧pH值。試驗歷時96 h，連續(xù)觀察記錄24、48、72、96 h斑馬魚的中毒癥狀和死亡數(shù)，及時清除死魚。用概率統(tǒng)計法求出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對斑馬魚的半致死濃度LC50值[3-4]。

1.2.2 溞類急性活動抑制試驗。預試驗：以較大的濃度間距設3個濃度組，每個濃度放5只幼溞，于48 h時觀察溞類的運動情況，得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對溞類100%活動受抑制的最低濃度和全不抑制的最高濃度，以確定正式試驗的濃度范圍。

正式試驗：在預試驗所確定的濃度范圍內(nèi)，按一定時間確定5個試驗濃度（0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L），同時設不加藥劑的空白對照組。試驗時在100 mL燒杯中裝入50 mL不同濃度的50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液，每只燒杯放入5只幼溞，幼溞溞齡6～24 h，每個濃度設4次重復，于24、48 h觀察記錄活動受抑制的幼溞數(shù)。試驗期間不投餌料[5]。

參比物質(zhì)試驗：參比物質(zhì)為分析純重鉻酸鉀。按上述試驗步驟測定重鉻酸鉀對大型溞的24 h的EC50值。

1.2.3 藻類生長抑制試驗。預試驗：以較大的間距設5個濃度，以確定50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對于藻類毒性范圍。在250 mL三角瓶中加入100 mL含不同濃度50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液的SE培養(yǎng)液，再接種小球藻。置于光照搖床中培養(yǎng)，于0～72 h取樣，在顯微鏡下以血球計數(shù)板測定50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對藻類的毒性影響范圍[6]。

正式試驗：在預試驗確定的濃度范圍內(nèi)以一定的間距設5個濃度組（2、4、8、16、32 mg/L），并設空白對照組（CK），每組3次重復。按同樣的方法將50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑加入培養(yǎng)液，然后接種藻細胞，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每隔24 h測定各處理的藻細胞數(shù)（以血球計數(shù)板測定各處理組的藻密度值，每個培養(yǎng)液至少計數(shù)2次，求出平均值。如果2次計數(shù)結果相差較大，則應重復計數(shù)[3]），并計算各處理濃度下藻類生長抑制率，并據(jù)此計算72h的EC50值。測定試驗開始及試驗結束時的pH值。

2 結果與分析

2.1 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對斑馬魚的毒性

試驗過程中，試液溶解氧保持在（8.3±0.3）mg/L，pH值保持在7.5±0.2，空白對照組（CK）的斑馬魚全部生長正常，無一死亡。試驗斑馬魚接觸50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑試液以后，低濃度組的斑馬魚中毒癥狀不明顯；高濃度組的斑馬魚身體側倒，鰓充血，呼吸急促，全身抽搐，身體扭曲變形，尾部痙攣，在水中上下翻滾，呈難受狀態(tài)，身體失去平衡，腹部朝上，5 h后出現(xiàn)死亡。根據(jù)試驗藥液濃度和各組斑馬魚的死亡率得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對斑馬魚的LC50（96 h）為3.10 mg/L（表1）。

2.2 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對大型溞的毒性

試驗過程中，試液溶解氧保持在8.0 mg/L以上，pH值在7.5左右。空白對照組（CK）的大型溞全部生長正常，無一死亡。大型溞接觸50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑藥液后，各濃度組受試溞活動受到不同程度抑制，抑制溞個體脹大、體色發(fā)白、沉于水底。根據(jù)各處理組的藥液濃度及大型溞的死亡數(shù)，計算得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對大型溞的EC50（48 h）為0.45 mg/L（表2）。

2.3 50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對小球的藻毒性

由表3可知，試驗期間各處理pH值變化<1.5，滿足試驗要求。

根據(jù)各處理濃度及小球藻的生長抑制率（表4），計算得出50%烯酰嗎啉·嘧菌酯可濕性粉劑對小球藻的EC50（72 h）為6.56 mg/L。

2.4 毒性等級劃分

根據(jù)《化學農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則》，農(nóng)藥對魚類的毒性分為4個等級，即LC50（96 h）>10.0 mg/L、1.0

農(nóng)藥對溞類的毒性分為4個等級，EC50（45 h）>10.0 mg/L、1.0

農(nóng)藥對藻類的毒性分為3個等級，EC50（72 h）>3.0 mg/L為低毒，0.3

于低毒。

3 討論

本試驗是在實驗室條件下開展，未考慮田間實際施藥情況，如田間實際用藥量、施藥次數(shù)、多次累積效果、成分降解速率等，也未進行烯酰嗎啉和嘧菌酯對水生生物可能存在的慢性或長期毒性效應的研究。因此，田間使用時仍應注意控制使用劑量和劑型選擇等，盡量減小其對環(huán)境的危害。

4 參考文獻

[1] 吳聲敢，陳麗萍，王彥華，等.4種殺菌劑對水生生物的急性毒性與安全性評價[C]//成卓敏.糧食安全與植?？萍紕?chuàng)新.北京：中國農(nóng)業(yè)科學技術出版社，2009：788-793.

[2] 林琎，王開運，許輝，等.5種新型殺菌劑對4種魚的急性毒性和安全性評價[J].世界農(nóng)藥，2014，36（2）：34-38.

[3] 李祥英，梁慧君，何裕堅，等.5種殺菌劑對3種水生生物的急性毒性與安全性評價[J].廣東農(nóng)業(yè)科學，2014（16）：125.

[4] 黎鎮(zhèn)非，張瑞明，鐘長文，等.5種殺蟲劑對意大利蜜蜂的急性毒性試驗與安全性評價[J].農(nóng)藥，2017，56（4）：279-282.

[5] 徐建英，趙春桃，魏東斌.生物毒性檢測在水質(zhì)安全評價中的應用[J].環(huán)境科學，2014，35（10）：3991-3997.

[6] 胡玲玲，劉慧君，趙媛.農(nóng)藥對環(huán)境生物的安全性評價[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學，2008（7）：36-38.