2種微生物制劑防治效果比較試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法研究

李建慶+梅增霞

摘要 為了提高大學(xué)生創(chuàng)新能力和綜合素質(zhì)，針對(duì)園藝技術(shù)和設(shè)施農(nóng)業(yè)專業(yè)的大學(xué)生設(shè)計(jì)了綜合性試驗(yàn)“2種微生物制劑防治效果比較的試驗(yàn)設(shè)計(jì)”。該試驗(yàn)立足專業(yè)、結(jié)合地方特色，詳細(xì)記述了試驗(yàn)材料準(zhǔn)備、試驗(yàn)方法設(shè)計(jì)、試驗(yàn)結(jié)果觀察記錄與分析、試驗(yàn)結(jié)論總結(jié)，以期對(duì)培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力提供幫助。

關(guān)鍵詞 試驗(yàn)設(shè)計(jì)；蘇云金桿菌；球孢白僵菌；生物防治

中圖分類號(hào) S476+.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）02-0143-02

在“大眾創(chuàng)業(yè)，萬(wàn)眾創(chuàng)新”的時(shí)代背景下，高等學(xué)校尤其需要重視在校大學(xué)生創(chuàng)新能力的培養(yǎng)，對(duì)理工科學(xué)生而言，開展試驗(yàn)研究是提升自身創(chuàng)新能力的重要途徑。濱州學(xué)院作為一所地方綜合院校，以應(yīng)用型人才培養(yǎng)為主要目的，學(xué)校開設(shè)設(shè)施農(nóng)業(yè)、園藝技術(shù)等專業(yè)，筆者長(zhǎng)期承擔(dān)相關(guān)專業(yè)的植物保護(hù)學(xué)課程的講授任務(wù)，害蟲防治是植物保護(hù)學(xué)的重要內(nèi)容。筆者根據(jù)長(zhǎng)期教學(xué)經(jīng)驗(yàn)和地方特點(diǎn)設(shè)計(jì)了2種微生物制劑防治效果比較的綜合性試驗(yàn)，通過(guò)試驗(yàn)教學(xué)的實(shí)施，對(duì)學(xué)生創(chuàng)新能力的培養(yǎng)發(fā)揮了重要作用，有利于提高人才培養(yǎng)質(zhì)量。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則

1.1 立足專業(yè)

園藝技術(shù)和設(shè)施農(nóng)業(yè)專業(yè)的大學(xué)生將來(lái)走上專業(yè)相關(guān)工作崗位，遇到蔬菜或作物的病蟲害防治工作是必然的，在開展病蟲害防治工作時(shí)需樹立綠色環(huán)保的理念。生物防治技術(shù)綠色環(huán)保、可持續(xù)控制效果好，是當(dāng)前病蟲害防治中優(yōu)先考慮的途徑。因此，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)主要與害蟲生物防治相關(guān)，蘇云金桿菌和白僵菌是2種在生產(chǎn)中應(yīng)用非常廣泛的微生物制劑，本試驗(yàn)結(jié)合專業(yè)特點(diǎn)比較2種微生物制劑的防治效果，讓學(xué)生對(duì)最常見(jiàn)的這2種微生物制劑有直觀了解，將來(lái)在工作中可以選擇使用。

1.2 結(jié)合地方特色

微生物制劑防治對(duì)象的選取應(yīng)為地方危害較為嚴(yán)重的害蟲，濱州學(xué)院地處黃河三角洲腹地的濱州市，韭菜是當(dāng)?shù)厝嗣裣彩车膫鹘y(tǒng)蔬菜，韭蛆是危害韭菜的重要害蟲，故選其作為防治對(duì)象。韭蛆是韭菜遲眼蕈蚊（Bradysia odoriphaga Yang et Zhang）幼蟲的俗稱，隸屬雙翅目眼蕈蚊科。韭蛆取食范圍較廣，可為害百合科、菊科、葫蘆科、傘形科等7科30多種蔬菜，其中北方保護(hù)地的韭菜受害最重，其次為大蒜、洋蔥等蔥蒜類蔬菜。由于韭蛆地下危害、營(yíng)隱蔽生活及抗藥性等原因，常規(guī)殺蟲劑對(duì)其防治效果不理想，導(dǎo)致防治比較困難。生產(chǎn)中菜農(nóng)大量使用劇毒、高毒農(nóng)藥，造成韭菜的農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)和土壤環(huán)境污染，對(duì)韭菜食用安全構(gòu)成巨大威脅。利用微生物制劑開展韭蛆的生物防治試驗(yàn)并比較防治效果，對(duì)大學(xué)生解決地方實(shí)際問(wèn)題和動(dòng)手實(shí)踐能力的培養(yǎng)具有重要作用[1-2]。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

韭蛆采自山東省濱州市黃河灘區(qū)趙四勿村韭菜種植基地，挑選健康且大小一致的3齡幼蟲用于生測(cè)。蘇云金桿菌為山東富先達(dá)農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)（8 000 IU/mg，可濕性粉劑），球孢白僵菌菌種為生物工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

2.2 蘇云金桿菌生測(cè)方法

用蒸餾水將蘇云金桿菌稀釋成5個(gè)不同濃度，稀釋倍數(shù)分別為500倍、1 000倍、2 000倍、4 000倍和8 000倍。依據(jù)藥液濃度的不同設(shè)5個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，每次重復(fù)20頭試蟲，同時(shí)設(shè)清水對(duì)照一組。

用藥液將濾紙浸潤(rùn)后鋪在9 cm培養(yǎng)皿內(nèi)，將韭菜剪成2 cm小段，于不同濃度藥液中浸泡1 min，取6段浸泡后的韭菜莖段放入培養(yǎng)皿內(nèi)，然后用毛筆輕輕地移入試蟲。試驗(yàn)過(guò)程中保持培養(yǎng)皿內(nèi)濾紙濕潤(rùn)，根據(jù)取食情況每天及時(shí)補(bǔ)充浸過(guò)相應(yīng)濃度藥液的韭菜莖。

將培養(yǎng)皿置于（24±1）℃光照培養(yǎng)箱下培養(yǎng)，4、8、24、48 h后檢查結(jié)果，以毛筆輕觸蟲體，幼蟲不動(dòng)計(jì)為死亡。記錄死蟲數(shù)，最后計(jì)算死亡率[3]。

2.3 球孢白僵菌生測(cè)方法

2.3.1 球孢白僵菌孢子懸濁液母液的制備。將球孢白僵菌菌種接種于白僵菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基（蛋白胨10 g，麥芽汁40 g，酵母膏2 g，瓊脂粉20 g，加蒸餾水至1 000 ml，在121 ℃下高壓滅菌30 min），25 ℃培養(yǎng)，球孢白僵菌大量產(chǎn)生孢子后，將培養(yǎng)皿密封放入4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆肹4]。

取250 mL的燒杯1個(gè)，先加入蒸餾水100 mL，再加入吐溫-80 200 μL，刮取球孢白僵菌孢子粉溶入蒸餾水中，配成白僵菌孢子懸濁液母液，鏡檢檢測(cè)孢子濃度為2×109個(gè)/mL。

2.3.2 生測(cè)方法。將球孢白僵菌母液用水稀釋成5個(gè)不同孢子濃度，分別為2×109個(gè)/mL、1×109個(gè)/mL、0.5×109個(gè)/mL、0.2×109個(gè)/mL、0.1×109個(gè)/mL，處理后于1、2、4、6 d檢查結(jié)果。

依據(jù)球孢白僵菌母液稀釋倍數(shù)設(shè)5個(gè)處理，處理及對(duì)照設(shè)置試蟲的飼喂方法、試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)方法同2.2蘇云金桿菌的生測(cè)方法。

3 結(jié)果與分析

3.1 蘇云金桿菌的室內(nèi)防治效果

不同稀釋倍數(shù)蘇云金桿菌處理不同時(shí)間對(duì)韭蛆的室內(nèi)防治效果見(jiàn)表1?？梢钥闯?，蘇云金桿菌可在較短時(shí)間內(nèi)大量殺死韭蛆，致死率高，速效性強(qiáng)，是防治韭蛆較好的生物試劑。蘇云金桿菌稀釋倍數(shù)越低對(duì)韭蛆的致死率越高，死亡數(shù)量越多，致死時(shí)間越短，稀釋500倍4 h后韭蛆死亡率可達(dá)96.67%；稀釋1 000倍8 h后韭蛆死亡率可達(dá)91.67%；稀釋2 000倍24 h后死亡率達(dá)100%。處理時(shí)間越短，不同稀釋倍數(shù)處理間幼蟲死亡數(shù)量差異越大，處理4 h稀釋500倍韭蛆接近全部死亡，稀釋4 000倍和8 000倍則零死亡；隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)，各不同稀釋倍數(shù)處理韭蛆死亡數(shù)量的差異逐步縮小，處理24 h后差異明顯縮小，處理48 h后接近一致，韭蛆全部死亡和接近全部死亡。

根據(jù)不同稀釋倍數(shù)和不同處理時(shí)間的差異性分析，可知蘇云金桿菌處理4 h后，稀釋500倍韭蛆的平均死亡率明顯高于其他4個(gè)處理（在5%水平上差異顯著），表明蘇云金桿菌在稀釋500倍時(shí)速效性好；處理8 h后，稀釋500倍和1 000倍處理韭蛆的平均死亡率明顯高于稀釋2 000倍、4 000倍和8 000倍的3個(gè)處理（在5%水平上差異顯著），稀釋2 000倍處理韭蛆平均死亡率明顯高于稀釋4 000倍和8 000倍（在5%水平上差異顯著）。因此，蘇云金桿菌稀釋2 000倍防治韭蛆具有較好的經(jīng)濟(jì)性和高效性。endprint

3.2 球孢白僵菌對(duì)韭蛆的防治效果

不同孢子濃度球孢白僵菌處理不同時(shí)間對(duì)韭蛆的室內(nèi)防治效果見(jiàn)表2?？梢钥闯?，球孢白僵菌孢子濃度越高、處理時(shí)間越長(zhǎng)，防治效果越好。處理6 d后，孢子濃度為2×109個(gè)/mL的球孢白僵菌防治效果最好，韭蛆平均死亡率為28.33%，較其他4個(gè)孢子濃度處理防治效果差異顯著；0.1×109個(gè)/mL孢子濃度處理韭蛆死亡率最低，為1.67%，0.2×109個(gè)/mL孢子濃度處理韭蛆死亡率為6.67%，二者差異不顯著，表明這2個(gè)濃度處理對(duì)韭蛆基本無(wú)防治效果。

球孢白僵菌對(duì)韭蛆的致死時(shí)間較長(zhǎng)，5個(gè)孢子濃度處理1 d后均無(wú)韭蛆死亡，處理2 d后2×109個(gè)/mL、1×109個(gè)/mL孢子濃度處理也僅是少量死亡，韭蛆死亡率分別為3.33%和1.67%。隨處理時(shí)間的加長(zhǎng)，不同孢子濃度處理韭蛆死亡數(shù)量逐步增加，前期增長(zhǎng)緩慢，后期增速加快，處理4 d后不同處理的死亡數(shù)量快速增長(zhǎng)，6 d 后不同處理均有一定數(shù)量韭蛆死亡，且死亡數(shù)量明顯增多。

3.3 蘇云金桿菌和球孢白僵菌對(duì)韭蛆防治效果比較

通過(guò)比較蘇云金桿菌和球孢白僵菌對(duì)韭蛆的防治效果，可知蘇云金桿菌對(duì)韭蛆的防治效果明顯高于球孢白僵菌。另外，蘇云金桿菌速效性強(qiáng)，球孢白僵菌速效性差，藥效生效慢。

綜合分析可得出如下結(jié)論：蘇云金桿菌2 000倍液田間應(yīng)用具有較好的前景，而2×109個(gè)/mL孢子濃度球孢白僵菌則無(wú)田間應(yīng)用前景。

4 實(shí)施效果分析

本試驗(yàn)是一個(gè)綜合性試驗(yàn)，需要學(xué)生全面掌握細(xì)菌、真菌等微生物特性、微生物制劑的使用方法，還需掌握害蟲韭蛆的生物學(xué)習(xí)性、蘇云金桿菌和球孢白僵菌的生測(cè)方法以及防治效果的比較和統(tǒng)計(jì)等知識(shí)，是對(duì)學(xué)生所學(xué)專業(yè)知識(shí)的一次全面檢驗(yàn)，對(duì)培養(yǎng)學(xué)生綜合考慮問(wèn)題、解決實(shí)際問(wèn)題能力的培養(yǎng)有重要作用，可全面提高學(xué)生的綜合素質(zhì)和創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)能力[5-6]。

5 參考文獻(xiàn)

[1] 梅增霞，吳青君，張友軍，等.韭菜遲眼蕈蚊的生物學(xué)、生態(tài)學(xué)及其防治[J].昆蟲知識(shí)，2003，40（5）：396-398.

[2] 馮惠琴，鄭方強(qiáng).韭蛆發(fā)生規(guī)律及防治研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，18（1）：71-81.

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