兩種方法檢測(cè)兒童肺炎支原體感染結(jié)果的對(duì)比分析

鄭琦 李悅 王大利 譚月弘 譚瀟漪 王宏宇

[摘要]目的 比較不同年齡階段兒童肺炎支原體IgM和DNA檢驗(yàn)結(jié)果，探討兩種檢測(cè)方法對(duì)兒童肺炎支原體感染診斷的意義。方法 選取2015年3月～2017年3月在我院呼吸內(nèi)科住院的514例支氣管肺炎患兒，同時(shí)采用血清學(xué)方法和PCR法檢測(cè)患兒的肺炎支原體感染情況，根據(jù)不同年齡段進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 514例患兒MP-DNA的陽性率為27.6%，MP-IgM的陽性率為29.4%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。嬰幼兒時(shí)期MP-IgM的陽性檢出率明顯高于MP-DNA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.12，P<0.01）。兒童肺炎支原體感染IgM和DNA陽性總符合率為27.9%，其中7～18歲符合率最高為38.9%。結(jié)論 MP-IgM和MP-DNA兩種檢測(cè)方法的總陽性率結(jié)果并無差別，而不同年齡段的陽性率分布有差異。對(duì)于<3歲的兒童宜采用血清學(xué)法和PCR法聯(lián)合檢測(cè)，以提高診斷率。

[關(guān)鍵詞]肺炎支原體；IgM抗體；DNA；年齡；兒童

[中圖分類號(hào)] R563.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）12（c）-0140-03

[Abstract] Objective To compare the results of Mycoplasma pneumonia IgM antibody and DNA test from different age children， and to explore its application value in diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. Methods A total of 514 cases of bronchial pneumonia children hospitalized in the department of respiration internal medicine from March 2015 to March 2017 were included， serological method and PCR were used to detect children with Mycoplasma pneumoniae infection. Meanwhile datas were analyzed according to different age groups. Results The positive rate of MP-DNA with 514 patients was 27.6%， the positive rate of MP-IgM was 29.4% and the differences were no statistically significant （P>0.05）. The positive detection rate of MP-IgM was significantly higher than that in the MP-DNA in fancy， and the difference was statistically significant （χ2=8.12， P<0.01）. The positive consistency rate of MP-IgM and MP-DNA was 27.9%， with 7-18 year-olds the highest up to 38.9%. Conclusion The positive rate of MP-IgM and MP- DNA are no significant difference， but the distributions of different age are varied. For<3 year-olds children， combine detection method of MP-IgM and MP-DNA can improve the diagnostic rates.

[Key words] Mycoplasma pneumonia； IgM antibody； DNA； Age； Children

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，引發(fā)的呼吸道感染臨床表現(xiàn)多種多樣，且多不典型，易被誤診而延誤治療。目前檢測(cè)MP抗體的血清學(xué)法和核酸的PCR法是診斷MP感染最常用的實(shí)驗(yàn)室方法，由于方法學(xué)的差異，同一患兒這兩種指標(biāo)并不總是完全一致[1]，這就給臨床診斷帶來困擾。本研究通過收集同一患兒MP-IgM和MP-DNA的測(cè)定結(jié)果，對(duì)比分析兩種方法陽性檢出率的分布特征及在不同年齡段其陽性結(jié)果的一致性，協(xié)助臨床選用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法及時(shí)、準(zhǔn)確地診斷兒童MP感染。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3月～2017年3月在我院呼吸內(nèi)科住院的514例支氣管肺炎患兒，其中男268例，女246例；年齡為4個(gè)月～18歲，平均（7.5±2.6）歲。所有患兒入院后即采集鼻咽拭子標(biāo)本，48 h內(nèi)冷鏈運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR法檢測(cè)，同時(shí)留取2 ml血清進(jìn)行MP-IgM抗體檢測(cè)。

1.2儀器與試劑

MP抗體檢測(cè)試劑盒購自日本富士瑞必歐株式會(huì)社；MP核酸定量檢測(cè)試劑由湖南圣湘生物科技有限公司提供，同時(shí)使用瑞士Roche Cobas z 480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3血清學(xué)方法檢測(cè)MP-IgM

賽樂迪亞R-麥可Ⅱ檢測(cè)試劑盒采用被動(dòng)凝集法，通過MP細(xì)胞膜成分（Mac株）致敏的人工明膠粒子與血清中的MP抗體發(fā)生凝集反應(yīng)測(cè)定抗體，檢測(cè)按照說明書進(jìn)行，結(jié)果以抗體滴度≥1∶40判斷為陽性。

1.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)MP-DNA

MP-DNA按照說明書無菌提取，PCR擴(kuò)增反應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序在Roche Cobas z 480儀器上進(jìn)行，根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定閾值循環(huán)數(shù)（Ct）值，Ct值>40為陰性；Ct值≤38為陽性；Ct值為38～40需進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢后Ct值仍為38～40報(bào)告為陰性。每次試驗(yàn)均設(shè)陽、陰性對(duì)照。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，兩種檢測(cè)方法結(jié)果一致性比較、不同年齡組間檢測(cè)陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 MP-IgM和MP-DNA陽性檢出率的比較

血清學(xué)方法和PCR法的MP陽性率分別為29.4%（151/514）、27.6%（142/514），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.39，P>0.05）。不同年齡段兩種方法的陽性檢出情況比較，結(jié)果顯示嬰幼兒時(shí)期的MP-IgM陽性檢出率明顯高于MP-DNA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.12，P<0.01）；而學(xué)齡前與學(xué)齡期MP-IgM和MP-DNA的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2不同年齡MP-IgM和MP-DNA檢測(cè)陽性率一致性的比較

514例呼吸道感染患兒MP-IgM和MP-DNA初查結(jié)果中，陽性結(jié)果為229例，兩指標(biāo)陽性結(jié)果的總符合率為27.9%，7～18歲符合率最高為38.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.54，P<0.01）。在兩者不一致的結(jié)果中，IgM陽性/DNA陰性的比率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但在<3歲組中，IgM陽性/DNA陰性的比率（59.3%）明顯高于IgM陰性/DNA陽性的比率（22.0%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.71，P<0.01）；在學(xué)齡期組中，IgM陽性/DNA陰性的比率（19.4%）則明顯低于IgM陰性/DNA陽性的比率（41.7%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.63，P<0.01）（表2）。

3討論

MP是一種介于病毒和細(xì)菌之間的無細(xì)胞壁型微生物，其所引起的肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）占所有社區(qū)獲得性肺炎的比例高達(dá)40%[2-3]，而其體積極小，極易通過飛沫傳播在兒童中引起暴發(fā)流行。由于大部分MP感染患兒的臨床表現(xiàn)不典型，缺乏特異影像學(xué)改變[4]，因此很難將其與病毒或細(xì)菌引起的感染相區(qū)別，而對(duì)MP感染的治療不同于其他病原體，因此早期確診，對(duì)MP感染患兒的治療及預(yù)后極為重要。

目前實(shí)驗(yàn)室診斷MP的方法主要有培養(yǎng)法、血清學(xué)法和PCR法，其中支原體培養(yǎng)仍是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其培養(yǎng)時(shí)間長、操作復(fù)雜、陽性率低，在臨床上并不適于常規(guī)檢查以及快速檢測(cè)[5]。我院針對(duì)早期MP感染主要使用檢測(cè)抗體的血清學(xué)方法和檢測(cè)抗原的PCR法，血清學(xué)采用的日本富士MP檢測(cè)試劑盒技術(shù)成熟，成本較低，陽性率較高，但其特異性低，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果[6]；PCR法靈敏度基本優(yōu)于所有傳統(tǒng)的MP檢測(cè)方法，臨床逐漸將其視為MP檢測(cè)的“新金標(biāo)準(zhǔn)”[7]，但如實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控不嚴(yán)，易出現(xiàn)污染導(dǎo)致PCR假陽性[8]。

本研究通過收集同一患兒MP-IgM和MP-DNA的測(cè)定結(jié)果，總檢測(cè)陽性率分別為29.4%和27.6%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與齊振勇等[9]的研究結(jié)果一致。從檢驗(yàn)結(jié)果的陽性率分布特點(diǎn)看，MP-IgM和MP-DNA陽性率在不同年齡段有所差異，MP-IgM陽性率在4～6歲和7～18歲水平相對(duì)較高，<3歲陽性檢出率較低，而MP-DNA陽性率在7～18歲最高，4～6歲其次，<3歲最低。雖然目前認(rèn)為由于嬰幼兒和學(xué)齡前兒童抵抗力弱，是感染MP的高發(fā)年齡[10]，但檢出結(jié)果提示由于嬰幼兒自身免疫免疫應(yīng)答水平低，MP-IgM的檢出率并不高，這與趙巖等[11]的結(jié)論是一致的，可能是在MP感染初期不產(chǎn)生MP-IgM或者效價(jià)較低不易檢出[10]；而3歲以下兒童MP-IgM陽性率高于MP-DNA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮可能與本研究樣本類型的采集質(zhì)量有關(guān)，年齡較小的患者在采集鼻咽拭子時(shí)多伴哭鬧不配合，標(biāo)本的病毒采集量直接影響MP-DNA的結(jié)果，同時(shí)就診前抗生素的應(yīng)用也可使MP-DNA檢測(cè)呈陰性結(jié)果，此時(shí)即可出現(xiàn)MP-IgM陽性率高于MP-DNA，所以在臨床對(duì)3歲以下兒童診斷MP感染選擇檢測(cè)MP-DNA時(shí)一方面要根據(jù)個(gè)體用藥等情況選擇合適的樣本類型，并保證樣本質(zhì)量度。分析不同年齡兩者結(jié)果陽性率的一致性，顯示陽性結(jié)果共229例，兩指標(biāo)陽性結(jié)果總符合率為27.9%，以7～18歲符合率最高；在兩者不一致的結(jié)果中，IgM陽性/DNA陰性主要集中在嬰幼兒時(shí)期，DNA陽性/IgM陰性主要發(fā)生在7～18歲。結(jié)果不一致往往提示兩種方法存在假陰性跟假陽性結(jié)果，嬰幼兒時(shí)期出現(xiàn)高IgM陽性/DNA陰性比例的原因前面已經(jīng)提到，而7～18歲的兒童DNA陽性/IgM陰性比例增高主要由于MP-DNA的陽性檢出率相對(duì)較高，該年齡段兒童對(duì)疾病有一定的抵抗力，猜測(cè)可能與MP的攜帶有關(guān)[12]，目前對(duì)MP在呼吸道的攜帶狀況尚沒有一個(gè)確切的域值以區(qū)分其在呼吸道的攜帶與感染[13]，因此MP-DNA陽性結(jié)果的指示意義不大。

綜上所述，通過對(duì)比分析血清學(xué)法和PCR法的陽性檢出結(jié)果，指導(dǎo)臨床針對(duì)不同年齡選用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用兩種方法用于早期檢測(cè)[14-15]，有利于疾病的診斷，能夠規(guī)避漏檢及假陽性結(jié)果，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

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