鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測試劑盒質(zhì)量研究

◎ 趙才敏，李 濤，蔣 麗，楊昌彪，李 莎，汪 勛，曹虎靈

（1.畢節(jié)市食品藥品稽查局，貴州 畢節(jié) 551700；2.貴州省流通環(huán)節(jié)食品安全檢驗(yàn)中心，貴州 貴陽 550000；3.貴州省分析測試研究院，貴州 貴陽 550000；4.畢節(jié)市食品藥品檢測所，貴州 畢節(jié) 551700）

Zhao Caimin1， Li Tao2， Jiang Li1， Yang Changbiao3， Li Sha4， Wang Xun4， Cao Huling4

(1.Bijie Food and Drug Inspectorate， Bijie 551700， China；2.Guizhou Food Safety Inspection Center for Circulation， GuiYang 550000， China；3.Guizhou Provincial Institute of Analysis and Testing， GuiYang 550000， China；4.Bijie Food and Drug Testing Institute， Bijie 551700， China)

鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CLB），俗名瘦肉精，屬于β-腎上腺受體興奮劑[1]，因其能加強(qiáng)脂肪分解促進(jìn)蛋白質(zhì)合成加快畜禽增長速度[2]，曾被用做養(yǎng)殖促進(jìn)劑[3]，對人體有蓄積性毒性，臨床中毒表現(xiàn)為心動(dòng)過速、低血鉀、肌肉震顫等，我國已于1997年嚴(yán)令禁止使用[4]。本研究選取3種市售同批次鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒（D、M、A），引入金標(biāo)讀數(shù)儀作為儀器確證[5-6]，對其最小檢出濃度、特異性、假陽性率、假陰性率等方面進(jìn)行研究[7-9]，通過分析3種市售同批次鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測產(chǎn)品（試劑盒）對鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液和陰性豬肉加標(biāo)樣本的快速檢測結(jié)果，比較3種市售鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒的質(zhì)量，篩選出質(zhì)量優(yōu)異的鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒，用于畜禽肉屠宰點(diǎn)和農(nóng)貿(mào)市場豬肉中的鹽酸克倫特羅檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

天平（感量0.01 g、0.000 1 g），恒溫水浴鍋，15 mL離心管，移液槍（量程1 000μL、200 μL），智云達(dá)CGT-3100膠體金讀卡儀，安捷倫高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀[配有電噴霧離子源（ESI）]，計(jì)時(shí)器，室溫溫度計(jì)，臺式低速離心機(jī)，超低溫冰柜，智云達(dá)CGT-3100膠體金讀卡儀，鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒：品牌D檢出限0.5 ng·g-1，品牌M檢出限 3 ng·g-1，品牌 A 檢出限 3 ng·g-1。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 陰性樣品制備

取經(jīng)GB/T 22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》檢測鹽酸克倫特羅未檢出的陰性豬肉樣品，去皮去脂肪，粉碎，冷凍保存待用。

1.2.2 鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及檢測

用烘干冷卻的干凈燒杯稱取鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，超純水稀釋定容，配制成鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液系列梯度[10]，用安捷倫高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀按照GB/T 22286-2008方法測定（平行測定3次），同時(shí)用D、M、A 3種鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測卡進(jìn)行檢測（平行測定6次），記錄結(jié)果后立即用金標(biāo)讀數(shù)儀對3種檢測卡進(jìn)行檢測。

1.2.3 陰性豬肉樣品加標(biāo)檢測

按照快檢產(chǎn)品說明書，隨機(jī)選取陰性豬肉樣品12批次，按照3種試劑盒產(chǎn)品說明書稱樣于15 mL離心管中，每批次豬肉按照每個(gè)產(chǎn)品說明書稱樣4個(gè)，分為D，M、A 3組，共144個(gè)樣品，加入一定量事先配制好的鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液（超純水介質(zhì)），使樣品中所含標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為快檢產(chǎn)品檢出限的0倍、0.5倍、1倍、2倍，按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行樣品前處理，檢測卡檢測并記錄后，立即用金標(biāo)讀數(shù)儀對檢測卡進(jìn)行檢測（經(jīng)檢測卡檢測肉眼判定為無效反應(yīng)時(shí)，不進(jìn)行金標(biāo)讀數(shù)儀檢測，每張檢測卡金標(biāo)儀平行檢測2次）。

1.2.4 D產(chǎn)品空白檢測

對3種試劑盒中檢出限最小的D產(chǎn)品進(jìn)行陰性空白標(biāo)準(zhǔn)溶液（純水）和陰性空白豬肉檢測，按照D產(chǎn)品的產(chǎn)品說明書進(jìn)行樣品前處理后檢測卡檢測，記錄數(shù)據(jù)后立即用金標(biāo)讀數(shù)儀對檢測卡進(jìn)行檢測（每張檢測卡金標(biāo)儀平行檢測2次）。

2 檢測結(jié)果

2.1 鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測結(jié)果

3種鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測卡測定結(jié)果和金標(biāo)讀數(shù)儀測定結(jié)果見表1和表2。為了避免肉眼對檢測結(jié)果的判讀所帶來的主觀誤差，故使用金標(biāo)讀數(shù)儀對檢測卡上T線、C線進(jìn)行光度檢測以確證。

表1 鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液測定結(jié)果判定表（根據(jù)產(chǎn)品說明書肉眼判定）

表2 鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液測定結(jié)果判定表（根據(jù)金標(biāo)讀數(shù)儀判定）

2.2 陰性豬肉樣品加標(biāo)樣測定結(jié)果

12批次陰性豬肉樣品加標(biāo)檢測結(jié)果見表3。

表3 12批次陰性豬肉樣品加標(biāo)檢測結(jié)果表

2.3 D產(chǎn)品空白檢測結(jié)果

D產(chǎn)品檢測空白鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液陰性檢出率100%，假陽性率0%；D產(chǎn)品對20批次陰性豬肉樣品進(jìn)行檢測，陰性檢出率100%，假陽性率0%。金標(biāo)讀數(shù)儀檢測結(jié)果與D產(chǎn)品檢測卡肉眼判定結(jié)果100%一致。

3 分析與討論

豬肉檢測結(jié)果的假陰性率是由0.5倍檢出限、1倍檢出限、2倍檢出限檢出陰性結(jié)果占總陽性檢品的百分比表示，鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)檢測溶液的假陰性率是由最小檢出濃度的陰性檢出率表示，無效反應(yīng)不計(jì)入總數(shù)只用于計(jì)算無效反應(yīng)發(fā)生率，假陰性率+陽性檢出率=1，檢出陰性結(jié)果的陰性樣品數(shù)占總陰性樣品數(shù)的百分比即為特異性即陰性檢出率，最小檢出濃度即鹽酸克倫特羅快速檢測產(chǎn)品檢出陽性的最小濃度。對鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液測定結(jié)果和陰性豬肉加標(biāo)樣測定結(jié)果進(jìn)行分析比較，結(jié)果見表4。

表4 鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測產(chǎn)品性能分析表

3.1 比較3種鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析產(chǎn)品性能

如不考慮最小檢出濃度，D和M產(chǎn)品的檢測卡各項(xiàng)指標(biāo)都最優(yōu)，若考慮最小檢出濃度，則D產(chǎn)品檢測卡最優(yōu)，其檢出限與GB/T 22286-2008方法檢出限都是0.5 μg·kg-1，用于檢測禁用物質(zhì)鹽酸克倫特羅最科學(xué)合理。

3.2 3種鹽酸克倫特羅檢測產(chǎn)品在豬肉中的應(yīng)用

?

比較特異性、陽性檢出率、假陽性率、陰性檢出率、假陰性率可知，M鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析產(chǎn)品的綜合性能最優(yōu)。

3.3 金標(biāo)讀數(shù)儀的輔助使用

金標(biāo)讀數(shù)儀的輔助使用，降低了M、A檢測卡的最小檢出濃度，但卻提高了產(chǎn)品D的最小檢出濃度。主要原因是D、M、A對檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)不同：M、A產(chǎn)品陽性判定標(biāo)準(zhǔn)是消線法，即檢測線T線不顯色，質(zhì)控線C顯色；D產(chǎn)品陽性判定標(biāo)準(zhǔn)是比色法，T比C色淺或T不顯色。在實(shí)驗(yàn)中，M、A檢測卡鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液或者陰性豬肉加標(biāo)樣均有出現(xiàn)反應(yīng)T比C色淺的情形，因此使用消線法來進(jìn)行結(jié)果判定不符合實(shí)際情況和使用需要。

實(shí)驗(yàn)說明，M、A的產(chǎn)品檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)沒有D產(chǎn)品的判定標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)異，金標(biāo)讀數(shù)儀的使用可以降低M、A的最小檢出濃度，可以避免D產(chǎn)品檢測出現(xiàn)假陽性。

3.4 3種產(chǎn)品在鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液和豬肉樣品中的檢測結(jié)果

分析陽性檢出率和無效反應(yīng)發(fā)生率可知，豬肉樣品基質(zhì)對實(shí)驗(yàn)存在一定的影響。