HPLC法測定蒲公英顆粒中咖啡酸、阿魏酸的含量

張俊偉,張 斌,唐樅貴,楊 瑩,謝麗娜,董樹國

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,吉林 吉林 132013)

蒲公英顆粒是由蒲公英加輔料蔗糖制成的顆粒劑，具有清熱解毒的功能，常用于治療上呼吸道感染、急性扁桃腺炎、乳腺炎、癤腫等。蒲公英中含有黃酮、皂苷、有機(jī)酸等多種活性成分[1-2]，其中的一些重要有機(jī)酸成分如咖啡酸和綠原酸具有抑菌作用，阿魏酸具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化的作用[3-4]。因此建立蒲公英顆粒中的咖啡酸與阿魏酸的含量測定方法對于確保藥物的安全性和有效性、提高藥物質(zhì)量是十分重要的。目前，蒲公英顆粒中酚酸的測定主要集中于咖啡酸與綠原酸[5-6]，本實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜同時測定蒲公英顆粒中咖啡酸和阿魏酸的含量，為建立快速準(zhǔn)確測定蒲公英顆粒中的咖啡酸與阿魏酸提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-20AT高效液相色譜儀器(日本島津公司,包括LC-20AT溶劑輸送泵、SPD-20A紫外-可見檢測器、N2000在線色譜工作站)。

咖啡酸對照品批號為C10058305,阿魏酸對照品批號為C100577473；蒲公英顆粒(購自吉林市吉林大藥房)。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取蒲公英顆粒樣品1袋，研細(xì)，精密稱取粉末1 g，置于50 mL錐形瓶中加入pH=2.3的甲醇-磷酸溶液20 mL，搖勻，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，以pH=2.3甲醇-磷酸溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，離心15 min后取上清液，濾過置于容量瓶中即得供試溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱(150 mm×4.6 mm 5 μm)，流動相:甲醇-磷酸鹽緩沖液(25∶75，pH 2.3)，檢測波長323 nm，進(jìn)樣量20 μL，流動相流速0.8 mL/min。

2.3陰性干擾實(shí)驗(yàn)

按照參考文獻(xiàn)[6]配制陰性干擾樣品，在方法2.2的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，并與咖啡酸、阿魏酸、供試樣品的色譜圖比較，在陰性對照品溶液的色譜圖上未見咖啡酸與阿魏酸的色譜峰，表明樣品中的其他成分對測定沒有干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取濃度為0.10 g/L的咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g/L的咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密量取0.1 g/L的阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1、3、5、7、9 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.01、0.03、0.05、0.07、0.09 g/L的阿魏酸溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分別對咖啡酸、阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，得到咖啡酸和阿魏酸的線性回歸方程為

咖啡酸：Y=373X+3.2,R=0.999 7

阿魏酸:Y=272.1X+0.072,R=0.999 5

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明咖啡酸在0.02～0.10 g/L圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，阿魏酸在0.01～0.09 g/L圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密吸取咖啡酸、阿魏酸對照品溶液，在2.2的色譜條件下，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，根據(jù)咖啡酸，阿魏酸色譜峰的峰面積評價精密度，咖啡酸的峰面積的RSD為0.44%、阿魏酸的RSD為0.47%(n=6)。結(jié)果表明該方法測定蒲公英顆粒中咖啡酸、阿魏酸的精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液，按照0、1、2、3、4、5 h間隔進(jìn)樣，在2.2的色譜條件下進(jìn)行分析，測得咖啡酸的峰面積的RSD為1.77%，阿魏酸的峰面積的RSD為1.91%，結(jié)果表明供試品溶液在5 h之內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批的蒲公英顆粒樣品5份，按照2.2的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析，利用峰面積考察方法的重復(fù)性，咖啡酸的含量的RSD為0.45%,阿魏酸的含量的RSD為0.676%，結(jié)果說明使用該方法測定蒲公英顆粒中咖啡酸、阿魏酸的重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率

取蒲公英顆粒樣品批號為6份，按照低、中、高濃度分別準(zhǔn)確加入咖啡酸與阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果咖啡酸平均回收率99.26%,RSD為1.74%;阿魏酸平均回收率98.34%,RSD為0.99%,因此所建立的高效液相測定蒲公英顆粒方法的在回收率上符合測定要求。

2.9 樣品的測定

取3個不同批次樣品利用所選擇的色譜條件進(jìn)行測定，每個樣品測定6次，樣品中咖啡酸的含量分別為0.123、0.134、0.129 mg/g，RSD分別為1.21%、1.45%、1.09%；阿魏酸的含量分別為0.085、0.786、0.824mg/g，RSD分別為1.32%、1.67%、1.04%。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)以甲醇-磷酸鹽緩沖液(25∶75，pH 2.3)作為流動相進(jìn)行對蒲公英顆粒中的咖啡酸與阿魏酸含量進(jìn)行測定，在所確定的實(shí)驗(yàn)條下，所建立的蒲公英顆粒中咖啡酸、阿魏酸的高效液相色譜分析方法具有較好的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性?？Х人岬钠骄厥章蕿?9.26%，RSD為1.74%；阿魏酸的平均回收率為98.34%，RSD為0.99%。高效液相色譜法適用于蒲公英顆粒中咖啡酸與阿魏酸的含量測定。

[1] 屠國昌.蒲公英化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用[J].海峽醫(yī)藥，2012，24(5)：33-35.

[2] 劉華清，王天麟.蒲公英水溶性化學(xué)成分研究[J].中藥材,2014，37(6)：989-991.

[3] 路保通，張鴦，胡新安，等.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用[J].中國獸醫(yī)雜志,2008，44(5)：45-56.

[4] 侯京玲，周霄楠，趙興全，等.幾種蒲公英成分的提取及體外抑菌效果試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志,2016,52(12):53-55.

[5] 張宇靖.HPLC法測定蒲公英顆粒中咖啡酸的含量[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(22):114-115.

[6] 柯薇.HPLC法測定蒲公英顆粒中咖啡酸含量[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2009,16(9):5-6.