環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)禽流感病毒

商曉桂，韓志玲，閆聰，楊波，范秀麗，郝鵬，張貴剛，陳九連，劉國(guó)英

（金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特 010030）

0 引言

進(jìn)入21世紀(jì)，我國(guó)醫(yī)療水平得到快速的發(fā)展，特別是在一些傳染速度較快的流感病毒中，我國(guó)醫(yī)療技術(shù)發(fā)展更是得到相關(guān)部門的高度重視。禽流感病毒是一種非常常見(jiàn)的病毒，并且對(duì)于身體健康的影響非常嚴(yán)重，許多人對(duì)于禽流感病毒的檢測(cè)非常重視。通過(guò)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)禽流感病毒做出相關(guān)的分析，提高我國(guó)禽流感病毒的控制和檢測(cè)準(zhǔn)確度。

1 禽流感病毒簡(jiǎn)介

禽流感病毒是一種非常常見(jiàn)的病毒，它是由A型流感病毒引起的一種禽類感染病毒，這種病毒不僅會(huì)在家禽內(nèi)部進(jìn)行傳染，也可以感染人類。我國(guó)家畜家禽防疫條例將這種禽流感設(shè)立為動(dòng)物疾病，對(duì)于禽流感的控制有非常重要的公共衛(wèi)生意義，這種疾病也被列為肉類食品安全的風(fēng)險(xiǎn)因素，在世界范圍內(nèi)受到廣泛關(guān)注。高致病性禽流感病毒的致病力非常強(qiáng)，并且如果感染禽流感，死亡率極高，人一旦感染禽流感，死亡率達(dá)到60%以上，家禽感染禽流感死亡率達(dá)到100%。

1997年，我國(guó)在香港首次發(fā)現(xiàn)禽流感病例，并且禽流感病毒可以直接感染人。2003年底禽流感病毒已在16個(gè)國(guó)家造成人類死亡，它不僅給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，也嚴(yán)重影響人類的身體健康，禽流感病毒利用咽部以上的呼吸道以及消化道的感染途徑，通過(guò)動(dòng)物特別是病死的家禽對(duì)人類進(jìn)行傳染。低致病性禽流感病毒，雖然沒(méi)有高致病性禽流感病毒死亡率高，但是它的分布范圍比高致病性的禽流感病毒范圍廣泛，并且這種禽流感病毒對(duì)人的危害十分持久，目前低致病性的禽流感病毒難以控制，這種禽流感病毒大多在每年11月至次年3、4月進(jìn)行傳播，并且傳播速度十分迅速，如果大型養(yǎng)雞場(chǎng)受到禽流感病毒的感染，則很難徹底清除掉。

禽流感病毒也在很大程度上影響我國(guó)食品的安全，因?yàn)榍萘鞲胁《究梢酝ㄟ^(guò)食品對(duì)人類進(jìn)行傳染，而食品安全中一個(gè)非常重要的影響因素是在家禽進(jìn)行生產(chǎn)和飼養(yǎng)中，很有可能通過(guò)家禽體內(nèi)的病毒傳播給人類，進(jìn)而引起人類患禽流感，甚至導(dǎo)致人類死亡。自2012年，越南已有14個(gè)省爆發(fā)禽流感病，有6.5萬(wàn)只雞、鴨出現(xiàn)死亡，同時(shí)有4人感染禽流感病毒，其中3人病情十分嚴(yán)重。2012年，我國(guó)感染禽流感病毒人數(shù)已超過(guò)50萬(wàn)人，其中有1 300多人死亡，禽流感對(duì)人體健康的危害理應(yīng)受到重視。

2 環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)禽流感病毒的檢測(cè)

2.1 檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

對(duì)于中國(guó)地區(qū)的發(fā)展，禽流感有非常廣泛的流行性以及重要的公共衛(wèi)生意義，因此，需要一個(gè)較為有效的方法對(duì)禽流感病毒進(jìn)行檢測(cè)，而環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)方便、快捷。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)需要針對(duì)不同的病毒進(jìn)行分別測(cè)試，如血凝性試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等。熒光RT-PCR在進(jìn)行禽流感的檢測(cè)中，相對(duì)于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法更加快捷、迅速，但是需要較為專業(yè)的儀器作為輔助，這使檢測(cè)成本極大地提高，并且許多實(shí)驗(yàn)室由于沒(méi)有較為專業(yè)的儀器，難以進(jìn)行專業(yè)的檢測(cè)，屬于一種難以推廣的方法[1]。

環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)仍然是一種十分理想的檢測(cè)方法，這項(xiàng)技術(shù)在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，主要依據(jù)新型的恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，通過(guò)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)出4種不同的特征引物，利用這些引物中的DNA聚合酶，在等溫的條件下進(jìn)行工作，使瓊脂糖凝膠出現(xiàn)階梯狀的條帶，另外，因?yàn)樘厥獾臒晒獠牧峡梢耘c反應(yīng)體系進(jìn)行結(jié)合，使陽(yáng)性的結(jié)果產(chǎn)生出人眼可以分辨出的熒光綠色，這種方法也能滿足工作的需要，使工作更加方便、快捷。

此外，通過(guò)實(shí)時(shí)的渾濁度檢測(cè)，可以判定出擴(kuò)張的結(jié)果，如果渾濁度大于等于0.1，結(jié)果表現(xiàn)陽(yáng)性。這種方法相對(duì)于其他方法靈敏度更高，并且具有特異性強(qiáng)、快速和便捷的特點(diǎn)。在進(jìn)行工作時(shí)不需要開(kāi)蓋就可以一步完成，在很大程度上避免了氣溶膠對(duì)其產(chǎn)生污染。采用較為先進(jìn)的綠色熒光方法也可以使工作人員在辨別時(shí)，不需要通過(guò)其他特殊的儀器裝備，辨別出是否存在禽流感病毒，在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)時(shí)也可以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，在禽流感病毒的發(fā)展中，環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)發(fā)揮不可忽視的作用，為我國(guó)醫(yī)學(xué)科技奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)[2]。

2.2 工作展望

禽流感對(duì)我國(guó)人民以及家畜的發(fā)展有很多不利的影響，因此，在未來(lái)的發(fā)展中，需要對(duì)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)進(jìn)行不斷的革新。在具體試驗(yàn)時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)假陽(yáng)性率十分高，因此需要進(jìn)一步對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行研究，降低假陽(yáng)性的出現(xiàn)，使環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)更加準(zhǔn)確，不出現(xiàn)其他的誤差影響禽流感病毒的檢測(cè)，進(jìn)而使整個(gè)檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，而且不需要其他機(jī)器進(jìn)行輔助，檢測(cè)的過(guò)程更加快捷[3]。

環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，它的結(jié)果有2種，一種是擴(kuò)增，另一種是不擴(kuò)增。這種簡(jiǎn)單的判定方法會(huì)同時(shí)檢測(cè)多種核酸，這對(duì)樣本的復(fù)雜性進(jìn)行了限制，因此為檢測(cè)出更多重的禽流感病毒，需要對(duì)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)進(jìn)行更多實(shí)用性的研究。對(duì)于禽流感病毒，在進(jìn)行傳染的過(guò)程中，可能出現(xiàn)很多變異情況，這對(duì)于我國(guó)的環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)又提出了更高的要求，因此，我國(guó)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)需要得到更好的發(fā)展，才能滿足我國(guó)禽流感病毒的檢測(cè)需要，使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確[4]。

3 結(jié)束語(yǔ)

禽流感病毒對(duì)人體的危害十分嚴(yán)重，并且在很大程度上抑制了我國(guó)家禽業(yè)的發(fā)展，因此在未來(lái)的發(fā)展中，需要根據(jù)禽流感病毒的不斷變化，研制出更好的檢測(cè)方法，也應(yīng)該對(duì)環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)進(jìn)行推廣，使其能更好地進(jìn)行禽流感病毒的檢測(cè)。另外，需要提升禽流感病毒的檢測(cè)技術(shù)，使檢測(cè)技術(shù)更加快捷，進(jìn)而更好地滿足我國(guó)醫(yī)學(xué)科技發(fā)展的需要。