非洲豬瘟與典型豬瘟的診斷與防控

王鳳武 ，李曉奇 ，耿萬恒 ，云伏雨 ，趙振華 ，閆紅霞 ，趙世華

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.烏蘭察布市農(nóng)牧業(yè)科學(xué)研究院，內(nèi)蒙古 集寧區(qū) 012000；3.武川縣農(nóng)牧業(yè)局，內(nèi)蒙古 武川 011700）

根據(jù)國際聯(lián)合委員會 （Joint Commission International，JCI）統(tǒng)計，截至 2018年 10月，我國非洲豬瘟疫情已經(jīng)達到35起，近60%疫情出現(xiàn)在東北地區(qū)［1］。因此，防控非洲豬瘟已從過去書本上的概念變成我國廣大獸醫(yī)科技人員必須面臨和有待進一步系統(tǒng)深入認識的現(xiàn)實問題。該文擬對非洲豬瘟和典型豬瘟的病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷技術(shù)和防控4個方面進行綜述，以期為這2種疾病的有效綜合防控提供參考。

1 病原學(xué)

1.1 非洲豬瘟

非洲豬瘟（African swine fever,ASF），又稱東非豬瘟（East African swine fever），是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV） 引起的高度傳染性、出血性、急性致死性傳染病。ASFV是非洲豬瘟病毒科，非洲豬瘟病毒屬的唯一成員，該病毒具有類脂質(zhì)囊膜，粒子直徑為175～215 nm，類核體直徑為72～89 nm，是一種20面體對稱結(jié)構(gòu)。ASFV基因組為雙股線性DNA，基因組全序列長約170～190 nt，含有約150種基因，可編碼包括 p72、p54、p12、pp 220、pp60、 血凝素、p32 等在內(nèi)的 50 多種病毒蛋白，這些蛋白大都與病毒吸附、毒力、細胞凋亡、宿主范圍或免疫應(yīng)答相關(guān)［2］。ASFV存在于急性病豬的血液、各種組織、體液、分泌物和排泄物中，具有相當(dāng)強的生存力，在4℃冷藏的病豬血液中，病毒可存活18個月；在土壤中可存活3個月；在室溫條件下，腐敗后15周的血液仍有活的病毒；在熱帶污染的豬圈，空圈后2周，病毒仍具有傳染性；而在溫帶污染的豬圈，空圈3個月后病毒才被殺滅。此外，ASFV在pH值低至3.9或高至13.4的條件下仍有感染性，用普通滅活方法56℃3 min處理，血清中的病毒仍然存活，但在60℃20 min則病毒很快失去活力。

1.2 典型豬瘟

典型豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的一種傳染病。該病毒屬于接觸性傳染，可引起豬泛發(fā)性小點狀出血、梗死和壞死，其傳染性強，病死率高，發(fā)病后期常引起繼發(fā)性細菌感染。CSFV屬于黃病毒科，瘟病毒屬成員，病毒粒子呈球形，有囊膜，直徑為384 nm，有20面立體對稱的核衣売。CSFV基因組為12.3 kb左右的單股線性RNA，其感染性沒有血清型的區(qū)別，只有毒力強弱之分［2］。CSFV對理化因素的抵抗力較強，血液中的病毒在60℃10 min才能被滅活，-70℃可保存數(shù)年，其毒價仍保持不變，但在化學(xué)物質(zhì)如火堿、漂白粉、來蘇兒等溶液中能很快使其滅活，因此，使用2%克遼林、3%火堿可用于污染環(huán)境中該病毒的消殺。此外，使用乙醚、氯仿、脫氧膽酸鹽也能迅速滅活豬瘟病毒。

2 流行病學(xué)

2.1 非洲豬瘟

迄今為止，只發(fā)現(xiàn)豬、野豬和鈍緣蜱可自然感染ASFV，在有些動物如牛、羊、兔等體內(nèi)也可增殖，但不致病。ASFV的儲存宿主，可將病毒從感染豬實驗性傳播給易感健康豬。一個地區(qū)初次發(fā)生本病時，病程很急，發(fā)病率和病死率很高，隨著病毒在豬群中不斷傳代后，毒力有所減弱，病性也逐漸溫和，可出現(xiàn)一些亞急性、慢性、隱性的病豬，病程延長至數(shù)月，呈地方流行性，存活豬通常終身帶毒，而其排泄物中則不繼續(xù)帶毒。

2.2 典型豬瘟

CSF在自然條件下，僅豬（包括野豬）具有較強的易感性，且不同品種、年齡和性別的豬均可感染，易感性差別不大，但一般認為優(yōu)良純種和改良種，以及仔豬易感性較強。人工可使異種動物感染，動物體內(nèi)可在一定時期內(nèi)保毒，但臨床上不表現(xiàn)任何癥狀，例如以10～100 mL CSFV接種黃牛和以5～10 mL接種綿羊或山羊后，病毒在動物體內(nèi)能存活2～3周，其血毒對豬仍具有傳染性。CSFV可在兔體內(nèi)可連續(xù)傳代，經(jīng)多代次連續(xù)傳代后，可適應(yīng)兔體并復(fù)制，能引起兔體溫升高，產(chǎn)生定型熱反應(yīng)，對豬的毒力明顯減弱，已不能使豬發(fā)病，但仍保持良好的免疫原性，如我國的豬瘟兔化弱毒株（C株），就是用其作為制造疫苗的種毒。

豬瘟病毒的持續(xù)感染屬于慢性病毒感染型，此型感染是通過病毒在宿主體內(nèi)長期存在的機制，進而導(dǎo)致對宿主的長期連續(xù)性感染或間斷性感染。其中，患持續(xù)感染的仔豬，在出生后的頭幾周與非感染的同窩仔豬相比，在外表上無任何差異，但它們可以將病毒傳給同窩非感染仔豬，這種豬在流行病學(xué)上更具危險性。

3 診斷技術(shù)

3.1 非洲豬瘟

非洲豬瘟與豬的其他出血性疾病的癥狀和病變都很相似，給該病的臨床診斷造成很大困難，尤其是在非洲豬瘟和典型豬瘟并存的情況下。一般來說，實驗室診斷非洲豬瘟方法主要有以下幾種。

3.1.1 紅細胞吸附試驗（HAD）：HAD最適合于鑒定新暴發(fā)疾病和檢測病毒，而且是從野外樣品分離病毒的常用方法。該法檢測ASFV最敏感，也最特異，通常在12 h內(nèi)可得出結(jié)果。用豬骨髓細胞和豬白細胞培養(yǎng)的ASFV，能致細胞病變和產(chǎn)生紅細胞吸附現(xiàn)象，而典型豬瘟瘟病毒則無此種吸附作用，可作為鑒別診斷方法。

3.1.2 直接免疫熒光試驗（DIF）：DIF是最早用于檢測病毒的方法，操作時采取脾、肺淋巴結(jié)或胃樣品，做成印壓涂片或組織切片，用標記的抗ASFV的免疫球蛋白測定病毒抗原。該法檢測急性ASF的敏感性很高，快速而又經(jīng)濟。但對亞急性或慢性ASF的檢測敏感性只有40%，靈敏度下降可能與熒光抗體和形成抗原抗體復(fù)合物有關(guān)。但將直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗聯(lián)合使用，可將檢出率提高到85%～90%。

3.1.3 間接免疫熒光試驗 （IIF）：IIF對慢性ASF是一種快速、靈敏而又特異的診斷方法。該方法主要是用于檢測血清或組織浸出物中的抗體。若檢査數(shù)量不多，此法尤為實用。

3.1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：目前，ELISA試驗是ASF血清學(xué)研究中最有用的方法。該試驗主要是檢測ASFV蛋白結(jié)合的病毒抗體，加上酶標記A蛋白，與適應(yīng)的底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，通過分光光度儀定量或只用肉眼判定結(jié)果。ELISA試驗除靈敏度高及特異性強外，而且操作簡便，結(jié)果易解釋，重復(fù)性好，更適合于自動化檢測大批量血清樣品。

3.1.5 其他檢測方法：以VP72基因為靶標，進行PCR擴増，檢測ASFV基因組。該法具有快速、靈敏、準確、特異的特點。此外，特異性、敏感性、穩(wěn)定性較好的非洲豬瘟病毒膠體金免疫層析試紙條，以及非洲豬瘟病毒多基因家族成員MGF360-12L RPA檢測方法也都是診斷非洲豬瘟的理想方 法［3-6］。

3.2 典型豬瘟

目前，典型豬瘟的實驗室診斷方法主要有：免疫熒光試驗、免疫組化試驗、動物接種試驗、RTPCR、RT-套式PCR、RT-qPCR等，前2種方法最為常用，其中，免疫熒光試驗因其簡易快速，可在2～3 h內(nèi)得到結(jié)果，并且檢出率可達91%～100%，已為許多國家所采用，其具體操作步驟如下。

3.2.1 直接免疫熒光試驗：取病原體組織制成觸片或冰凍切片，丙酮固定，熒光抗體染色，PBS充分洗滌，無離子水沖洗，自然干燥后，用緩沖甘油封片，置熒光顯微鏡下檢査。如果在扁桃體隱窩上皮細胞的胞漿內(nèi)和淋巴結(jié)生發(fā)中心的網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞發(fā)現(xiàn)有亮綠色熒光斑，即可判為豬瘟陽性。其中，強毒株熒光明顯，弱毒株僅在扁桃體隱窩上皮細胞內(nèi)見有微弱的熒光癍，青灰色或帶橙色為陰性。

3.2.2 間接免疫熒光試驗：在病料組織片上，滴加1∶4抗豬瘟血清，作用30 min后，再加羊抗豬IgG熒光抗體，作用30 min，漂洗，干燥后，熒光檢査，判定方法同上。

3.2.3 免疫組化試驗：取感染豬的組織（脾）觸片，或感染豬的白細胞涂片，用丙酮固定后，進行抑制內(nèi)源酶處理，之后加相應(yīng)的稀釋的結(jié)合物，無水酒精脫水，二甲苯清潔，風(fēng)干后，蓋玻片封蓋，鏡檢。依據(jù)感染豬臟器觸片與對照豬白細胞圖片顯色深淺判定結(jié)果。

4 防控措施

4.1 非洲豬瘟

目前對非洲豬瘟尚無有效治療方法，主要通過屠宰病豬和疑似病豬，深埋、燒毀和生物安全處理，達到根除的目的。如觀測到發(fā)病異常的病豬，畜主或獸醫(yī)要立即報告相關(guān)部門，并送檢血液和組織樣品。污染的場地與工具可用火堿消毒。也有報道國內(nèi)已經(jīng)有研究人員利用ASFV毒力基因UK，獲得重組蛋白 （DP96R），并進一步制備了DP96R重組蛋白的多克隆抗體，以及嘗試采用基因編輯技術(shù)構(gòu)建安全的非洲豬瘟病毒疫苗，并取得了一定的進展［7-10］。

4.2 典型豬瘟

我國在典型豬瘟的防制上采取廣泛和系統(tǒng)的豬瘟兔化弱毒疫苗預(yù)防注射，并結(jié)合獸醫(yī)衛(wèi)生綜合措施，控制了該型豬瘟的大面積流行［11］。此外，根據(jù)近年來豬瘟疫情出現(xiàn)亞臨床化和慢性化的趨勢，要根據(jù)臨床標準，尤其是亞臨床標準，制訂出新的行之有效的預(yù)防措施，嚴格執(zhí)行，方能收到較好效果。

4.2.1 強化計劃免疫：為保證豬群的有效免疫水平，應(yīng)定期為豬群進行疫苗免疫。我國研制的典型豬瘟兔化弱毒疫苗株，經(jīng)國內(nèi)外廣泛應(yīng)用和檢驗，證明對各種品種、不同性別和年齡的豬，均具有良好的安全性和免疫原性，被免疫豬不帶毒、不排毒，連續(xù)復(fù)歸豬不返強，無殘余毒力，對懷孕母豬胚胎及胎兒無不良影響，被公認為是一株理想的制苗用弱毒株。

4.2.2 緊急預(yù)防接種：典型豬瘟兔化弱毒疫苗給豬注射后，3～4 d即可產(chǎn)生免疫力。因此，可根據(jù)疫苗的這一特性，在已發(fā)生該型豬瘟疫情的豬群或地區(qū)，對未感染豬群進行緊急接種。并對疫區(qū)周圍的豬群，立即全部注射疫苗，形成安全帶，防止疫區(qū)擴大和豬瘟蔓延，但應(yīng)注意注射針頭等的清毒，以防人為傳播。該項措施，可使一部分豬或大部分豬獲得保護。

4.2.3 加強獸醫(yī)衛(wèi)生檢疫：加強獸醫(yī)衛(wèi)生檢疫，嚴格活體檢疫。由于豬瘟的持續(xù)感染，致使豬瘟病毒在豬群中長時期保存下來，并以亞臨床型傳播。這種亞臨床型豬瘟在普遍注射疫苗的地區(qū)極易被掩蓋，特別是懷孕母豬及其所產(chǎn)的部分存活仔豬，在臨床上不表現(xiàn)任何癥狀，是最危險的傳染源。

4.2.4 發(fā)生疫情時的緊急措施：當(dāng)發(fā)現(xiàn)疑似豬瘟病豬時，應(yīng)立即進行隔離，迅速診斷，確定疫點和疫區(qū)范圍，根據(jù)具體情況和自然條件進行封鎖。對已被和可疑污染的豬舍、飼養(yǎng)和運輸工具、糞便、墊草等使用1%～2%火堿加5%生石灰乳，或5%～10%漂白粉進行嚴格消毒；對撲殺的病豬和死亡豬應(yīng)一律深埋或燒毀；對屠宰病豬和處理死豬的場所、廢棄物、污水以及工具和人員等，應(yīng)進行徹底消毒，防止散毒；隔離期間應(yīng)禁止生豬交易和豬只調(diào)動。