淋巴細胞微核的兩種染色方法檢測結(jié)果分析

任振平

（吉林省白城醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院 檢驗科，吉林 白城 137000）

0 引言

微核是細胞染色體畸變在有絲分裂間期中的一種表現(xiàn)形式，放射線照射過量微核率會升高，小劑量輻射對長期從事放射性工作人員健康存在一定影響[1]，還可以造成放射工作人員細胞遺傳方面變化[2]，要加強放射防護工作[3]，就要對職業(yè)性放射工作者所受輻射損傷做出客觀評價，分析判斷個人受照劑量。因此檢測淋巴細胞微核率成為放射工作者職業(yè)健康檢測中的重要一項。從2013年起，我院經(jīng)吉林省衛(wèi)生廳審定、批準，獲得放射工作人員職業(yè)健康檢測資格[4]，在2017年我們對382例在崗放射工作者微核率檢測中，采用吉姆薩染色和瑞氏吉姆薩復(fù)合染色的兩種方法染色，對兩種染色方法的檢測結(jié)果比對分析。

1 對象與方法

1.1 測定對象

吉林省白城市以及周邊地區(qū)放射工作者崗中382人，男322人，女60人。此次檢測的都是放射診斷人員包括X光室和CT室以及同位素室的放射工作者。由于微核率男女之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義[5]，故在此不做分析。

1.2 檢測方法

1.2.1 儀器設(shè)備

恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、低速離心機、移液器、超凈工作臺、載玻片。

1.2.2 試劑

（1）RPM1640培養(yǎng)基5mL/瓶

（2）固定液：甲醇（優(yōu)級純）：冰醋酸（優(yōu)級純）=3∶1用前新鮮配制

（3）低滲液：0.075MKCL溶液，用前配制（4）吉姆薩染液

（5）瑞氏吉姆薩復(fù)合染液

1.2.3 實驗步驟

（1）無菌采集0.4mL靜脈血。無菌注入5mL 1640培養(yǎng)瓶中混勻放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。

（2）開啟培養(yǎng)瓶，用吸管吸棄上清，輕吹混勻，移入10mL離心管中，1500轉(zhuǎn)低速離心10分鐘，吸棄上清，輕吹混勻。

（3）加入2mL0.075MKCL低滲溶液，輕吹混勻，立即加入2mL固定液，輕吹混勻，1500轉(zhuǎn)低速離心10分鐘吸棄上清。

（4）加入3mL固定液，輕吹混勻，1500轉(zhuǎn)離心10分鐘，吸棄上清。

（5）重復(fù)（4）。

（6）剩余固定液，吹散混勻。

（7）滴片：將玻片從冰水中取出，滴片（10cm高度）自發(fā)干燥，每份標本至少兩張片。

（8）染色：每份標本兩張玻片分別采用吉姆薩染色和瑞氏吉姆薩復(fù)合染色，均染色10分鐘。慢水流沖洗，自然干燥。

（9）閱片：油鏡下，計數(shù)1000個完整淋巴細胞中微核數(shù)。

（10）玻片冷藏處理的效果比熱水處理后的效果好[3]。

1.3 統(tǒng)計分析

通過對382例放射工作者淋巴細胞微核率兩種染色方法檢測結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)兩種結(jié)果完全相同291人，占76.2%，不同91人，占23.8%。兩種方法微核總數(shù)為218個，其中吉姆薩染色法微核計數(shù)107個，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法微核數(shù)111，兩種染色法平均109個，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法比吉姆薩染色法多3.7%。

2 結(jié)果分析

兩種染色方法存在差異，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法微核率略高于吉姆薩染色，沒有明顯差異。計數(shù)淋巴細胞微核細胞數(shù)時，吉姆薩染色法略高于瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法。

3 討論

1）吉姆薩染色和瑞氏吉姆薩復(fù)合染色在淋巴細胞微核率檢測上沒有明顯差異。瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法微核率略高于吉姆薩染色，吉姆薩染色法微核細胞數(shù)卻略高于瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法。說明在檢測一個細胞多個微核時，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色法結(jié)果更好些。

2）在閱片時，兩種染色方法區(qū)別非常明顯。吉姆薩染色側(cè)重細胞核的著色，而對胞漿染色較遜色，胞核與胞漿色差小。而瑞氏吉姆薩復(fù)合染色則克服了這一缺點，胞核胞漿染色都良好。胞核與胞漿色差大，胞核紫紅色，胞漿淡藍色，界線分明，微核清晰易于辨認。尤其遇多個微核時不易漏檢。

3）綜上所述，在淋巴細胞微核率檢測中，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色優(yōu)于吉姆薩染色。同樣，瑞氏吉姆薩復(fù)合染色也適用于淋巴細胞染色體畸變率實驗。選擇合適的染色方法，提高微核的檢出率，降低漏檢率，降低誤檢率，保證實驗質(zhì)量，縮短閱片時間。對長期從事職業(yè)放射性工作人員需要加強對此工種人員認知培訓(xùn)[6]，提高防范安全意識與舉措[7]，因為長期低劑量電離輻射不但對放射工作人員的微核率和微核異常有明顯影響[8]，而且還會對晶狀體也有影響[9]，加強工作場所X線防護及個人健康監(jiān)護也是今后長期重要的工作任務(wù)[10]。