閆美玲,秦寅鵬,王文一,張弋△
肥胖、高血脂和糖尿病等代謝疾病均伴隨血清炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)等的升高,亦往往伴隨免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)向脂肪組織浸潤,通常稱之為炎性狀態(tài)[1-2]。研究顯示,這些代謝疾病通常伴隨著血清自由脂肪酸(free fatty acids,F(xiàn)FA)濃度的升高[2-3]。FFA 是高脂飲食的主要成分,過量的FFA可引起脂毒性,損傷正常細(xì)胞并引起炎癥發(fā)生,其中飽和脂肪酸對(duì)炎癥的影響尤為突出[4]。棕櫚酸是人和小鼠循環(huán)系統(tǒng)中主要的飽和脂肪酸,可引起脂肪細(xì)胞和胰島β細(xì)胞的炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及胰島素抵抗的發(fā)生[5-6]。Toll樣受體 4(toll-like receptor 4,TLR4)是模式識(shí)別受體家族中的重要一員,在炎癥和免疫方面發(fā)揮重要作用[7-8]。TLR4是炎癥信號(hào)傳導(dǎo)的門戶蛋白,可激活細(xì)胞內(nèi)促炎性反應(yīng)信號(hào)通路,進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)[9]。然而,棕櫚酸能否誘導(dǎo)脂肪組織浸潤的巨噬細(xì)胞啟動(dòng)炎癥反應(yīng),TLR4是否參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng),目前仍不明確。本研究旨在建立棕櫚酸誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)細(xì)胞模型,探討TLR4在此過程中的作用及相關(guān)機(jī)制。
1.1 一般資料 (1)動(dòng)物與細(xì)胞。無特定病原體(specified pathogens free,SPF)級(jí)健康雄性C57BL/6J小鼠20只,購自北京華阜康生物科技股份有限公司,體質(zhì)量15~17 g,4~5周齡。小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫。(2)主要儀器與試劑。DMEM培養(yǎng)基、碳酸氫鈉溶液和胎牛血清購自美國Invitrogen Gibco公司;Trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒購自大連寶生物工程技術(shù)公司;PCR引物購自上海生物工程有限公司;小鼠抗小鼠β-actin單克隆抗體、小鼠IL-6、TNF-α和MCP-1的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司;Western細(xì)胞裂解液、核因子κB(Nuclear factor κB,NF-κB)p65 兔抗小鼠抗體、Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)和NF-κB激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)檢測(cè)試劑盒購自江蘇碧云天公司;小鼠NF-κB p65 ELISA試劑盒購自美國R&D公司;兔抗小鼠TLR4多克隆抗體和兔抗小鼠NF-κB p65多克隆抗體(S536)購自美國Abcam公司;HRP標(biāo)記抗小鼠二抗,HRP標(biāo)記抗兔二抗購自北京中杉金橋公司。
1.2 方法
1.2.1 C57BL/6J小鼠肥胖模型建立 20只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后稱量空腹體質(zhì)量并標(biāo)號(hào),隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照(Control)組和高脂飼料(High-Fat Diet)組,每組10只。對(duì)照組正常飲食,高脂飼料組建立高脂飼料(high-fat diet,HFD)誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型[10]。實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)飼料參照AIN-96G配制,高脂飼料在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上添加10%豬油、10%蛋黃粉。實(shí)驗(yàn)期間飼養(yǎng)溫度20~25℃,晝夜明暗交替日光燈照明,自由飲水。高脂飲食誘導(dǎo)18周后,采用精密電子天平稱量小鼠的體質(zhì)量。用10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,測(cè)其體長(鼻尖到肛門外沿的長度),計(jì)算 Lee’s指數(shù),Lee’s指數(shù)=[體質(zhì)量(g)×103/體長(cm)]1/3。
1.2.2 脂肪組織的采集 高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)束后,小鼠禁食12 h,不禁水,稱量體質(zhì)量。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉。麻醉后依據(jù)以下步驟采集血液和組織樣本:(1)打開腹腔,取腹主動(dòng)脈血 0.2~0.5 mL,3 000 r/min離心 15 min,取上清液,貯存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩#?)采血完畢后開胸,以滅菌磷酸鹽緩沖液(PBS)經(jīng)心尖灌流至組織變白后,依次分離腎周、腸系膜和附睪部位脂肪組織,將其放入盛有預(yù)冷PBS的玻璃培養(yǎng)皿中洗凈,用濾紙吸干組織液后稱質(zhì)量,隨后放入EP管中,于-80℃冰箱保存待用。
1.2.3 FFA水平的測(cè)定 采用銅皂分光光度法測(cè)定小鼠血清中的FFA水平。(1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:采用含2%甲醇的氯仿-庚烷(4∶3,V/V)配置 1.60、0.80、0.40、0.20、0.10、0.05 mmol/L棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。(2)銅試劑工作液的配制:取10 mL 0.5 mmol/L Cu(NO3)2,10 mL 1.0 mmol/L 三乙醇胺和 3.5 mL 1 mmol/L NaOH,用雙蒸水稀釋至100 mL,同時(shí)加入33 g NaCl,調(diào)pH 至8.1。(3)采用移液器準(zhǔn)確吸取30μL血清,加入10 mL玻璃離心管中,加入含2%甲醇的氯仿-庚烷提取液1 mL。同樣準(zhǔn)確吸取30μL標(biāo)準(zhǔn)品溶液,加入10 mL玻璃離心管中,加入含2%甲醇的氯仿-庚烷提取液1 mL。(4)渦旋2 min,硅酸50 mg 120℃激活后加入,再渦旋4 min,2 000 r/min離心5 min。(5)采用玻璃移液管準(zhǔn)確量取上層溶液0.8 mL轉(zhuǎn)移至加有0.4 mL銅試劑的玻璃管中,渦旋5 min,2 000 r/min離心3 min。(6)采用玻璃移液管準(zhǔn)確量取上層溶液0.6 mL轉(zhuǎn)移至10 mL玻璃離心管中。(7)37℃氮?dú)獯蹈伞#?)加入0.3 mL乙醇,37℃水浴溶解15 min,然后渦旋5 min。(9)加入0.1 mL二苯基卡巴肼溶液,渦旋15 s,取0.2 mL加至96孔板中。(10)酶標(biāo)儀490 nm檢測(cè)吸收值。
1.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)方法及處理 小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7采用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)。培養(yǎng)條件:37℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱。采用加熱溶解的方法制備棕櫚酸白蛋白復(fù)合物,再用細(xì)胞培養(yǎng)基將復(fù)合物配制成150μmol/L和300μmol/L。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照(Control)組、無FFA牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)組(作為棕櫚酸的對(duì)照)、棕櫚酸150μmol/L組和棕櫚酸300μmol/L組,分別采用配制好的不含白蛋白的DMEM培養(yǎng)基、含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基、含棕櫚酸150μmol/L的白蛋白復(fù)合物和300μmol/L的白蛋白復(fù)合物分別刺激RAW264.7細(xì)胞24 h后收集各組細(xì)胞。
1.2.5 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)中取得的脂肪組織標(biāo)本和收集的細(xì)胞均以Trizol試劑提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,按照PCR試劑盒說明書配制反應(yīng)體系,最后應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀分析TNF-α、IL-6和MCP-1轉(zhuǎn)錄水平,以β-actin為內(nèi)參,數(shù)據(jù)結(jié)果以相對(duì)量表示。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性30 s;95℃變性5 s,60℃退火延伸30 s,共40個(gè)循環(huán)。引物序列見表1。
Tab.1 The specific primer sequences表1 引物序列表
1.2.6 炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、MCP-1和NF-κB p65水平的測(cè)定 細(xì)胞處理完成后,采集細(xì)胞培養(yǎng)上清,按照小鼠炎癥細(xì)胞因子ELISA試劑盒說明書測(cè)定TNF-α、IL-6、MCP-1和NF-κB p65的水平。
1.2.7 Western blot檢測(cè)TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白水平 細(xì)胞處理完成后以含0.1%PMSF的Western細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞提取蛋白,采用BCA法測(cè)定蛋白濃度,采用Western blot檢測(cè)TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白表達(dá),以β-actin為內(nèi)參,計(jì)算TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白相對(duì)表達(dá)量。
1.2.8 NF-κB p65激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)情況檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為空白對(duì)照組(Control組)、BSA組(作為棕櫚酸的對(duì)照組)和棕櫚酸300μmol/L組,分別采用配制好的不含白蛋白的DMEM培養(yǎng)基、含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基和含棕櫚酸300μmol/L的白蛋白復(fù)合物分別刺激RAW264.7細(xì)胞24 h,按照NF-κB p65激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)檢測(cè)試劑盒說明書,進(jìn)行固定-封閉-NF-κB p65抗體孵育-Cy3二抗孵育-細(xì)胞核染色各步操作,采用熒光顯微鏡觀察NF-κB p65激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)情況。
1.2.9 TLR4 siRNA干擾實(shí)驗(yàn) TLR4 siRNA干擾采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方式。細(xì)胞種板后,當(dāng)細(xì)胞在瓶底的覆蓋率達(dá)到60%即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為Control組、BSA組、棕櫚酸(300μmol/L)組、棕櫚酸(300μmol/L)+Control siRNA 組和棕櫚酸(300μmol/L)+TLR4 siRNA組。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組加入一定體積的無血清DMEM培基、無關(guān)片段轉(zhuǎn)染復(fù)合物或TLR4 siRNA(40 nmol/L)轉(zhuǎn)染復(fù)合物,培養(yǎng)箱孵育24 h后開始以棕櫚酸白蛋白復(fù)合物(300μmol/L)刺激細(xì)胞24 h,然后收集細(xì)胞和上清液,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)和上清液中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA水平和分泌水平。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 17.0軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。多組均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用Bonferroni檢驗(yàn),2組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 體質(zhì)量、Lee’s指數(shù)比較 18周后,高脂飼料組體質(zhì)量高于正常對(duì)照組(單位g:28.2±0.7vs.22.8±0.6,n=10,t=19.21,P<0.01),Lee’s指數(shù)亦高于正常對(duì)照組(15.3±0.2vs.14.2±0.2,n=10,t=12.08,P<0.01)。
2.2 FFA水平和脂肪組織炎癥因子mRNA表達(dá)水平 高脂飼料組較正常對(duì)照組小鼠血清中FFA水平升高,內(nèi)臟脂肪組織中TNF-α、IL-6和MCP-1的表達(dá)明顯增加(P<0.05),見表2。
Tab.2 Comparison of serum level of FFA and mRNA expressions of inflammatory cytokines in visceral adipose tissue between two groups of mice表2 2組小鼠血清FFA和內(nèi)臟脂肪組織TNF-α、IL-6、MCP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較(n=10,±s)
Tab.2 Comparison of serum level of FFA and mRNA expressions of inflammatory cytokines in visceral adipose tissue between two groups of mice表2 2組小鼠血清FFA和內(nèi)臟脂肪組織TNF-α、IL-6、MCP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較(n=10,±s)
**P<0.01
2.3 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-6、MCP-1表達(dá)和分泌的影響 棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞24 h后,與BSA組比較,棕櫚酸150μmol/L組和棕櫚酸300μmol/L組炎癥因子TNF-α、IL-6和MCP-1的表達(dá)和分泌均明顯增加(P<0.05),見表3。
2.4 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平和NF-κB p65磷酸化蛋白水平的影響 與BSA組比較,棕櫚酸濃度組的TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白水平均增加(P<0.05),見圖1。
2.5 棕櫚酸對(duì)NF-κB p65核轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平的影響 通過熒光顯微鏡下可見棕櫚酸處理巨噬細(xì)胞后NF-κB p65明顯向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn),細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)致密且明亮的紅色熒光,見圖2。Control組、棕櫚酸300μmol/L組、BSA組NF-κB p65水平分別為(70.96±5.96)、(182.63±4.10)及(68.14±4.58)ng/L(F=46.75,P<0.05),其中棕櫚酸 300μmol/L 組高于BSA組,Control組與BSA組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
Tab.3 The effect of palmitic acid on mRNA expression and secretion of inflammatory cytokines(TNF-α,IL-6 and MCP-1)in RAW264.7 macrophage表3 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-6和MCP-1表達(dá)和分泌的影響(n=3,±s)
Tab.3 The effect of palmitic acid on mRNA expression and secretion of inflammatory cytokines(TNF-α,IL-6 and MCP-1)in RAW264.7 macrophage表3 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-6和MCP-1表達(dá)和分泌的影響(n=3,±s)
**P<0.01;a與 BSA 組比較,b與棕櫚酸 150μmol/L 組比較,P<0.05;Control組僅與BSA組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因處理因素不同無需與其他組比較
Fig.1 The effect of palmitic acid on protein expressions of TLR4 and NF-κB p65 in RAW264.7 macrophages圖1 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4蛋白水平和NF-κB p65磷酸化蛋白水平的影響
Fig.2 The effect of palmitic acid on nuclear translocation of NF-κB p65 in RAW264.7 macrophages圖2 棕櫚酸對(duì)巨噬細(xì)胞NF-κB p65核轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
2.6 TLR4 siRNA對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)和分泌的影響 與BSA組比較,棕櫚酸組增加了 TLR4 和炎癥因子(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA和蛋白表達(dá)水平;TLR4被抑制后,棕櫚酸+TLR4 siRNA 組的 TLR4、TNF-α、IL-6和 MCP-1的mRNA表達(dá)和分泌水平明顯低于棕櫚酸組(P<0.05),見表4。
Tab.4 The effect of TLR4 siRNA on mRNA expression and secretion of inflammatory cytokines induced by palmitic acid in RAW264.7 macrophages表4 TLR4 siRNA對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)和分泌的影響(n=3,±s)
Tab.4 The effect of TLR4 siRNA on mRNA expression and secretion of inflammatory cytokines induced by palmitic acid in RAW264.7 macrophages表4 TLR4 siRNA對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)和分泌的影響(n=3,±s)
**P<0.01;a與BSA組比較,b與棕櫚酸組比較,P<0.05;其中Control組僅與BSA組比較,棕櫚酸+Control siRNA組僅與棕櫚酸組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
在肥胖、高血脂和糖尿病等代謝紊亂性疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中,往往都伴隨炎癥的發(fā)生并會(huì)持續(xù)存在[11-12]。研究發(fā)現(xiàn),代謝性疾病中炎癥的發(fā)生是代謝細(xì)胞(如脂肪細(xì)胞)產(chǎn)生的代謝信號(hào)啟動(dòng)炎性效應(yīng),從而破壞體內(nèi)的代謝穩(wěn)態(tài);Gregor教授將這種代謝組織炎癥狀態(tài)定義為“metaflammation”,即“代謝炎癥”,用來定義過剩的營養(yǎng)和能量引起代謝細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)而造成的低級(jí)別的慢性炎癥[2]。這種炎癥狀態(tài)的重要特點(diǎn)就是免疫細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等向組織(如脂肪)的浸潤,而浸潤的免疫細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致進(jìn)一步的促炎性改變,包括激活體內(nèi)促炎性信號(hào)通路,并產(chǎn)生大量的炎癥細(xì)胞因子,進(jìn)一步破壞機(jī)體的代謝穩(wěn)態(tài)[13-14]。代謝疾病往往也伴隨血漿自由脂肪酸水平的升高。研究發(fā)現(xiàn),肥胖和2型糖尿病患者血漿自由脂肪酸的濃度從200~400μmol/L的基礎(chǔ)水平可升高到800~1 500μmol/L[15]。在本研究建立的高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肥胖模型中,也觀察到高脂飼料組小鼠血清FFA水平較正常對(duì)照組明顯增加。同時(shí),與正常對(duì)照組比較,高脂飼料組小鼠體內(nèi)TNF-α、IL-6和MCP-1的表達(dá)明顯增加,提示C57BL/6J小鼠高脂飲食誘導(dǎo)后,肥胖發(fā)生的同時(shí)引起了內(nèi)臟脂肪組織的促炎性改變。
自由脂肪酸可以分為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸。多項(xiàng)研究認(rèn)為,飽和脂肪酸與肥胖、胰島素抵抗和心血管疾病的高風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[7,16]。棕櫚酸是體內(nèi)主要的飽和脂肪酸,碳鏈長度16,占血漿總自由脂肪酸的30%~40%[17]。因此,本研究在結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上,將棕櫚酸的濃度定為150和300μmol/L。體內(nèi)自由脂肪酸99%以上是與白蛋白結(jié)合的,因此,有關(guān)自由脂肪酸的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),需要將其與牛血清白蛋白載體制備成復(fù)合物才可跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)[18],因此本研究中將棕櫚酸與白蛋白制成復(fù)合物來誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞。
相關(guān)研究證實(shí),棕櫚酸可誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞、胰島β細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞等的炎癥反應(yīng),主要通過激活c-jun氨基末端激酶、κ激酶抑制因子和蛋白激酶C等,進(jìn)而激活NF-κB,從而引起炎癥基因的表達(dá)、炎癥細(xì)胞因子的大量釋放,最終導(dǎo)致胰島素抵抗和動(dòng)脈粥樣硬化等病理過程的發(fā)生[19]。本研究結(jié)果顯示,與BSA組比較,棕櫚酸150和300μmol/L可增加巨噬細(xì)胞炎癥因子(TNF-α、IL-6和MCP-1)的表達(dá)和細(xì)胞分泌水平,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。在對(duì)棕櫚酸150μmol/L和300μmol/L兩組誘導(dǎo)炎癥因子(TNF-α、IL-6和MCP-1)的表達(dá)和細(xì)胞分泌水平比較發(fā)現(xiàn),棕櫚酸300μmol/L組較150μmol/L組可誘導(dǎo)更大的炎癥效應(yīng),且棕櫚酸300μmol/L組棕櫚酸水平更接近肥胖患者體內(nèi)棕櫚酸水平,所以在后續(xù)的機(jī)制研究中選擇棕櫚酸300μmol/L。本研究又進(jìn)一步分析了棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的信號(hào)機(jī)制,結(jié)果顯示,與BSA組比較,棕櫚酸150μmol/L和 300μmol/L兩組的TLR4和 NF-κB p65磷酸化蛋白水平均增加,表明棕櫚酸可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4和NF-κB p65磷酸化蛋白的表達(dá),同時(shí),通過NF-κB激活-核轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)顯示,棕櫚酸300μmol/L組巨噬細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)致密且明亮的紅色熒光,提示NF-κB p65明顯向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn),證實(shí)了NF-κB被激活,提示TLR4和NF-κB可能與棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)有關(guān)。TLR4的siRNA干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TLR4 siRNA干擾后,與棕櫚酸組比較,棕櫚酸+TLR4 siRNA組TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表達(dá)和分泌水平明顯降低,表明TLR4被抑制后,棕櫚酸誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6和MCP-1的表達(dá)和釋放也被顯著抑制,證實(shí)TLR4確實(shí)參與了棕櫚酸誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
綜上所述,肥胖或高脂飲食可導(dǎo)致體內(nèi)促炎性改變,增加巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)和釋放,激活NF-κB信號(hào)通路,且TLR4與棕櫚酸誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)相關(guān)。但TLR4調(diào)控這一炎癥反應(yīng)的具體機(jī)制,以及是否與激活NF-κB、c-jun氨基末端激酶和蛋白激酶C等信號(hào)分子相關(guān)仍需要進(jìn)一步探索。
[1]Ohashi K,Shibata R,Murohara T,et al.Role of anti-inflammatory adipokines in obesity-related diseases[J].Trends Endocrinol Metab,2014,25(7):348-355.doi:10.1016/j.tem.2014.03.009.
[2]閆美玲,夏麗莎,胡長平.代謝炎癥與肥胖相關(guān)研究進(jìn)展[J].中國動(dòng)脈硬化雜志,2015,23(6):634-638.Yan ML,Xia LS,Hu CP,et al.Advance in research on metaflammation and obesity[J].Chinese Journal of Arteriosclerosis,2015,23(6):634-638.
[3]Coats BR,Schoenfelt KQ,Barbosa-Lorenzi VC,et al.Metabolically activated adipose tissue macrophages perform detrimental and beneficial functions during diet-induced obesity[J].Cell Rep,2017,20(13):3149-3161.doi:10.1016/j.celrep.2017.08.096.
[4]Santaren ID,Watkins SM,Liese AD,et al.Individual serum saturated fatty acids and markers of chronic subclinical inflammation:the insulin resistance atherosclerosis study(IRAS)[J].J Lipid Res,2017,P076836.doi:10.1194/jlr.P076836.[Epub ahead of print].
[5]Kennedy A,Martinez K,Chuang CC,et al.Saturated fatty acidmediated inflammation and insulin resistance in adipose tissue:mechanisms of action and implications[J].J Nutr,2009,139(1):1-4.doi:10.3945/jn.108.098269.
[6]Wei X,Song H,Yin L,et al.Fatty acid synthesis configures the plasma membrane for inflammation in diabetes[J].Nature,2016,539(7628):294-298.doi:10.1038/nature20117.
[7]Eguchi K,Manabe I.Toll-like receptor,lipotoxicity and chronic in?flammation:the pathological link between obesity and cardiometa?bolic disease[J].J Atheroscler Thromb,2014,21(7):629-639.
[8]Hu L,Yang H,Ai M,et al.Inhibition of TLR4 alleviates the inflammation and apoptosis of retinal ganglion cells in high glucose[J].Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol,2017,225(11):2199-2210.doi:10.1007/s00417-017-3772-0.
[9]Garibotto G,Carta A,Picciotto D,et al.Toll-like receptor-4 signaling mediates inflammation and tissue injury in diabetic nephropathy[J].J Nephrol,2017,30(6):719-727.doi:10.1007/s40620-017-0432-8.
[10]饒子亮,鐘志勇,謝超敏,等.高脂飼料誘導(dǎo)肥胖大鼠和肥胖小鼠模型的比較研究[C].中國新疆烏魯木齊第九屆中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì),2010:241-246.Rao ZL,Zhong ZY,Xie CM,et al.A comparative study for high fat diet-induced obesity rats and obesity mice[C].Urumchi Xinjiang,China.The 9thconference on laboratory animal sciences,2010:241-246.
[11]Mathieu P,Lemieux I,Després JP.Obesity,inflammation,and cardiovascular risk[J].Clin Pharmacol Ther,2010,87(4):407-416.doi:10.1038/clpt.2009.311.
[12]Federico A,Dallio M,DI Sarno R,et al.Gut microbiota,obesity and metabolic disorders[J].Minerva Gastroenterol Dietol,2017,63(4):337-344.doi:10.23736/S1121-421X.17.02376-5.
[13]Sun AR,Panchal SK,F(xiàn)riis T,et al.Obesity-associated metabolic syndrome spontaneously induces infiltration of pro-inflammatory macrophage in synovium and promotes osteoarthritis[J].PLoS One,2017,12(8):e0183693.doi:10.1371/journal.pone.0183693.
[14]Singer K,Lumeng CN.The initiation of metabolic inflammation in childhood obesity[J].J Clin Invest,2017,127(1):65-73.doi:10.1172/JCI88882.
[15]Reaven G,Hollenbeck C,Jeng C,et al.Measurement of plasma glucose,free fatty acid,lactate,and insulin for 24 h in patients with NIDDM[J].Diabetes,1988,37(8):1020-1024.
[16]Pl?tz T,Hartmann M,Lenzen S,et al.The role of lipid droplet formation in the protection of unsaturated fatty acids against palmitic acid induced lipotoxicity to rat insulin-producing cells[J].Nutr Metab(Lond),2016,13:16.doi:10.1186/s12986-016-0076-z.
[17]Moon ML,Joesting JJ,Lawson MA,et al.The saturated fatty acid,palmitic acid,induces anxiety-like behavior in mice[J].Metabolism,2014,63(9):1131-1140.doi:10.1016/j.metabol.2014.06.002.
[18]Cupp D,Kampf JP,Kleinfeld AM.Fatty acid-albumin complexes and the determination of the transport of long chain free fatty acids across membranes[J].Biochemistry,2004,43(15):4473-4481.
[19]Wu D,Liu J,Pang X,et al.Palmitic acid exerts pro-inflammatory effects on vascular smooth muscle cells by inducing the expression of C-reactive protein,inducible nitric oxide synthase and tumor necrosis factor-α[J].Int J Mol Med,2014,34(6):1706-1712.doi:10.3892/ijmm.2014.1942.