多囊卵巢綜合征不孕患者卵泡液同型半胱氨酸水平檢測及與葡萄糖、雌二醇水平的相關(guān)性探討

黃娟娟， 張利平， 張 娟， 李 華， 高 霞， 曹 英

（1.延安大學附屬醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 延安 716000；2.寶雞市婦幼保健院產(chǎn)科，陜西 寶雞 721000）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是常見的女性內(nèi)分泌疾病之一，在12～45歲的女性中發(fā)病率為5%～10%[1]，是導致女性不孕的主要因素。有研究認為，胰島素抵抗和同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高可能是PCOS患者發(fā)生動脈粥樣硬化等心血管疾病的危險因素[2]。Hcy是細胞和組織生長的必需氨基酸，且是蛋氨酸降解的中間產(chǎn)物。血清Hcy水平受多種因素影響，包括年齡、性別、營養(yǎng)、吸煙、慢性炎癥、身體活動和胰島素等[3]。卵泡液中的Hcy水平可能反映了全身的Hcy代謝情況，同時也為卵子的發(fā)育提供了重要的微環(huán)境[4]?，F(xiàn)已證實在接受輔助生殖技術(shù)治療的PCOS患者中，血清Hcy水平與卵子、胚胎的質(zhì)量呈負相關(guān)[5]。PCOS患者代謝異常導致血清Hcy水平的變化可能會影響卵泡液中的Hcy水平，從而影響PCOS患者卵子和胚胎的質(zhì)量。為此，本研究檢測了行體外受精（in νitro fertilization，IVF）治療的PCOS患者的卵泡液Hcy水平，并分析其與卵泡液中葡萄糖（glucose，Glu）、雌二醇（estradiol，E2）水平的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2014年3月—2015年9月在延安大學附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心及寶雞市婦幼保健院生殖醫(yī)學中心行IVF治療的不孕患者100例，年齡20～42歲。診斷標準：夫妻可完成正常的性生活，且未避孕未育1年以上。其中有50例確診為PCOS患者，入組標準：B超監(jiān)測每側(cè)卵巢有＞10個直徑2～8 mm的卵泡且卵巢間質(zhì)密度增強，月經(jīng)稀發(fā)（月經(jīng)周期＞45 d）或閉經(jīng)，睪酮＞2.2 nmol/L或黃體生成素（luteotropic hormone，LH）/卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）比值≥2；排除患有其他系統(tǒng)性疾病的患者，如全身性炎性疾病、先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥、高泌乳素血癥及甲狀腺疾病等，排除血性的卵泡液。另50例不孕婦女為非PCOS患者，不孕原因主要為男方因素或輸卵管因素。入組標準：月經(jīng)規(guī)律，月經(jīng)初期卵泡數(shù)＜10個且大小正常；基礎(chǔ)激素水平正常。男性不育的診斷參考世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）2010年標準。所有對象近3個月未服用激素類藥物及葉酸、B族維生素等可能影響Hcy代謝的藥物，且無吸煙、吸毒及酗酒史。該項研究經(jīng)延安大學附屬醫(yī)院及寶雞市婦幼保健院倫理委員會批準，所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 促排卵方案 患者在前一月經(jīng)周期的20 d左右（黃體中期）注射促性腺激素釋放激素激動劑（商品名為達必佳，0.1 mg/d）。下一個月經(jīng)周期第3天檢測血清激素水平，當FSH＜5 IU/ L、LH＜5 IU/L、E2＜50 pg/mL、子宮內(nèi)膜＜5 mm時，給予重組人促卵泡激素或尿促卵泡素（75 U/ 支）進行控制性卵巢刺激。當3個及以上的卵泡直徑達到18 mm時，檢測血清性激素水平，當日20：00—21：00注射5 000～10 000 IU人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）。注射HCG 36 h后在在陰道超聲下取卵。

1.2.2 收集卵泡液 9：00—11：00收集患者撿卵后的卵泡液。通過肉眼觀察判斷是否存在血液污染，丟棄渾濁或著色樣本。收集的卵泡液在4 ℃下3 000×g離心15 min，除去細胞成分，隨即-80 ℃凍存，后續(xù)進行生化指標和激素檢測。卵泡液從收集到凍存的時間間隔不超過30 min。

1.2.3 各項指標的檢測 Glu采用己糖激酶法檢測。E2和胰島素采用ROCHE MODULAR E170全自動化學發(fā)光儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（電化學發(fā)光法）檢測。Hcy采用循環(huán)酶法，試劑盒由北京九強公司生產(chǎn)，檢測儀器為OLYMPUS AUS 5400全自動生化分析儀（日本奧林巴斯公司）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以x± s表示，組間比較采用t檢驗。采用Pearson相關(guān)分析評估卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PCOS組和非PCOS組一般資料比較

PCOS組年齡、不孕年限、體重指數(shù)、原發(fā)性不孕比例、繼發(fā)性不孕比例、不孕因素、促性腺激素與非PCOS組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而注射HCG 當日總卵泡數(shù)、直徑≥14 mm的卵泡數(shù)及平均直徑、直徑＜14 mm的卵泡數(shù)、血清E2水平2個組之間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 PCOS組和非PCOS組卵泡液各項指標比較

PCOS組卵泡液Hcy、胰島素水平均明顯高于非PCOS組（P＜0.05），而卵泡液Glu、E2水平2個組之間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 PCOS組和非PCOS組臨床結(jié)局的比較

非PCOS組獲卵數(shù)明顯低于PCOS組（P＜0.05），而優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率均明顯高于PCOS組（P＜0.05）。2個組之間受精率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.4 卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)分析顯示，PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平與體重指數(shù)、年齡、獲卵數(shù)及卵泡液E2、Glu水平均無相關(guān)性（P＞0.05）。見表3。

表1 PCOS組和非PCOS組卵泡液各項指標的比較 （x±s）

表2 PCOS組和非PCOS組臨床臨床結(jié)局的比較

表3 PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關(guān)性分析

3 討論

Hcy是細胞和組織生長必需的氨基酸，同時提供了卵子發(fā)育非常重要的微環(huán)境。外周循環(huán)的環(huán)境變化可能會影響Hcy水平。因此，分析Hcy水平有利于了解血清代謝變化的信息。目前，已證實接受輔助生殖技術(shù)治療的PCOS患者Hcy水平與卵子及胚胎質(zhì)量呈負相關(guān)[6]，但在接受輔助生殖技術(shù)治療的PCOS患者中還未見有卵泡液Hcy與卵泡液E2相關(guān)性的報道。

本研究結(jié)果顯示，PCOS患者卵泡液Hcy水平明顯高于非PCOS患者（P＜0.05）。有研究結(jié)果顯示PCOS患者血漿Hcy水平明顯升高[7]。本研究還發(fā)現(xiàn)PCOS患者卵泡液Hcy水平與體重指數(shù)、年齡、獲卵數(shù)及卵泡液E2、胰島素、Glu水平均無相關(guān)性（P＞0.05），提示PCOS患者卵泡液Hcy水平不受這些因素的影響。因此，PCOS患者Hcy水平可能與胰島素抵抗和相對高雄激素血癥有關(guān)[8]，但還需要更多的研究來揭示PCOS患者食物或體質(zhì)效應及高遺傳因素與Hcy的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示PCOS患者的總平均獲卵數(shù)顯著高于非PCOS患者（P＜0.003），但非PCOS患者的臨床妊娠率（50%）明顯高于PCOS患者（33%）。多數(shù)研究認為PCOS患者的卵子和胚胎質(zhì)量較差，受精率低，從而導致妊娠率降低[9]，但有些研究則認為受精率不受影響[10]。在接受輔助生殖技術(shù)治療的婦女中，卵泡液Hcy水平與卵子及胚胎質(zhì)量呈顯著負相關(guān)[11]。由此可見，卵泡液Hcy水平可能會影響PCOS患者的妊娠結(jié)局。本研究結(jié)果還顯示PCOS組和非PCOS組之間卵泡液E2水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），與文獻報道[12]一致。有研究發(fā)現(xiàn)在IVF/胚胎移植周期中，PCOS患者與正常排卵的不孕婦女之間卵泡液E2水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）[13]。VOLPE等[14]發(fā)現(xiàn)PCOS患者與正常排卵的不孕婦女之間卵泡液E2水平無明顯差異。因此，促性腺激素刺激的PCOS患者卵巢存在正常的芳香化酶活性的固有潛能，PCOS并不是由遺傳性卵巢芳香化酶活性缺陷導致的。

綜上所述，盡管PCOS和非PCOS患者的卵泡液Glu和E2水平是恒定的，但PCOS患者卵泡液Hcy水平明顯升高。

[1]蘇丹，張晉峰，侯麗輝，等. 多囊卵巢綜合征治療研究進展[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（2）：286-288.

[2]FAUSER B C，TARLATZIS B C，REBAR R W，et al.Consensus on women's health aspects of polycystic ovary syndrome （PCOS）：the Amsterdam ESHRE/ASRM-Sponsored 3rd PCOS Consensus Workshop Group[J]. Fertil Steril，2012，97（1）：28-38. e25.

[3]董燕燕，陳光亮. 高同型半胱氨酸血癥危害及致病機制研究進展[J]. 中國藥理學通報，2014，30（9）：1205-1208.

[4]黃影，王藹明，趙勇，等. 多囊卵巢綜合征患者促甲狀腺激素對同型半胱氨酸水平的影響[J]. 中國婦幼保健，2014，29（9）：1332-1336.

[5]OCAL P，ERSOYLU B，CEPNI I. The association between homocysteine in the follicular fluid with embryo quality and pregnancy rate in assisted reproductive techniques[J]. J Assist Reprod Genet，2012，29（4）：299-304.

[6]孔雯，肖西悅，曾天舒，等. 二甲雙胍對多囊卵巢綜合征患者血清同型半胱氨酸水平影響的系統(tǒng)評價[J]. 華中科技大學學報 （醫(yī)學版），2015，59（5）：540-544.

[7]邢艷霞，張美蘭，于翰，等. 非肥胖多囊卵巢綜合征患者血漿同型半胱氨酸水平與頸動脈內(nèi)膜中層厚度的關(guān)系[J]. 中國藥物與臨床，2013，13（8）：1073-1074.

[8]WIJEYARATNE C N，NIRANTHARAKUMAR K，BALEN A H，et al. Plasma homocysteine in polycystic ovary syndrome：does it correlate with insulin resistance and ethnicity[J]. Clin Endocrinol（Oxf），2004，60（5）：560-567.

[9]YILMAZ N，INAL H A，GORKEM U，et al.Follicular fluid total antioxidant capacity levels in PCOS[J]. J Obstet Gynaecol，2016，36（5）：654-657.

[10]CHANG E M，HAN J E，SEOK H H，et al. Insulin resistance does not affect early embryo development but lowers implantation rate in in νitro maturationin νitro fertilization-embryo transfer cycle[J]. Clin Endocrinol（Oxf），2013，79（1）：93-99.

[11]黃影，王藹明，趙勇，等. 多囊卵巢綜合征與高同型半胱氨酸血癥相關(guān)性的研究進展[J]. 生殖醫(yī)學雜志，2013，22（8）：626-632.

[12]ORIEF Y I，KARKOR T A E，SALEH H A，et al.Comparison between steroid expression in serum and follicular fluid in polycystic ovary patients and unexplained infertility patients undergoing assisted reproductive techniques[J]. Middle East Fert Soc J，2014，19（1）：57-63.

[13]仉燕. 卵泡液和胚胎培養(yǎng)液LIF與IVF--ET結(jié)局的關(guān)系[D]. 上海：第二軍醫(yī)大學，2014.

[14]VOLPE A，COUKOS G，D'AMBROGIO G，et al.Follicular fluid steroid and epidermal growth factor content，and in νitro estrogen release by granulosaluteal cells from patients with polycystic ovaries in an IVF/ET program[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，1991，42（3）：195-199.