淺談辛伐他汀對(duì)大鼠脂肪源性干細(xì)胞的增殖和成骨分化的影響

付明

目前有很多關(guān)于辛伐他汀誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化及增殖的報(bào)道，但是對(duì)于辛伐他汀影響脂肪源性干細(xì)胞成骨分化的報(bào)道比較少，此次文章對(duì)辛伐他汀影響大鼠脂肪源性干細(xì)胞的增殖和成骨分化開展了研究分析，有以下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

主要試劑：辛伐他?。硸|），I型膠原酶（Sigma），CCK-8（ 碧 云 天 ），RNAiso Plus（TAKARA）， PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser（TAKARA）， SYBR〇 R Premix Ex TaqTM II （TAKARA），茜素紅S（Sigma），引物合成（上海introvigen），常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)器械。

1.2 方法

將大鼠用0.6%戊巴比妥鈉（0.5 ml/100 g）腹腔注射麻醉，雙側(cè)腹股溝去毛，消毒鋪單，取腹股溝直切口，分離皮下脂肪，操作注意無菌原則。將約1.2 g脂肪移入超凈臺(tái)，含2%雙抗的PBS漂洗5遍，剔除結(jié)締組織和血管，然后剪碎。PBS沖洗2編后，加入3倍體積的0.15% I型膠原酶，37℃恒溫震蕩（250 rpm）消化60 min，待消化液渾濁。白色液性脂肪漂浮于表層，殘余組織沉淀于底層。用含10% FBS+1%雙抗的低糖DMEM培養(yǎng)基混懸細(xì)胞，70 μm篩網(wǎng)過濾[1]。從第二代開始，消化后按每1×106個(gè)細(xì)胞每支凍存管的量凍存細(xì)胞，長期保存。后將細(xì)胞分為5組，前4組分別以0.01μm/L、0.1μm/L、1μm/L、10μm/L濃度辛伐他丁培養(yǎng)，第5組不加入任何其他干預(yù)藥物，為對(duì)照組。

1.3 觀察指標(biāo)

將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組ADSCs分別接種于24孔板中,接種密度為5×104個(gè)細(xì)胞/孔,并設(shè)調(diào)零孔和對(duì)照孔，運(yùn)用手持式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)細(xì)胞分別計(jì)算各組第1天、第7天細(xì)胞數(shù)量。

2 結(jié)果

在接種24 h后，細(xì)胞體比較小，形狀為星形，存在漂浮脂肪液滴。接種48 h之后，部分細(xì)胞出現(xiàn)集落生長，細(xì)胞的體積不斷增加。接種72 h后，細(xì)胞生長呈現(xiàn)纖維狀，部分聚集成團(tuán)。經(jīng)過7天培養(yǎng)，梭形細(xì)胞快速生長，細(xì)胞密度達(dá)到80%，可以進(jìn)行傳代。辛伐他丁檢測(cè)顯示，7 d時(shí)0.01 μm/L組細(xì)胞個(gè)數(shù)為（2.19±0.14）×104個(gè)，0.1μm/L組的ADSCs細(xì)胞個(gè)數(shù)為（1.98±0.12）×104個(gè)，細(xì)胞個(gè)數(shù)最多。隨著辛伐他汀濃度的增加，ADSCs細(xì)胞個(gè)數(shù)逐漸降低，1 μm/L組細(xì)胞個(gè)數(shù)為（1.86±0.11）×104個(gè)，與對(duì)照組的ADSCs（1.83±0.13）×104個(gè)無差異性，10 μm/L組ADCSs的細(xì)胞個(gè)數(shù)為（1.58±0.08）×104個(gè)，已出現(xiàn)明顯的抑制作用。

3 討論

目前臨床對(duì)于干細(xì)胞的研究不斷深入，脂肪源性干細(xì)胞被廣泛關(guān)注[2]，對(duì)于脂肪肝細(xì)胞的研究持續(xù)了很久，沒有停止過。脂肪組織是中胚層產(chǎn)物，在組織中廣泛存在，因?yàn)橹信邔觼碓磳傩?，ADSCs的跨胚層多向分化能力較強(qiáng)[3]。ADSCs組織具有很好的相容性，可以保持良好生物相容性并且不會(huì)有免疫排斥情況出現(xiàn)。芬蘭的一位外科醫(yī)生進(jìn)行了自體脂肪干細(xì)胞異位誘導(dǎo)修復(fù)上頜骨大面積骨缺損，其效果比較理想[4]。還有研究是將ADSCs注射到小鼠皮下，一年內(nèi)沒有出現(xiàn)瘤體[5]。

他汀類藥物可以改善血管內(nèi)皮功能，消除血管炎癥[6-8]。他汀類藥物可以影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。我們就其是否能夠影響脂肪源性干細(xì)胞的成骨能力進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，隨著辛伐他汀濃度的增加，ADSCs能力降低，1μm/L組與對(duì)照組的ADSCs增殖能力無差異性，經(jīng)過7天培養(yǎng)，梭形細(xì)胞快速生長，細(xì)胞密度達(dá)到80%，可以進(jìn)行傳代。

綜上所述，辛伐他汀安全性高，獲取容易，促成骨效果好，因此在組織工程化骨應(yīng)用方面具有很高的價(jià)值。

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