張文玉 張 麗 馮景明
(北京社會管理職業(yè)學院,北京 106101)
(一)動物模型制作:Wistar大鼠54只,雄性大鼠,體重250-320 g(所選取的大鼠均由301動物實驗中心所提供)。麻醉方法:10%水合氯醛(300 mg/kg),進行腹腔內注射麻醉后,大鼠仰臥于大鼠固定夾板上,設計好的簡易加壓裝置上,該裝置由固定端和加壓端兩部分組成。大鼠的四肢用固定繩捆綁固定于底盤上,加壓部分通過倒立的加壓端來完成,其加壓端為一個圓形的鐵釘樣結構,通過計算鐵釘樣圓形結構的面積,進而計算出大鼠受壓部位所能夠承受到的局部的重量,促使大鼠大腿處受壓部位的皮膚組織受到9.33 kPa的壓強。壓迫方式采用常見的缺血再灌注損傷模型,給予五個周期的循環(huán),造成受壓部位組織發(fā)生壓瘡,觀察組織持續(xù)受壓不同時間的損傷變化。
(二)實驗材料:免疫組化試劑盒(均由福州邁新生物技術開發(fā)有限公司所提供)、常見病理試劑均來自于病理科實驗室。
(三)實驗組織取材:將以上各實驗組大鼠在規(guī)定的時間結束后,立即處死大鼠,進行實驗部位組織取材,將取出的組織迅速置于冰蒸水中進行漂洗,去除殘留的血跡等。組織置于4%的多聚甲醛液體中固定,做成組織切片備用。
(四)溫度梯度分類指標:參考既往研究,給予35-37溫度梯度控制,觀察不同溫度梯度下,在相同的壓力間歇性缺血再灌注損傷情況下壓瘡的發(fā)生發(fā)展情況。
大鼠壓瘡造模組內動物分組:正常對照組大鼠10只;大鼠壓瘡損傷對照組10只;溫度干預組10只。
(五)觀察指標:近紅外光譜技術是近年來新興技術。
利用近紅外光波對組織中血紅蛋白濃度、血氧飽和度進行測量,評估大鼠受壓部位局部組織的氧飽和度情況,反應大鼠受壓部位壓瘡的發(fā)生和發(fā)展情況。
光鏡下觀察取出的大鼠組織的表皮、真皮、皮下組織(主要為肌肉組織)、毛細血管與組織內炎細胞的浸潤情況。本研究中根據既往研究所得,將皮膚壓傷病理改變分為3度:輕度,皮膚組織內鱗狀上皮細胞變薄,表皮出現(xiàn)與真皮的分離現(xiàn)象,真皮組織內出現(xiàn)軟組織的輕度膠原變性,局部可見毛細血管擴張,少量淋巴細胞等炎性細胞的浸潤,肌肉組織內可見橫紋肌肌束疏松,但并未出現(xiàn)顯著的肌肉組織溶解破裂等現(xiàn)象;中度,表皮內的鱗狀上皮部分核固縮,真皮內炎細胞浸潤明顯,脂肪細胞出現(xiàn)游離現(xiàn)象,毛細血管擴張充血顯著,局部可見出血的現(xiàn)象,肌肉組織內橫紋肌水腫嚴重、間隙增寬,部分可見斷裂等現(xiàn)象;重度,表皮內鱗狀上皮脫屑死亡,可見顯著的破壞和凋亡現(xiàn)象,表皮與真皮顯著性分離,真皮內膠原纖維溶解,細胞核碎裂,脂肪細胞溶解死亡,可見真皮內毛細血管充血和淤血,橫紋肌退行性變,肌纖維斷裂,橫紋模糊不清。而在本研究中發(fā)現(xiàn):給予溫度干預的大鼠的組織修復情況和大鼠損傷對照組之間存在顯著性差異。給予溫度干預的大鼠其受壓部位的壓瘡發(fā)生情況沒有達到重度程度,組織受損情況跟未給予溫度干預組相比較,受損較輕,且紅外線測定水平在不同大鼠間存在顯著性差異。溫度干預組其組織內氧含量高于未干預組。兩項結果提示溫度干預在一定程度上會影響壓瘡的形成,即給予相同的軟組織壓力和壓強,給予局部軟組織溫度干預,會在一定程度上影響受壓部位的壓瘡形成。
壓瘡,作為國內外人群最常見的負擔較重的病種之一,對其治療手段相對不足。臨床上僅限于提高護理措施預防壓瘡,但其發(fā)生情況仍不可避免。針對壓瘡的治療手段較缺乏,溫度對于壓瘡形成的干預措施缺乏研究,爭議較大,且其干預壓瘡的治療機制目前并不明確,本研究擬采用蔣麗萍老師的壓瘡自制模型,建立大鼠壓瘡實驗,給予壓力的同時在不同時間點上建立溫度梯度,觀察溫度對壓瘡形成過程中和治療效果的影響。該研究可為臨床上壓瘡的治療和預防提高新的干預手段。同時為臨床上發(fā)生壓瘡時,給予何種干預措施為最優(yōu)的臨床決策提供實驗依據,也可為壓瘡的臨床診斷提供考慮遺傳因素的精準預測模型并針對臨床干預提供循證證據。近紅外光譜技術是近年來新興技術,利用近紅外光波對組織中血紅蛋白濃度、血氧飽和度進行測量,評估人體局部組織的氧飽和度,具有無創(chuàng)性和操作簡單的特點,在臨床監(jiān)護和皮瓣移植等領域得到廣泛應用。這項技術在軟組織的發(fā)生發(fā)展變化中引用較少,本實驗通過此項技術觀察受壓部位的變化,為其臨床應用擴展了新的方向??傊ㄟ^本研究發(fā)現(xiàn):給予溫度干預可以造成大鼠的壓瘡形成的階段和損傷程度不一樣,組織熱成像也存在差別,為壓瘡形成的干預措施提供了新的思路和研究方法,值得進一步研究和探討。