β-catenin在非特殊型浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其對患者預(yù)后的影響

楊麗敏，秦鳳霞，黃勇，馬勇杰

（天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，乳腺癌防治教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市“腫瘤防治”重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市惡性腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津300060）

乳腺癌是嚴(yán)重危害女性生命健康的常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢。我國乳腺癌患者發(fā)病率每年約以3%~4%以上的速度遞增，因此，預(yù)防和治療乳腺癌具有重大意義。β-catenin是一種多功能蛋白，重要功能是參與細(xì)胞間的相互黏連，在乳腺上皮中，β-catenin通過介導(dǎo)與 E-cadherin的相互作用，將細(xì)胞外黏附分子與胞質(zhì)內(nèi)組織骨架相互連接，以保持質(zhì)膜的完整性，并參與細(xì)胞的黏附、遷徙與轉(zhuǎn)移等過程。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，它不僅是細(xì)胞黏附分子，還是wnt信號通路中重要的傳遞因子。在細(xì)胞核中，β-catenin通過調(diào)節(jié)基因表達(dá)過程，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中具有重大作用。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測β-catenin在273例非特殊型浸潤性導(dǎo)管癌（IDC-NOS）中的表達(dá)，并分析其表達(dá)情況與乳腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例資料 隨機(jī)選取天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2004-2006年病例資料完整的經(jīng)病理診斷證實(shí)的IDC-NOS 273例，并對其標(biāo)本對應(yīng)的石蠟切片進(jìn)行免疫組化染色。273例IDC-NOS患者均為女性，年齡27~76歲，平均年齡為50.00歲?；颊叩碾S訪起點(diǎn)為手術(shù)日期，末次隨訪時(shí)間為2014年11月24日，平均隨訪73．5月。至隨訪截止日，有44例（16．1%）患者出現(xiàn)了腫瘤的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，25例（9．2%）患者死于癌癥。

1．2 免疫組化染色 免疫組織化學(xué)染色采用鏈霉素抗生物素-過氧化物酶免疫組化試劑盒SP-9000操作說明進(jìn)行，簡述如下：組織切片經(jīng)脫蠟復(fù)水，組織抗原修復(fù)（pH=6．0的枸櫞酸鹽緩沖液），3%H2O2室溫孵育10 min，試劑2（非特異性染色阻斷劑）室溫孵育20 min，滴加β-catenin鼠抗人單克隆抗體（Santa Cruz），4℃過夜，室溫復(fù)溫45 min后，滴加試劑3（生物素標(biāo)記的羊抗鼠/兔IgG）37℃孵育20 min，PBS清洗3次，滴加試劑4（鏈霉卵白素-過氧化物酶）37℃孵育20 min，之后用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，1%鹽酸酒精分化，0．2%氨水返藍(lán)，脫水透明后封片。

1．3 結(jié)果判斷 免疫組織化學(xué)的檢測結(jié)果由兩位病理學(xué)醫(yī)師獨(dú)立觀察得出。β-catenin染色結(jié)果分別從細(xì)胞膜、細(xì)胞漿兩個(gè)方面判斷β-catenin在癌細(xì)胞內(nèi)的分布，膜陽性細(xì)胞率＞70%為正常表達(dá)，膜陽性細(xì)胞率≤70%為表達(dá)減弱或缺失；細(xì)胞漿陽性率＞10%為胞漿異位表達(dá)。膜表達(dá)減弱或缺失及胞漿異位表達(dá)均稱作異常表達(dá)。ER的判定以1%為臨界值，至少1%腫瘤細(xì)胞顯示核顯色時(shí)，將腫瘤判讀為ER陽性[1-2]。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組間臨床病理資料及差異的比較使用χ2檢驗(yàn)，β-catenin的表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)?？偵娣治龊蜔o進(jìn)展生存分析采用Kaplan-Meier法分析，總生存期是從診斷日期到因乳腺癌死亡的日期，無進(jìn)展生存期是由手術(shù)日期到癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或者死亡的日期。

2 結(jié)果

2．1 β-catenin的表達(dá)情況與IDC-NOS患者預(yù)后的關(guān)系 本研究中β-catenin有 11．7%（32/273）僅表現(xiàn)胞漿著色，65．2%（178/273）僅胞膜著色，14．7%（40/273）既有胞漿著色又有胞膜著色，其余為陰性表達(dá)，未見胞核著色。根據(jù)癌細(xì)胞中β-catenin的胞漿、胞膜表達(dá)情況將β-catenin的表達(dá)分為正常表達(dá)和異常表達(dá)。在273例IDC-NOS患者中，有133例（48．7%）患者屬于β-catenin正常表達(dá)，140例（51．3%）患者呈現(xiàn)出β-catenin異常表達(dá)，見圖1。Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，β-catenin異常表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差（圖2A，2B）。

圖1 IDC-NOS患者β-catenin表達(dá)免疫組化圖（×200）Fig 1 β-catenin expression in IDC-NOS patients（×200）

圖2 β-catenin正常表達(dá)與異常表達(dá)患者的生存分析Fig 2 Survival analysis of normal and aberrant expressions of β-catenin in IDC-NOS patients

2．2 β-catenin的表達(dá)與IDC-NOS患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 分析β-catenin的異常表達(dá)與乳腺癌的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)β-catenin的異常表達(dá)與年齡、組織學(xué)分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、復(fù)發(fā)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子受體2狀態(tài)（HER2）在內(nèi)的病理指標(biāo)均無相關(guān)性，與雌激素受體狀態(tài)（ER）呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（rs=-0．134，P=0．027）（表 1）。

表1 β-catenin的異常表達(dá)與浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性Tab 1 The relationship between β-catenin and pathological features of IDC-NOS

2．3 不同 ER表達(dá)狀態(tài)下，β-catenin的表達(dá)與IDC-NOS患者預(yù)后的關(guān)系 由于ER與β-catenin的異常表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，本研究聯(lián)合分析ER狀態(tài)與β-catenin表達(dá)情況對預(yù)后的影響，發(fā)現(xiàn)在ER陰性的患者中（n=104），β-catenin異常表達(dá)患者與β-catenin正常表達(dá)患者的預(yù)后沒有差異（圖3A，3B），然而在 ER 陽性的患者中（n=168），β-catenin異常表達(dá)提示預(yù)后不良（圖3C、3D）。

圖3 在ER陰性患者（A，B）和ER陽性患者（C，D）中，β-catenin正常表達(dá)與異常表達(dá)患者的生存曲線分析Fig 3 The survival curves of normal and aberrant expressions of β-catenin in ER-negative patients(A,B)and ER-positive patients(C,D)

3 討論

β-catenin是一種多功能蛋白，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮多重作用。β-catenin可與E-cadherin的胞質(zhì)區(qū)相連形成復(fù)合體，在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)同質(zhì)細(xì)胞黏附中起著重要作用[3-4]。同時(shí)，β-catenin也是wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的中心效應(yīng)器[5-6]。胞漿中積累的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF（T cell factor/lymphoid enhancer factor）家族的DNA結(jié)合蛋白結(jié)合，轉(zhuǎn)錄激活并調(diào)控下游靶基因的表達(dá)[7-9]。

許多研究表明β-catenin在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著舉足輕重的作用[10]，但是在乳腺癌標(biāo)本中，β-catenin的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果還很混亂，主要是由于β-catenin的亞細(xì)胞定位以及分析方法不同。Li等[11]通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測了169例浸潤性乳腺癌標(biāo)本，觀察到β-catenin的胞膜、胞漿及胞核中都有著色，且認(rèn)為β-catenin胞漿和胞核陽性著色為wnt通路激活狀態(tài)，β-catenin胞漿和胞核陽性表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差。López-Knowles等[12]使用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測了276例浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本中β-catenin的表達(dá)，有4%（12/276）的患者僅胞膜著色，5%（15/276）僅胞漿著色，其余的胞漿、胞膜都有著色，另外僅在3例患者中觀察到β-catenin胞核著色。研究者認(rèn)為β-catenin胞漿表達(dá)水平高于β-catenin胞膜表達(dá)水平的乳腺癌患者預(yù)后差。Pang等[13]表明β-catenin在乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)，β-catenin低表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差。Zhang等[14]通過meta分析發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞核中β-catenin的高表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差，而細(xì)胞膜上β-catenin的表達(dá)不能指示預(yù)后。

本研究通過免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)檢測了273例浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本中β-catenin的表達(dá)，其中有11.7%（32/273）僅胞漿著色，65.2%（178/273）僅胞膜著色，14.7%（40/273）既有胞漿又有胞膜著色，其余為陰性表達(dá)，并未發(fā)現(xiàn)有胞核著色。將胞膜表達(dá)低于70%或胞漿表達(dá)高于10%視為β-catenin異常表達(dá)，共有133例（48.7%）患者表現(xiàn)出β-catenin正常表達(dá)，140例（51.3%）患者表現(xiàn)出β-catenin的異常表達(dá)。對其生存分析發(fā)現(xiàn)，β-catenin異常表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差。通過Spareman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，β-catenin的異常表達(dá)與患者的ER狀態(tài)顯著負(fù)相關(guān)，ER陽性時(shí)β-catenin正常表達(dá)所占的比例高（rs=-0.134，P=0.027）。

有文獻(xiàn)報(bào)道，β-catenin能夠正調(diào)ERα下游靶基因的表達(dá)[15]。本研究通過聯(lián)合分析ER的狀態(tài)與β-catenin表達(dá)情況對乳腺癌患者預(yù)后的影響發(fā)現(xiàn)，在ER陰性的患者中，β-catenin異常表達(dá)與正常表達(dá)的乳腺癌患者的預(yù)后沒有差異，而在ER陽性的患者中，β-catenin異常表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后差于β-catenin正常表達(dá)的患者。表明在ER陽性的條件下，β-catenin的表達(dá)情況才能夠影響乳腺癌患者的預(yù)后。這可能是由于β-catenin能夠增強(qiáng)ER的轉(zhuǎn)錄激活作用，進(jìn)而促進(jìn)下游靶基因轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

綜合以上分析結(jié)果得出，β-catenin在IDC-NOS中的異常表達(dá)與ER的狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)。在ER陽性的條件下，β-catenin的表達(dá)情況能夠影響IDCNOS患者的預(yù)后。

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