PRRX1的表達(dá)對(duì)卵巢癌血管生成擬態(tài)形成及患者預(yù)后的影響

范 丹 ，宋文靜 ，2，張艷輝 ，戚 紅 ，古 強(qiáng) ，2，董學(xué)易 ，2，劉 芳 ，2，趙秀蘭 ，2，孫保存 ，2，

（1．天津醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，天津300070；2．天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科，天津300052；3．天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院病理科，天津300060）

卵巢癌是女性生殖器官三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居宮頸癌和宮體癌之后，其死亡率居首位，是女性最主要的惡性腫瘤之一。卵巢癌起病隱匿、進(jìn)展快，缺乏有效的早期診斷手段，約70%的患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)即已為晚期，治療及預(yù)后極其差[1]。因此，對(duì)卵巢癌發(fā)生機(jī)制和疾病進(jìn)展的研究一直是婦科惡性腫瘤研究中的難點(diǎn)與熱點(diǎn)問(wèn)題[2]。血管生成擬態(tài)（VM）是由腫瘤細(xì)胞自身變形模仿內(nèi)皮細(xì)胞組成的微循環(huán)管道，內(nèi)壁無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞襯覆，與宿主血管連接使腫瘤細(xì)胞獲得血液供應(yīng)，對(duì)患者的生存預(yù)后有很大影響。最近，配對(duì)相關(guān)同源框1（paired related homoeobox 1，PRRX1）蛋白已被證實(shí)為一個(gè)新的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的誘導(dǎo)因子，其在乳腺癌、肺癌中表達(dá)可抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，提示良好預(yù)后；而在胃癌、結(jié)直腸癌中的表達(dá)與轉(zhuǎn)移和預(yù)后差相關(guān)[3-6]，但目前對(duì)該因子在卵巢癌中表達(dá)及其具體的臨床意義的研究少有報(bào)道。本研究旨在初步探討PRRX1在卵巢癌中表達(dá)情況及其與VM的關(guān)系，以及PRRX1通過(guò)何種途徑影響VM形成，從而闡明PRRX1對(duì)卵巢癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1．1 病例情況 62例卵巢癌標(biāo)本來(lái)自于天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1991年1月-1999年12月期間收治的卵巢癌患者。年齡21～80歲，其中＜50歲者22例，≥50歲者40例。這些病例均進(jìn)行了病理學(xué)診斷：漿液性42例，黏液性9例，子宮內(nèi)膜樣癌11例；高分化24例，中分化12例，低分化26例；FIGO分期Ⅰ期20例，Ⅱ期9例，Ⅲ期33例；39例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)，23例未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)；43例患者出現(xiàn)腹水，19例患者未出現(xiàn)腹水；VM陽(yáng)性組21例，VM陰性組41例。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 免疫組化 免疫組化采用SP法染色。所有標(biāo)本均為石蠟包埋組織，5μm厚切片，經(jīng)二甲苯脫蠟，無(wú)水乙醇脫水，3%H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化酶30min，梯度乙醇水化，微波熱修復(fù)10 min，自然冷卻后自來(lái)水沖洗和PBS平衡后，山羊血清于室溫封閉30min，一抗孵育4℃過(guò)夜。次日室溫恢復(fù)1 h后PBS洗3次，加二抗孵育1 h,PBS洗3次，DAB顯色，自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染核，脫水封片。PRRX1(1∶100)為兔抗人多克隆抗體來(lái)自 Novus Biologicals公司；Wnt5a(1∶100)為兔抗人抗體來(lái)自 R&D Biosystems公司；β-catenin（1:150）為小鼠抗人單克隆抗體來(lái)自北京中杉金橋公司；CD31（1∶50）為兔抗人單克隆抗體來(lái)自北京中杉金橋公司。

1．2．2 CD31與PAS雙重染色 免疫組化常規(guī)染完CD31后，滴加過(guò)碘酸鈉孵育15min于室溫中，自來(lái)水沖洗5min后蒸餾水洗5次，然后滴加雪夫試劑，置于37℃孵箱避光20min，自來(lái)水沖洗20 min后蒸餾水洗5遍，蘇木精復(fù)染核、自來(lái)水洗5min，脫水后封片。1．3 結(jié)果判斷 結(jié)果判定根據(jù)細(xì)胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn)的棕黃色顆粒樣染色的細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度判定陽(yáng)性表達(dá)情況。具體計(jì)數(shù)方法參考Sood等的評(píng)分方法：每例標(biāo)本選擇10個(gè)含有陽(yáng)性細(xì)胞的高倍視野（×400）分別計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，取其平均值計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率。0分：陽(yáng)性細(xì)胞＜5%；1分：陽(yáng)性細(xì)胞5%～25%；2分：陽(yáng)性細(xì)胞25%～50%；3分：陽(yáng)性細(xì)胞＞50%。染色強(qiáng)度：1分：淺黃色；2分：深黃色；3分：棕黃色?？傆?jì)分=陽(yáng)性細(xì)胞百分率計(jì)分+染色強(qiáng)度計(jì)分，總計(jì)分≤2分為陰性，＞2分為陽(yáng)性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料組間率的差異比較采用χ2檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析，使用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析。組間差異比較以P＜0．05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2．1 PRRX1蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性 在卵巢癌中PRRX1表達(dá)于癌細(xì)胞胞核，62例卵巢癌組織中PRRX1的陽(yáng)性病例數(shù)為33例，有VM形成的為21例（圖1）。PRRX1表達(dá)與卵巢癌患者的FIGO分期、轉(zhuǎn)移及VM的形成密切相關(guān)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），與患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型和分級(jí)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05）（表1）。

圖1 卵巢癌組織PRRX1的表達(dá)和CD31/PAS的雙染（×200）Fig 1 PRRX1 expression and CD31/PAS double staining in ovarian cancer（×200）

表1 PRRX1蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系Tab 1 RelationshipbetweenPRRX1 expression and the clinicopathology of patients with ovariancancer

2.2 PRRX1表達(dá)與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系 62例卵巢癌患者根據(jù)PRRX1的表達(dá)情況分為陽(yáng)性表達(dá)組和陰性表達(dá)組，Kaplan-Meier生存分析顯示PRRX1陰性表達(dá)的卵巢癌患者生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于PRRX1陽(yáng)性表達(dá)卵巢癌患者，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.038）。PRRX1陽(yáng)性表達(dá)和存在VM的患者生存時(shí)間比PRRX1陰性表達(dá)或無(wú)VM形成的患者短（P=0.002）且預(yù)后差（圖2）。

2.3 Wnt5a、β-catenin在卵巢癌中的表達(dá)及其與PRRX1的關(guān)系 Wnt5a主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿；β-catenin主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞膜或胞漿，部分胞核陽(yáng)性。在62例卵巢癌組織中Wnt5a、β-catenin漿、β-catenin核的陽(yáng)性病例數(shù)分別為16例、39例、25例 (圖 3)。χ2和 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示PRRX1表達(dá)與β-catenin核陽(yáng)性表達(dá)密切相關(guān)（rs=0.309,P=0.014），PRRX1 表達(dá)與 Wnt5a、β-catenin漿陽(yáng)性表達(dá)不相關(guān)（rs=0.110,P=0.396；rs=0.217，P=0.090）（表2、3）。

圖2 卵巢癌中PRRX1表達(dá)和VM形成中的生存曲線圖Fig 2 The survival curve of PRRX1 expression and VM formation in ovarian cancer

圖3 卵巢癌組織Wnt5a和β-catenin的表達(dá)（×200）Fig 3 Wnt5a and β-catenin expressions in ovarian cancer（×200）

表2 卵巢癌中PRRX1與Wnt5a、β-catenin漿、β-catenin核表達(dá)的相關(guān)性Tab 2 CorrelationsbetweenPRRX1andWnt5a,β-cateninof patientswithovariancancer

表3 卵巢癌中PRRX1與Wnt5a、β-catenin漿、β-catenin核表達(dá)的Pearson相關(guān)性Tab 3 PearsoncorrelationbetweenPRRX1andWnt5a,β-catenin ofpatientswithovariancancer

2．4 PRRX1 表達(dá)和 Wnt5a、β-catenin 漿、β-catenin核表達(dá)與卵巢癌患者生存預(yù)后的關(guān)系 62例卵巢癌患者PRRX1陽(yáng)性表達(dá)和β-catenin核陽(yáng)性表達(dá)的患者生存時(shí)間短于PRRX1陰性表達(dá)或β-catenin核陰性表達(dá)的患者(P=0．023)；而PRRX1陽(yáng)性表達(dá)與Wnt5a陽(yáng)性表達(dá)、β-catenin的漿陽(yáng)性表達(dá)的患者生存時(shí)間與PRRX1陰性表達(dá)或Wnt5a陰性表達(dá)、β-catenin的漿陰性表達(dá)的患者生存時(shí)間相比，差別無(wú)意義（P=0．840；P=0．137）。

3 討論

卵巢癌患者的主要死因是腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，而腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移都具有血管依賴性，因此腫瘤血管生成和VM的形成對(duì)患者的生存預(yù)后起重要作用[7]。VM是由腫瘤細(xì)胞自身變形模仿內(nèi)皮細(xì)胞組成的微循環(huán)管道，內(nèi)壁無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞襯覆。其形成有3個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)：腫瘤細(xì)胞的自身變形，腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的重塑和其與宿主血管連接使腫瘤細(xì)胞獲得血液供應(yīng)[8]。研究表明，腫瘤細(xì)胞的“可塑性”是VM形成的關(guān)鍵[9]。EMT是指在特定的生理和病理?xiàng)l件下上皮來(lái)源細(xì)胞向間質(zhì)源性細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一種現(xiàn)象，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10]。而形成VM的腫瘤細(xì)胞失去上皮細(xì)胞特性而獲得內(nèi)皮細(xì)胞的功能和表型，這一過(guò)程和EMT有關(guān)。已有研究表明EMT的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Twist、ZEB-1的表達(dá)對(duì)腫瘤組織VM形成具有調(diào)節(jié)作用[11-12]，因此推測(cè)有些誘導(dǎo)EMT的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子可能促進(jìn)VM形成。在本組實(shí)驗(yàn)中，PRRX1作為一個(gè)新的EMT的誘導(dǎo)因子，與VM的形成密切相關(guān)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），在PRRX1陽(yáng)性表達(dá)和存在VM的患者中，其生存時(shí)間短且預(yù)后差。

PRRX1是同源框轉(zhuǎn)錄因子paired-type家族中的一員，可調(diào)節(jié)間充質(zhì)前體細(xì)胞的分化[13]，已被證實(shí)為一個(gè)新的EMT的誘導(dǎo)因子，是一種DNA相關(guān)蛋白，其功能是轉(zhuǎn)錄共激活，通過(guò)增加血清反應(yīng)因子的DNA結(jié)合活性進(jìn)行轉(zhuǎn)錄活化。PRRX1作為一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的EMT誘導(dǎo)物與經(jīng)典的EMT誘導(dǎo)物[14]不同，關(guān)鍵區(qū)別在于干細(xì)胞樣特性誘導(dǎo)：PRRX1誘導(dǎo)EMT的發(fā)生并不伴隨干性的獲得[15]。PRRX1的缺失可使乳腺癌細(xì)胞發(fā)生MET（mesenchymal–epithelial transition）并獲得干性樣表型[15]；相反，結(jié)直腸癌中PRRX1表達(dá)促進(jìn)EMT發(fā)生和干性樣特性的獲取[6]。對(duì)PRRX1功能的研究顯示該基因作為一種轉(zhuǎn)錄因子可調(diào)控多種基因的表達(dá)[16]，PRRX1參與軟骨細(xì)胞的分化過(guò)程[17]，其在肢芽形成和骨骼發(fā)育中起重要作用[18]，由腫瘤壞死因子（TNF）激活的PRRX1可抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、更年期人群和老年人中的骨形成[19]。在老鼠胚胎的心臟和骨骼肌中PRRX1高度表達(dá)，PRRX1的缺失會(huì)使老鼠在圍產(chǎn)期時(shí)死于顱面和肢體畸形[20]。在正常成人的大腦中PRRX1在神經(jīng)細(xì)胞譜系轉(zhuǎn)換和維持成人神經(jīng)干細(xì)胞自我更新中起到關(guān)鍵作用[21]，PRRX1通過(guò)調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞分化而參與肌腱蛋白-C表達(dá)和肺血管形成過(guò)程[22]。另外PRRX1促進(jìn)胰腺再生并致癌[23]。但該蛋白在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用尚不完全清楚。有研究表明，在惡性膠質(zhì)瘤中PRRX1的缺失可抑制惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和神經(jīng)球形成，而其表達(dá)誘導(dǎo)激活Notch信號(hào)參與惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)[24]。但也有研究顯示該基因的缺失可引起體內(nèi)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[15]。這可能是因?yàn)樵诓煌到y(tǒng)的腫瘤之間PRRX1的表達(dá)和功能存在差異。在胃癌[5]中，PRRX1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致EMT分子標(biāo)記物N-cadherin、E-cadherin和vimentin以及核內(nèi)β-catenin、Wnt/β-catenin 靶基因 c-Myc 的水平的變化，而且Wnt/β-catenin信號(hào)的抑制劑XAV939抵消了PRRX1過(guò)表達(dá)的作用。說(shuō)明PRRX1是通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)誘導(dǎo)EMT的發(fā)生。在本組實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)PRRX1的表達(dá)與β-catenin核陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)，初步推斷在卵巢癌中PRRX1可使βcatenin入核從而激活Wnt通路。

Wnt（Wingless）基因是在小鼠乳腺癌中首先發(fā)現(xiàn)的，在多種組織中廣泛表達(dá)且具有高度的保守性，在胚胎發(fā)育過(guò)程中調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、遷移、極性和凋亡，與人類某些常見(jiàn)的惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[25]。Wnt蛋白大致分為兩類：一類是Wnt1類，激活Wnt經(jīng)典通路，即Wnt/β-catenin信號(hào)通路；另一類為Wnt5a類，可觸發(fā)Wnt非經(jīng)典通路（不依賴β-catenin的Wnt通路），包括Wnt/Ca2+和Wnt/PCP信號(hào)通路等[26-27]。Wnt5a基因是一種分泌性糖蛋白，是Wnt非經(jīng)典家族中的重要成員，目前對(duì)其作用機(jī)制的研究存在較大分歧：Wnt5a既能活化經(jīng)典的Wnt/β-catenin通路又能活化非經(jīng)典Wnt/Ca2+通路，并且二者之間相互作用，導(dǎo)致Wnt5a在不同腫瘤中的生物學(xué)作用不一致，在甲狀腺癌[28]中起抑癌作用而在胃癌[29]中起到促癌的作用。βcatenin蛋白作為Wnt經(jīng)典通路的重要成員，其蛋白穩(wěn)定性和活性的調(diào)節(jié)是Wnt通路中的關(guān)鍵事件之一。通路傳導(dǎo)模式是：細(xì)胞外的Wnt蛋白與細(xì)胞膜上的受體Frizzled/LRP結(jié)合啟動(dòng)Wnt信號(hào)，然后通過(guò)磷酸化并激活細(xì)胞漿內(nèi)的Dsh蛋白，抑制GSK3IS／APC／Axin 復(fù)合物對(duì) β-catenin 的磷酸化。胞漿內(nèi)未被磷酸化的β-catenin蛋白可以逃逸被泛素水解系統(tǒng)降解的命運(yùn)，繼而進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與轉(zhuǎn)錄因子LEF/TCF共同作用，激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。因此，β-catenin蛋白在細(xì)胞內(nèi)的異常累積不僅是Wnt通路激活的標(biāo)志事件，還是多種腫瘤中的常見(jiàn)事件之一[30-31]。在生理或者病理?xiàng)l件下，Wnt/β-catenin經(jīng)典的信號(hào)通路還參與EMT的形成和調(diào)控[32]。當(dāng)Wnt/β-catenin通路活化使β-catenin向細(xì)胞核內(nèi)聚集破壞了 E-cadherin/α-catenin/β-catenin 復(fù)合體的穩(wěn)定性，E-cadherin作用減弱，促進(jìn)EMT發(fā)生[33-34]。Wnt/β-catenin是參與調(diào)控EMT的重要信號(hào)通路，而EMT在VM的形成過(guò)程中具有重要作用，因此，我們推測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化促進(jìn)EMT發(fā)生進(jìn)而影響VM形成。在結(jié)腸癌[35]中證實(shí)了Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化促進(jìn)腫瘤細(xì)胞EMT發(fā)生并在VM形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑Dkk1可逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞EMT，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化，抑制VM形成。在肝癌[36]中，XAV939 可通過(guò)抑制 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路，降低其下游血管擬態(tài)相關(guān)因子ZEB-1和MMP-7的表達(dá)，從而抑制人肝癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成。亦說(shuō)明了Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)VM的形成起促進(jìn)作用。

綜上，PRRX1作為一個(gè)新的EMT的誘導(dǎo)因子，可通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，而Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化促進(jìn)EMT發(fā)生進(jìn)而影響VM形成。在卵巢癌組織中，PRRX1表達(dá)與卵巢癌患者VM的形成、生存預(yù)后密切相關(guān)，且與βcatenin核表達(dá)相關(guān)，因此初步推測(cè)PRRX1可能是通過(guò)經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)節(jié)VM形成從而影響卵巢癌患者預(yù)后，為卵巢癌中VM形成和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究提供新思路。本實(shí)驗(yàn)只是推測(cè)PRRX1可能是通過(guò)經(jīng)典Wnt通路對(duì)VM進(jìn)行調(diào)控，因此還需要進(jìn)行大量的體外實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證并探討具體的機(jī)制。

[1] Jemal A,Murray T,Samuels A,et al.Cancer statistics,2003[J].CA Cancer J Clin,2003,53(1):5

[2] Eisenkop S M,Friedman R L,Spirtos N M.The role of secondary cytoreductive surgery in the treatment of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma[J].Cancer,2000,88(1):144

[3] Lv Z D,Yang Z C,Liu X P,et al.Silencing of Prrx1b suppresses cellular proliferation,migration, invasion and epithelialmesenchymal transition in triple-negative breast cancer[J].J Cell Mol Med,2016,20(9):1640

[4] Lv Z D,Kong B,Liu X P,et al.miR-655 suppresses epithelial-tomesenchymal transition by targeting Prrx1 in triple-negative breast cancer[J].J Cell Mol Med,2016,20(5):864

[5] Guo J,Fu Z,Wei J,et al.PRRX1 promotes epithelial-mesenchymal transition through the Wnt/β-catenin pathway in gastric cancer[J].Med Oncol,2015,32(1):393

[6] Takahashi Y,Sawada G,Kurashige J,et al.Paired related homoeobox 1,a new EMT inducer,is involved in metastasis and poor prognosis in colorectal cancer[J].Br J Cancer,2013,109(2):307

[7] Zhao H,Gu X M.Study on vasculogenic mimicry in malignant esophageal stromal tumors[J].World J Gastroenterol,2008,14(15):2430

[8] Folkman J.Role of angiogenesis in tumor growth and metastasis[J].Semin Oncol,2002,29(6,Supplement 16):15

[9]Mihic-Probst D,Ikenberg K,Tinguely M,et al.Tumor cell plasticity andangiogenesisinhumanmelanomas[J].PLoSOne,2012,7(3):e33571[10]Fan Y L,Zheng M,Tang Y L,et al.A new perspective of vasculogenic mimicry:EMT and cancer stem cells (Review)[J].Oncol Lett,2013,6(5):1174

[11]Sun T,Zhao N,Zhao X L,et al.Expression and functional significance of Twist1 in hepatocellular carcinoma:its role in vasculogenic mimicry[J].Hepatology,2010,51(2):545

[12]Liu Z,Sun B,Qi L,et al.Zinc finger E-box binding homeobox 1 promotesvasculogenic mimicryin colorectalcancerthrough induction of epithelial-to-mesenchymal transition[J].Cancer Sci,2012,103(4):813

[13]Kern M J,Argao E A,Birkenmeier E H,et al.Genomic organization and chromosome localization of the murine homeobox gene Pmx[J].Genomics,1994,19(2):334

[14]Mani S A,Guo W J,Liao M J,et al.The epithelial-mesenchymal transition generates cells with properties of stem cells[J].Cell,2008,133(4):704

[15]Oca?a O H,Córcoles R,Fabra A,et al.Metastatic colonization requires the repression of the epithelial-mesenchymal transition inducer Prrx1[J].Cancer Cell,2012,22(6):709

[16]Regadas I,Matos M R,Monteiro F A,et al.Several cis-regulatory elementscontrolmRNA stability,translation efficiency,and expressionpatternofPrrxl1(pairedrelatedhomeoboxprotein-like1)[J].JBiolChem,2013,288(51):36285

[17]Takimoto A,Mohri H,Kokubu C,et al.Pax1 acts as a negative regulator of chondrocyte maturation[J].Exp Cell Res,2013,319(20):3128

[18]Ten Berge D,Brouwer A,Korving J,et al.Prx1 and Prx2 in skeletogenesis:roles in the craniofacial region,inner ear and limbs[J].Development,1998,125(19):3831

[19]Lu X,Beck G R,Gilbert L C,et al.Identification of the homeobox protein Prx1(MHox,Prrx-1)as a regulator of osterix expression and mediatoroftumornecrosisfactorαactioninosteoblast differentiation[J].J Bone Miner Res,2011,26(1):209

[20]Martin J F,Bradley A,Olson E N.The paired-like homeo box gene MHox is required for early events of skeletogenesis in multiple lineages[J].Genes Dev,1995,9(10):1237

[21]Shimozaki K,Clemenson G D,Gage F H.Paired related homeobox protein 1 is a regulator of stemness in adult neural stem/progenitor cells[J].J Neurosci,2013,33(9):4066

[22]Ihida-Stansbury K,Mckean D M,Gebb S A,et al.Paired-related homeobox gene Prx1 is required for pulmonary vascular development[J].Circ Res,2004,94(11):1507

[23]Reichert M,Takano S,Von Burstin J,et al.The Prrx1 homeodomain transcription factor plays a central role in pancreatic regeneration and carcinogenesis[J].Genes Dev,2013,27(3):288

[24]Sugiyama M,Hasegawa H,Ito S,et al.Paired related homeobox 1 is associated with the invasive properties of glioblastoma cells[J].Oncol Rep,2015,33(3):1123

[25]Wodarz A,Nusse R.Mechanisms of Wnt signaling in development[J].Annu Rev Cell Dev Biol,1998，14：59

[26]Lucero O M,Dawson D W,Moon R T,et al.A re-evaluation of the“oncogenic”Nature of Wnt/beta-catenin signaling in melanoma and other cancers[J].Curr Oncol Rep,2010,12(5):314

[27]Kim H J,Schleiffarth J R,Jessurun J,et al.Wnt5 signaling in vertebrate pancreas development[J].BMC Biol,2005，3:23

[28]Kremenevskaja N,Von Wasielewski R,Rao A S,et al.Wnt-5a has tumor suppressor activity in thyroid carcinoma[J].Oncogene,2005,24(13):2144

[29]Kurayoshi M,Oue N,Yamamoto H,et al.Expression of Wnt-5a is correlated with aggressiveness of gastric cancer by stimulating cell migration and invasion[J].Cancer Res,2006,66(21):10439

[30]Clevers H,Nusse R.Wnt/β-Catenin signaling and disease[J].Cell,2012,149(6):1192

[31]Cselenyi C S,Jernigan K K,Jahinci E,et al.LRP6 transduces a canonical Wnt signal independently of Axin degradation by inhibiting GSK3’s phosphorylation of beta-catenin[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2008,105(23):8032

[32]Arend R C,Londo?o-Joshi A I,Straughn J M,et al.The Wnt/βcatenin pathway in ovarian cancer:a review[J].Gynecol Oncol,2013,131(3):772

[33]Aberle H,Schwartz H,Kemler R.Cadherin-catenin complex:protein interactions and their implications for cadherin function[J].J Cell Biochem,1996,61(4):514

[34]Oyama T,Kanai Y,Ochiai A,et al.A truncated beta-catenin disrupts the interaction between E-cadherin and alpha-catenin:a cause of loss of intercellular adhesiveness in human cancer cell lines[J].Cancer Res,1994,54(23):6282

[35]Qi L,Song W,Liu Z,et al.Wnt3a promotes the vasculogenic mimicry formation of colon cancer via Wnt/β-Catenin signaling[J].Int J Mol Sci,2015,16(8):18564

[36]湯曉穎,龐林賓,宋立文,等.XAV939抑制人肝癌HepG2細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,35(3):345