5種消毒藥對羊舍大腸桿菌的現(xiàn)場消毒效果檢測

杜光波1 劉長林 朱洪巖

（1.淮安生物工程高等職業(yè)學校，江蘇淮安 223200；2.淮安市漣水縣畜牧獸醫(yī)站 江蘇淮安 223400）

消毒藥物的選擇，是消毒成敗的關鍵。對于不同的消毒對象和消毒場所，應該選擇不同的消毒藥物。并且，病原體對消毒藥物也有耐藥性，不宜在同一個場地長期使用同一類消毒藥物。對于如何正確選擇消毒藥物，許多養(yǎng)殖戶不太清楚，只是聽從推銷人員的建議，或者根據(jù)消毒藥物說明書選擇消毒藥物。對于大型養(yǎng)殖戶，建議定期檢測消毒藥物對常見病原的消毒效果，以便科學選擇消毒藥物，達到理想的消毒效果。

1 材料

1.1 消毒藥物

5%的百毒殺，18%的過氧乙酸溶液，50%戊二醛，10%的聚維酮碘，消毒靈（含有效氯10%的二氯異氰尿酸鈉），從獸藥市場隨機購買，經(jīng)過相關部門質量檢測，為合格產(chǎn)品。

1.2 培養(yǎng)基

麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基（購于北京奧博星生物科技有限公司）。

1.3 消毒場所

某大型種羊場三棟獨立羔羊舍，每棟羊舍60間羊圈，隨機抽取一棟羊舍進行消毒檢測。

1.4 儀器設備

高壓電動噴霧器、高壓水槍、電熱恒溫培養(yǎng)箱、體視顯微鏡、無菌工作臺、恒溫水浴振蕩器等等。

2 方法

2.1 制定消毒程序[1，3]

消毒前，詳細制定消毒程序，有利于消毒工作順利開展。本次羊舍地面消毒程序為：測量每間羊圈地面面積→計算總消毒面積→確定消毒方法→選擇消毒藥物→確定消毒藥物使用濃度→計算消毒液用量→計算消毒藥用量→準備消毒和采樣工具→打掃前采樣→打掃、沖洗地面→打掃后采樣→配制消毒藥物→實施消毒→消毒后采樣→樣品處理與培養(yǎng)→消毒效果評價。

2.2 羊舍地面面積測量

每棟羊舍有60間羊圈，每間羊圈長5m，寬3m，地面面積15m2，每棟羊舍合計900m2。

2.3 消毒方法選擇

由于羊舍處于開放空間，不宜熏蒸消毒，所以選擇噴灑消毒方法。

2.4 計算消毒液用量[1]

消毒藥物稀釋濃度按照消毒藥說明書標定的使用濃度，消毒液用量按照一般污染場地用量500ml/m2，一間羊圈面積為15m2，需要消毒液：500ml/m2×15m2=7500ml，一棟羊舍需要消毒液7500×60=450000ml。

2.5 打掃前羊舍地面采樣

2.5.1 采樣點選擇[2]

每棟羊舍選取兩頭各2間羊圈，中間2間羊圈，共6間羊圈作為采樣圈；每間羊圈地面選擇四角4點和中間1點，共5點為采樣點，每個點采集面積25cm2，每棟羊舍總共采樣面積為6×5×25=750m2。

2.5.2 采樣方法[2]

用鐵絲圈成5×5cm2的方框，酒精燈燒紅滅菌，冷卻后平放于采樣點地面，用滅菌的棉簽蘸取滅菌生理鹽水，在鐵環(huán)區(qū)域的采樣地面由中心向四周涂布，將涂布后的棉簽頭部置于滅菌培養(yǎng)皿中，折斷手持部位的木柄，每點用3個棉簽涂布3次。密封培養(yǎng)皿，做好標記后立即送實驗室進行細菌培養(yǎng)。

2.6 地面打掃沖洗

先打掃羊糞，然后用高壓水槍反復洗刷地面。

2.7 打掃后地面采樣

采樣方法同2.5。

2.8 配制消毒藥物[3]

2.8.1 百毒殺

按照百毒殺說明書，畜舍噴霧消毒用濃度為1：500～600，按照1：5 0 0配制。每間羊圈地面消毒需要百毒殺量為7500×0.2%=15ml，一棟羊舍要量為450000ml×0.2%=900ml，配制方法為，取450kg自來水，加入900ml百毒殺，攪拌均勻即可用于噴灑消毒。

2.8.2 過氧乙酸

按照過氧乙酸說明書，畜舍噴霧消毒用濃度為1：200～400，按照1：200配制。每間羊圈地面消毒需要過氧乙酸量為7500×0.5%=37.5ml，一棟羊舍要量為450000ml×0.5%=2250ml，配制方法為，取450kg自來水，加入2250ml 過氧乙酸，攪拌均勻即可用于噴灑消毒。

2.8.3 戊二醛

按照戊二醛說明書，畜舍噴霧消毒用濃度為1：200～400，按照1：2 0 0配制。每間羊圈地面消毒需要戊二醛量為7500×0.5%=37.5ml，一棟羊舍要量為450000ml×0.5%=2250ml，配制方法為，取450kg自來水，加入2250ml 戊二醛，攪拌均勻即可用于噴灑消毒。

2.8.4 聚維酮碘

按照聚維酮碘說明書，畜舍噴霧消毒用濃度為1：1000～1600，按照1：1000配制。每間羊圈地面消毒需要聚維酮碘量為7 5 0 0×0.1%=7 5 m l，一棟羊舍要量為450000ml×0.1%=450ml，配制方法為，取450kg自來水，加入450ml 聚維酮碘，攪拌均勻即可用于噴灑消毒。

2.8.5 消毒靈（二氯異氰尿酸鈉）

按照消毒靈說明書，畜舍噴霧消毒用濃度為1：500～1000，按照1：5 0 0配制。每間羊圈地面消毒需要消毒靈量為7500×0.2%=15g，一棟羊舍要量為450000ml×0.2%=900g，配制方法為，取450kg自來水，加入900g 消毒靈，攪拌均勻即可用于噴灑消毒。

2.9 噴灑操作

將羊群移出，使用電動高壓噴霧器對每個羊圈地面進行全面噴灑消毒，關閉門窗1h，地面取樣后，再打開門窗，通風1h，移入羊群。

2.10 消毒后羊圈地面采樣

采樣方法同2.5。

2.11 樣品倍比稀釋、接種與細菌培養(yǎng)

取3個1000ml滅菌三角燒瓶，分別標記為打掃前、打掃后和消毒后。分別將打掃前、打掃后和消毒后的6間羊圈的采樣棉簽頭（每個采樣點3個棉簽，共270個棉簽）放在對應的標簽瓶里，分別加入750ml滅菌生理鹽水，充分震蕩10分鐘。

從每個樣品瓶中取出1ml混懸液，無菌操作，10倍比稀釋到10-4，共5個稀釋梯度，即100～10-4，每個稀釋度各取1ml稀釋液接種2塊麥康凱瓊脂平板，37℃恒溫箱中靜置2h后再分別倒扣培養(yǎng)24h。

2.12 培養(yǎng)結果觀察與細菌計數(shù)

每塊平板在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h后取出，在體視顯微鏡下觀察菌落生長情況，并計數(shù)每塊板的菌落總數(shù)，計算消毒前后地面大腸桿菌平均數(shù)。

3 結果

3.1 細菌培養(yǎng)結果

打掃前，10-3和10-4呈現(xiàn)單個紅色可數(shù)菌落，100、10-1和10-2菌落密集不可數(shù)。打掃沖洗后，10-2和10-3呈現(xiàn)單個紅色可數(shù)菌落，100、10-1、10-2菌落密集不可數(shù)，10-4無菌落生長。噴灑消毒藥后，10-3～10-4無菌落生長，具體情況見表1。

表1 打掃前后與消毒前后樣品細菌培養(yǎng)結果

3.2 打掃前后與消毒前后羊舍地面大腸桿菌平均數(shù)

表2 打掃前后與消毒前后羊舍地面大腸桿菌平均數(shù)（CFU/cm2）

3.3 打掃沖洗對羊舍地面大腸桿菌清除率

表3 打掃沖洗對羊舍地面大腸桿菌清除率及消毒藥物殺菌率

4 小結與討論

（1）大腸桿菌是羊場地面主要污染菌種，羊場地面大腸桿菌污染主要來源于羊群糞便。正常羊群糞便中就含有大量的大腸桿菌，其中有些可能是致病性大腸桿菌，能夠引起羔羊腹瀉。大腸桿菌很容易培養(yǎng)，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)紅色菌落，其他細菌很難在這種培養(yǎng)基上生長，所以，可以用大腸桿菌作為檢測消毒藥物消毒效果的指示菌[4-5]。

（2）由于羊舍一周沒有徹底沖洗，地面較臟，羊糞較多，所以地面大腸桿菌污染嚴重，從表2可以看出，達到54000CFU/cm2。

（3）從表3可以看出，打掃沖洗對羊舍地面大腸桿菌清除率比較高，達到了82.03%?？梢?，經(jīng)常打掃沖洗，能夠有效減少羊舍地面污染。

（4）從表3可以看出，戊二醛和二氯異氰尿酸鈉對大腸桿菌的消毒效果較好，都達到99%以上。相比較，百毒殺對大腸桿菌的消毒效果較差。

[1]杜光波，王兵主編.動物防疫與檢疫技術[M].蘇州：蘇州大學出版社，2012.

[2]張振興，姜平主編.獸醫(yī)消毒技術[M].北京：中國農業(yè)出版社，2010.

[3]陳光明，杜光波.鵝場系統(tǒng)消毒技術[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2012，（6）：74-75.

[4][美]Y.M.Saif.禽病學（第12版）[M].北京：中國農業(yè)出版社，2012：811-870.

[5]張永志.致鵝卵黃性腹膜炎性大腸桿菌的部分生物學特性研究[D].揚州大學，2008.