非洲豬瘟病毒免疫逃逸機(jī)制探索：DP96R拮抗

非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一種急性、熱性、高度傳染性疾病，可感染家豬、野豬和軟蜱類(lèi)等。ASFV是一種具有囊膜的核質(zhì)大DNA病毒，在病毒分類(lèi)中隸屬于非洲豬瘟病毒科、非洲豬瘟病毒屬，且為該病毒科唯一成員。ASFV的基因組大小介于170 kb～190 kb之間，大致分為中央保守區(qū)和左右兩側(cè)可變區(qū)，可變區(qū)多編碼表達(dá)病毒復(fù)制非必需基因，其編碼蛋白可影響病毒毒力或調(diào)控宿主免疫系統(tǒng)，包括多基因家族(MGF)360、MGF505/530、NL-S和L83L等。

近期發(fā)表于《Biochemical and Biophysical Research Communications》的一篇文章中，作者闡述了ASFV China 2018/1毒株編碼的毒力蛋白DP96R對(duì)環(huán)狀GMP-AMP合酶(cGAS)介導(dǎo)信號(hào)通路cGAS-STING-TBK1的調(diào)控作用。cGAS是近期報(bào)道的細(xì)胞質(zhì)中一種關(guān)鍵DNA模式識(shí)別受體，在識(shí)別、結(jié)合胞質(zhì)DNA后被激活，催化產(chǎn)生第二信使cGAMP，cGAMP激活 STING(干擾素基因刺激蛋白)?；罨?STING募集和磷酸化 TBK1、IRF3，pIRF3形成同源二聚體后進(jìn)入細(xì)胞核并結(jié)合IFN啟動(dòng)子，誘導(dǎo)I型干擾素上調(diào)表達(dá)。作者將病毒DP96R與cGAS、STING共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DP96R能夠抑制cGAS和STING過(guò)表達(dá)引起的IFN-β和 TNF-α mRNA水平增加；通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，作者發(fā)現(xiàn)DP96R能夠抑制cGAS/STING、STING/cGAMP引起的 IFN-β、ISRE和 NF-κB啟動(dòng)子的激活。以上結(jié)果表明DP96R蛋白對(duì)cGAS-STING-TBK1信號(hào)通路具有顯著抑制作用。

為了進(jìn)一步研究DP96R的作用機(jī)制，研究人員將TBK1或IRF3-5D同DP96R、雙熒光素酶報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染HEK293T，研究發(fā)現(xiàn)DP96R能夠抑制TBK1過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的 IFN-β-luc和 PRDIII-I-luc激活，且呈劑量依賴(lài)性；DP96R不抑制IRF3-5D和IFN-β蛋白誘導(dǎo)的ISRE啟動(dòng)子激活。此外，DP96R能夠抑制TBK1、IKKβ而非p65過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的 NF-κB啟動(dòng)子激活。Western blot結(jié)果表明，DP96R可抑制TBK1外源性表達(dá)，也抑制cGAS/STING刺激引起的TBK1和IRF3磷酸化?？共《緦?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DP96R可抑制TBK1而非IRF3-5D介導(dǎo)的抗病毒效應(yīng)，促進(jìn)VSV-GFP的表達(dá)。最后，該研究通過(guò)將DP96R分節(jié)段進(jìn)行表達(dá)，鑒定出DP96R C端的30～96位氨基酸是其主要的免疫抑制功能區(qū)。

目前，我國(guó)16個(gè)省及直轄市已經(jīng)呈散發(fā)出現(xiàn)非洲豬瘟疫情。ASFV尚無(wú)商品化疫苗問(wèn)世，現(xiàn)有研究表明，研制基因缺失弱毒活疫苗是ASFV疫苗研發(fā)的首選策略。DP96R蛋白是ASFV毒力蛋白，DP96R基因缺失后病毒毒力減弱，該文章通過(guò)對(duì)DP96R抑制Ⅰ型IFN表達(dá)的機(jī)制進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)DP96R通過(guò)抑制TBK1磷酸化，以及抑制TBK1的表達(dá)發(fā)揮其免疫抑制作用，但DP96R在細(xì)胞內(nèi)的靶標(biāo)作用蛋白仍需進(jìn)一步鑒定。相信隨著對(duì)非洲豬瘟病毒基因組的持續(xù)深入研究，以及對(duì)其免疫逃逸蛋白作用機(jī)制的進(jìn)一步鑒定，必將對(duì)非洲豬瘟基因缺失疫苗的研發(fā)提供更多的理論指導(dǎo)。

評(píng)述論文來(lái)源：Wang Xi-xi,Wu Jing,Wu Ying-tong,et al.Inhibition of cGAS-STING-TBK1 signaling pathway by DP96R of ASFV China 2018/1[J].Biochem Biophys Res Commun,October 2018.DOI:10.1016/j.bbrc.2018.10.103